URSA患者绒毛组织中细胞凋亡及血管新生异常与m iR-1 55表达的关系

毕 颖，陈湘玲，董明慧，王维香

（武汉市红十字会医院妇产科，武汉 430012）

URSA患者绒毛组织中细胞凋亡及血管新生异常与m iR-1 55表达的关系

毕 颖，陈湘玲，董明慧，王维香

（武汉市红十字会医院妇产科，武汉 430012）

目的：探究URSA患者绒毛组织中细胞凋亡及血管新生异常与miR-1 55表达的关系。方法：选择2014年1月～2015年1月来我院妇产科行清宫术后的孕妇的标本64例，其中URSA患者38例，剩余26例，将64例患者按照是否为URSA患者分为两组，即URSA组、对照组。对miR-155的表达量与细胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl及血管新生分子VEGF、HIF-1α、sFlt-1的表达量记录，并与miR-155的表达量进行对比。结果：miR-155的表达量与细胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl的表达量呈正相关，与血管新生分子VEGF、HIF-1α的表达量呈正相关，与sFlt-1的表达量呈负相关，且两组患者的miR-155、Bcl-2、Bcl-xl的表达量不同，URSA组显著低于对照组，且URSA组miR-155、VEGF、HIF-1α的表达量显著低于对照组，sFlt-1的表达量则显著高于对照组。结论：URSA绒毛组织中细胞的凋亡及血管新生与miR-155存在关系，且miR-155的表达量下降则会导致绒毛组织中的细胞过度凋亡。

URSA患者；绒毛组织；细胞凋亡；血管新生；miR-1 55

复发性流产（RSA）是指适龄女性发生自然流产的的次数在两次以上，通常超过40%［1］的产妇发生复发性流产的原因明确，主要是由手术、遗传、激素紊乱、细菌感染以及自身抵抗力差等原因［2］引起的。而另外低于60%的复发性流产患者则原因尚未明确，这类患者流产通常被称为不明原因复发性流产（URSA）。相关报道指出URSA的发病机制是由较多因素参与的，较为复杂。而且URSA的相关发病机制与URSA的治疗效果间的相关联系也没有确切报道。但是有学者指出［3］，URSA发生时会出现绒毛组织中细胞凋亡或新生血管障碍等现象。微小RNA-155（miR-155）是一类近年来才发现的微小RNA，研究发现，m iR-155可以参与多种生物学反应［4］。包括参与细胞的细胞增值以及血管新生等，有报道指出［5］，在多种癌组织中均可发现m iR-155，并且证实miR-155与肿瘤组织中的血管新生、细胞凋亡等反应均有关，而妊娠期往往滋养细胞的浸润能力较强，其生物活性与肿瘤细胞的一系列变化具有相似之处，因此笔者认为miR-155在URSA患者的绒毛组织中的表达与URSA患者绒毛组织中细胞凋亡及血管新生存在一定关系，为了探讨miR-155与URSA患者绒毛组织中细胞凋亡，及血管新生的关系，笔者对绒毛组织中的miR-155以及细胞凋亡分子和血管新生分子进行了分析，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 临床资料选择2014年1月～2015年1月来我院妇产科行清宫术后的孕妇的标本64例，其中URSA患者38例，剩余26例为产妇因非疾病因素通过人工流产术终止妊娠的的患者。所有患者年龄在23～33岁，孕龄50～66d。将64例患者按照是否为URSA患者分为两组，即URSA组、对照组，URSA组患者38例，年龄23～32岁，平均年龄（28.4±3.5）岁，孕龄50～64d，平均孕龄（57.3±7.4）d.该组患者均表现为腹痛、或者伴有阴道流血，经B超诊断为无原始心管搏动，且经临床诊断为难免流产。另外入选该组的URSA患者自然流产次数超过两次，并且排除明确原因导致的重复性流产患者。其中连续流产两次的患者16例，连续流产3次化妆你和10例，连续流产四次患者12例。对照组患者26例，年龄24～33岁，平均年龄（28.5±3.4）岁，孕龄52～66d，平均孕龄（57.5±7.3）d.该组患者经临床确诊为正常怀孕且胚胎发育正常，同时不存在先兆流产症状。两组患者在年龄、孕龄等方面不存在统计学差异（P>0.05）具有可比性。

1.2 方法将两组患者经清宫术后获得的绒毛组织标本使用生理盐水多次清洗后，即刻放入液氮中进行冷冻。然后置零下负80度冰箱中保存待用。

1.2.1 仪器与试剂RNA提取和PCR反应试剂盒来自于北京百奥森泰生物技术有限公司PCR仪来自于赛飞有限公司.

