黑果腺肋花楸不定芽诱导与增殖研究

赵健竹，孙晓泽*，辛广，张文颖，刘影

（1.鞍山师范学院化学与生命科学学院，辽宁鞍山114007；2.沈阳农业大学食品学院，辽宁沈阳110866）

黑果腺肋花楸不定芽诱导与增殖研究

赵健竹1，孙晓泽1*，辛广2，张文颖1，刘影1

（1.鞍山师范学院化学与生命科学学院，辽宁鞍山114007；2.沈阳农业大学食品学院，辽宁沈阳110866）

本研究以黑果腺肋花楸为试验材料，分别选取茎尖、茎段及叶片作为外植体，接种到不同植物激素种类及浓度配比的培养基上，进行诱导和增殖培养。结果表明：茎尖诱导不定芽效率最高，效果最好，茎段和叶片作为外植体诱导率很低，确定茎尖是不定芽诱导的最理想材料；茎尖诱导的最适培养基为MS+6-BA 2.0毫克/升+NAA 0.5毫克/升，诱导率达96.7%；不定芽增殖的最适培养基为MS+6-BA 3毫克/升+NAA 0.5毫克/升，平均增殖倍数为10.89。

黑果腺肋花楸；外植体；培养基；诱导；增殖

黑果腺肋花楸，是集食用、药用、园林绿化和生态价值于一体的珍贵树种，适应性强、结果早、经济价值高，市场前景巨大[1]。20世纪90年代，黑果腺肋花楸被引入我国，并定植于辽西地区[2]。因其传统的播种、扦插繁殖困难，野生资源破坏严重，目前绿化需求量大，应用组织培养技术可以获取大量组培苗，促进规模化生产，供应市场。

药用价值：果实及其提取物具有保健作用，对心脏病、高血压等疾病的治疗有显著效果，普遍应用于功能食品和医药工业[3]；观赏价值：由于树形优美、观赏期长，是春天观叶、夏天看花、秋天看果的优质绿化树种，可单独种植，或者大量种植在草坪、庭院、路旁等地方[4]；生态价值：黑果腺肋花楸抗旱性较强，生长所需水分很少，在干旱地区完全可以存活，浅根系发达，吸枝萌蘖力强，对表层土壤固持力强，病虫害少，抗风害和冰雹灾害，生命周期较长，具有良好的保持水土效果，生态稳定能力强[5]。

1 材料与方法

本研究以茎尖、茎段、叶片三种外植体为基本材料，对黑果腺肋花楸不定芽进行诱导培养。再以茎尖为外植体，分别接种到9种不同的诱导培养基上，利用茎尖为外植体，直接诱导获得不定芽，将不定芽进行增殖培养，提高增殖系数，从而获得大量组培苗。

2 结果与分析

2.1 不同外植体对不定芽诱导的影响

将黑果腺肋花楸茎尖、叶片及茎段分别接种到M S+ 6-B A2.0毫克/升+N AA0.5毫克/升培养基中，经诱导培养30天后，观察并统计诱导成活的外植体个数，计算出不同外植体的诱导率，见表1。

表1 不同外植体对不定芽诱导的影响

从表1可以看出：茎尖对不定芽的诱导率最高，为93.30%，茎段对不定芽的诱导率较低，为43.33%，而叶片对不定芽的诱导率为0。

三种外植体接种后，坚持每天观察外植体的变化情况，茎尖在接种9天后可见接种的茎尖向上生长，在基部有小的凸起为萌动的不定芽，13天后可明显地观察到小的不定芽；茎段在接种20天后，可见部分茎段出现变化；叶片接种后一直进行观察，无明显变化，其不定芽诱导率最低。由此得出，茎尖对不定芽的诱导率最高，为93.30%，茎尖是不定芽诱导的最理想材料。

2.2 不同培养基对茎尖诱导成活的影响

将茎尖分别接种到9种以M S为基本培养附加不同植物激素种类及浓度的完全培养基上，在培养室进行诱导培养，优选茎尖诱导的最佳培养基，观察并记录得到诱导成活率，见表2。

表2 不同外源激素组合对茎尖诱导成活情况

从表2看出，茎尖最佳的诱导培养基为M S+6-B A 2.0毫克/升+N AA 0.5毫克/升，诱导率为93.30%，诱导率最高，诱导效果最好。

2.3 不同培养基对不定芽增殖的影响

经诱导培养获得的不定芽，再分别接种到以M S为基本培养基附加不同浓度6-B A和N AA配比制成的6种培养基上，接种情况及增殖结果，见表3。

表3 不同外源激素组合对不定芽增殖的影响

经增殖培养17天后，可观察到不定芽增殖分化出丛生芽，培养至25天，继续分苗，统计每个不定芽分化出的苗数，并转接到增殖培养基上，进行继2代培养。将诱导获得的不定芽转接至增殖培养基情况，见图1；不定芽转接后，经增殖培养25天分化出丛生芽情况，见图2。

结合表3、图1和图2，不定芽分别转接到6种由不同外源激素组合的M S培养基中，不定芽增殖的最适培养基为M S+6-B A 3毫克/升+N AA 0.5毫克/升，增殖倍数为10.89。

图1 黑果腺肋花楸不定芽转接至增殖培养基情况

图2 黑果腺肋花楸不定芽转接后分化出丛生芽情况

3 讨论

本试验分别采取黑果腺肋花楸茎尖、叶片及茎段为外植体进行不定芽诱导，茎尖诱导率最高，而叶片诱导不定芽无变化，结果表示不同外植体对不同激素的选择性很大；在相同的基本培养基条件下，6-B A和N AA的浓度对芽增殖效果影响很大，对于黑果腺肋花楸不定芽增殖的最佳培养基为M S+6-B A 3毫克/升+N AA 0.5毫克/升。

[1]付艳.黑果腺肋花楸的应用价值及发展前景[J].C hina s c ien c e an d T e c hno l og y R e v ie w,2012.