1.2.2 mRNA表达量检测方法取处理过的绒毛组织标本适量，抽提总mRNA及总miRNA，并将两类RNA进行反转录为cDNA标本。其中经mRNA转录而来的cDNA标本则用于与凋亡分子及血管新生分子（Bcl-2、Bcl-xl、VEGF、HIF-1、sFlt-1）有关的PCR扩增，其中内参照选用B-actin基因；经miRNA转录而来的cDNA标本则用于与miR-155有关的PCR扩增，内参照基因为U6基因。PCR扩增反应后计算相应基因或miRNA的含量。

1.3 评价指标（1）对miR-155的表达量与细胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl的表达量进行记录并对比；

（2）记录VEGF、HIF-1α、sFlt-1的表达量，并与miR-155的表达量进行对比；

1.4 统计分析本次研究所获得数据均使用分析软件SPSS17.0进行统计分析，计量资料用（±s）表示，组间比较采用t检验，以P<0.05为统计学存在差异。

2 结果

2.1 两组妇女绒毛组织中m iR-155与细胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-x l的表达量分别对两组患者绒毛组织中的miR-155的表达量以及Bcl-2、Bcl-xl的表达量进行了测定，结果显示miR-155的表达量与细胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl的表达量呈正相关，且两组患者的miR-155、Bcl-2、Bcl-xl的表达量不同，URSA组显著低于对照组（P<0.05），详见表1.

表1 两组妇女绒毛组织中m iR-155与细胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl的表达量

2.2 两组妇女绒毛组织中m iR-155与血管新生分子VEGF、HIF-1α、sFlt-1的表达量两组患者miR-155的表达量与血管新生分子VEGF、HIF-1α的表达量呈正相关，与sFlt-1的表达量呈负相关，且URSA组miR-155、VEGF、HIF-1α的表达量显著低于对照组（P<0.05），sFlt-1的表达量则显著高于对照组（P<0.05），详见表2.

表2 两组妇女绒毛组织中m iR-155与血管新生分子VEGF、H IF-1α、sFlt-1的表达量

3 讨论

相关报道指出，超过40%的重复流产患者（RSA）主要是由解剖因素、染色体因素、生殖道感染、自身免疫机制等因素引起的。而并无确定原因引起的RSA则被称为URSA。因为治病因素不明确，所以URSA患者治疗起来也相对麻烦，并且由于致病因无法确定，所以很难在根本上阻止患者重复流产的发生，进而加重了患者再次妊娠时流产发生的风险。近年来，有关URSA的病因及病理研究主要集中在绒毛组织有关的细胞改变方面，因为有学者发现URSA发生是会伴有绒毛组织细胞的凋亡及血管新生等生化反应发生［7］。这一生化反应恰好与肿瘤组织的发展存在共同点，肿瘤组织在增生时会伴有细胞的增值及凋亡以及血管新生等。

相关研究指出，在多数肿瘤组织中发现了微小RNA（miRNA），miRNA是一类长度及短的RNA，但是其功能却相当强大，它具有调控基因表达，并且还会参与细胞的凋亡及增值，以及血管新生等一系列生化调控反应。有报道指出MiR-155的异常表达会促进肿瘤组织中细胞的异常增殖以及血管的新生。由于URSA患者的绒毛组织中也存在细胞的增值与凋亡以及血管新生等，可以推断URSA的产生也可能与miR-155表达异常有关。为了证实该推测，笔者分别对URSA患者，以及自愿人工流产的健康女性的组织进行了MiR-155含量测定，以及细胞凋亡分子（Bcl-2、Bcl-xl）及血管新生分子（VEGF、HIF-1α、sFlt-1）的测定。细胞凋亡分子具有抑制细胞凋亡的作用［7］，因此如果某组织中出现细胞过度凋亡的现象发生，则说明该组织中细胞凋亡分子（Bcl-2、Bcl-xl）的表达量下降。而血管新生分子（VEGF、HIF-1α、sFlt-1）则与血管的生成有关，HIF-1α与VEGF具有协同作用，当二者表达量高时则会促进血管新生，而sFlt-1与VEGF具有拮抗作用，即当sFlt-1表达量较高时则会抑制血管新生。

本次研究结果显示，两组患者绒毛组织中的miR-155的表达量细胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl的表达量呈正相关，与血管新生分子VEGF、HIF-1α的表达量呈正相关，与sFlt-1的表达量呈负相关。该结果说明患者URSA绒毛组织中细胞的凋亡及血管新生与miR-155存在关系，该结论与杜宏英等人的研究结果相一致。另外，本研究结果还显示两组患者的miR-155、Bcl-2、Bcl-xl的表达量不同，URSA组显著低于对照组，两组患者miR-155的表达量且URSA组miR-155、VEGF、HIF-1α的表达量显著低于对照组，sFlt-1的表达量则显著高于对照组。这进一步证明了URSA患者绒毛组织中细胞的凋亡及血管新生与miR-155存在关系，而且URSA患者绒毛组织中的细胞过度凋亡，且新生血管量减少，从而使胎儿无法生存。

综上所述，URSA绒毛组织中细胞的凋亡及血管新生与miR-155存在关系，且miR-155的表达量下降则会导致绒毛组织中的细胞过度凋亡，新生血管减少。从而影响胎儿的生存环境。

［1］ 王婷, 丛林, 朱立新, 等. 原因不明性复发性流产91例主动免疫治疗效果分析［J］. 安徽医学, 2013, 34(8): 1085-1088.

［2］ Zhang XX, Kang XM, Zhao AM. Regulation of CD4+ FOXP3+T cells by CCI。20／CCR6 axis in early unexplained recurrent miscarriage patients［J］. Genet Mol Res, 2015, 14(3): 9145-91 54.

［3］ Ata B., Tan SI., Shehata F, et al. A systematic review of intravenous immunoglobulin for treatment of unexplained recurrent miscarriage E［J］. FerfilSteril, 2011, 95(3): 1080—1085

［4］ Wang F, Zhou J, Zhang Y, et a1. the value of microrna 1 55 as a prognostic factor for survival in non—small cell lung cancer: A meta analysis［J］. PLoS One, 2015, 10(8): e0136889.

［5］ 宋传贵, 吴雪英, 傅芳萌, 等. miR一155预测乳腺癌侵袭及预后的研究［J］. 中华外科杂志, 2012, 50: 1011—1014.

The relationship between apoptosis and angiogenesis in and m iR-1 55 expression in the villi of patients w ith URSA

Bi Ying, Chen Xiang-ling, Dong Ming-hui, Wang Wei-xiang
(Department of Obstetrics and Gynecology, Wuhan Red Cross Hospital, Wuhan 430012, China)

Objective To explore the relationship between cell apoptosis and proliferation and miR-1 55 expression in URSA patients. M ethods Choose 2014 January to 2015 years 1 month to my courtyard department of gynaecology and obstetrics, pregnant women after curettage specimens from 64 patients with, including 38 cases of patients with Ursa, rest of 26 cases, 64 patients according to whether Ursa patients were divided into two groups, namely Ursa patients group and control group. The expression amount of miR-155 and the expression of Bcl-2, Bcl-xl, sFlt-1, HIF-1 and VEGF were recorded and compared with the expression of miR-155. Results The expression level of miR-155 was positively correlated with the expression of Bcl-2 and Bcl-xl, There was a positive correlation between the expression of VEGF and HIF-1, and negatively correlated with the expression of sFlt-1, And the expression of miR-155, Bcl-2 and Bcl-xl were different in the two groups. The URSA group was significantly lower than the control group, and the expression of miR-155, VEGF and HIF-1 in URSA group was significantly lower than that in control group, and the expression of sFlt-1 was significantly higher than that in control group. Conclusion The apoptosis and angiogenesis of URSA were related to the presence of miR-155, and the decreased expression of miR-155 could lead to excessive cell apoptosis in the chorionic villi;

URSA patients; chorionic villi; apoptosis; angiogenesis; miR-1 55

R714.21

A

1673-016X（2017）03-0067-03

2017-01-22

毕颖，E-mail：2239574779@qq.com