[2]王鹏.欧美国家黑果腺肋花楸栽培技术研究现状[J].中南林业调查规划,2014,(01)∶54-57.

[3]于雪,胡文忠,姜爱丽,陈妍竹,刘星伯.黑果腺肋花楸营养物质与功效的研究进展[J].食品工业科技,2016(10)∶396-400.

[4]张连生,韩文忠,姜镇荣.黑果腺肋花楸——前途广阔的绿化新品种[J].农业科技与信息(现代园林),2007,(08)∶63-64.

[5]高晔华.黑果腺肋花楸组培快繁体系的研究[D].延边大学,2013.

1.3 不易产生耐药性及药物残留

目前，养殖业普遍存在添加抗生素和化学合成药物滥用的现象，尤其在饲料中长期微量添加抗生素的情况下，更易导致耐药性和药物残留的产生。而中草药添加剂是通过“扶正驱邪”提高动物机体自身的抵抗力，从而达到消除病菌的效果，因此，不易产生耐药性，也不会导致药物残留。

1.4 中草药功能齐全

中草药具有营养作用，牛为草食动物，中草药中所含的纤维素、蛋白质、脂质、矿物质、维生素等可以为肉牛生长提供营养；能够提高免疫力，如常用的补益方剂四君子汤、六味地黄汤和四物汤等，对机体体液免疫和细胞免疫都有促进作用；中草药具有类激素作用，可调节机体新陈代谢，如黄芪可增强细胞的生理代谢活动，桂皮、胡椒、茴香等中草药可提高育肥猪的食欲、增强其抗病能力、促进生长。有些中草药还具有抑菌、抗菌、驱虫等作用，是极好的抗生素替代品，如板蓝根、黄柏、黄芩、大蒜等，对大多细菌、真菌等都具有抑制或杀灭作用。如青蒿、槟榔、南瓜子亦是天然的驱虫药。

2 中草药添加剂可提高肉牛生产性能

常见用于肉牛饲料添加剂的中草药方剂有健胃散、温脾散、扶正解毒散、清瘟败毒散等，其组方绝大多数都具有健脾、开胃、消食下气、补益气血、提高免疫力等功效。常见使用于中草药饲料添加剂的组方药物有山楂、麦芽、神曲、厚朴、白术、黄芪、当归、肉桂、鱼腥草、槟榔等。将该类中草药添加于肉牛的日粮中可增进食欲、促进生长，增加屠宰率，明显提高肉牛的生产性能。同时，中草药添加剂由于其天然性、无毒副作用及对免疫机能的提升，将其应用于肉牛饲料中，可以减少肉牛生长及养殖过程中，因疾病和抗生素滥用而导致的生长发育迟缓。

3 中草药添加剂可提高牛肉品质

首先，中草药添加剂能提高动物胴体的瘦肉率。中草药中含有的蛋白质、脂肪、微量元素、甜菜碱及胆碱等营养物质，能促进蛋白质的消化吸收和沉积，从而使动物机体增“瘦”减“肥”；其次，中草药可通过降低牛肉中的胆固醇含量，提高牛肉的品质。如大黄、决明子、虎杖、刺五加等，可通过促进脂类转动和排泄，增加脂肪的排出，减少外源性胆固醇的吸收。泽泻、绞股蓝、大蒜等，可通过减少内源性脂类的合成，降低胆固醇的合成。另外，中草药添加剂可增加肉产品中的营养物质。中草药中富含动物机体所需的各种营养物质，作为添加剂可补充、完善和平衡饲料的营养成分，其中部分有益成分可在肌肉组织中沉积，提高牛肉的品质，如茶叶可成倍提高肉中的维生素E含量，杜仲可提高肌肉中肌原蛋白的含量，改善牛肉品质。

4 中草药添加剂可增加肉牛的免疫机能

中草药的滋补类药物和部分扶正祛邪类药物，能提高动物机体特异性和非特异性免疫系统功能，增强免疫力，利用中草药对动物机体的阴阳整体状况进行调节，使之趋于平衡，可达到“正气存内，邪不可干”的效果。同时，该类中草药还可影响机体血液生化指标，改善机体整体生理机能状况。实践中，常见的增强机体免疫力的中草药有黄芪、党参、金银花、当归、白术、甘草、淫羊霍、穿心莲、板蓝根、鱼腥草等。高辉等人采用不同的补益混合方剂添加到犊牛的日粮中，研究中草药添加剂对犊牛免疫功能及血液生化指标的影响，结果表明，试验组血清中I g G、I g A水平显著高于对照组（P＜0.05），试验组血清总胆固醇显著低于对照组（P＜0.05），同时低密度脂蛋白水平低于对照组、高密度脂蛋白高于对照组，表明中草药添加剂能显著提高犊牛的免疫机能，改善肝功能。周学辉等人采用不同剂量的中草药添加剂饲喂河西肉牛，观测中草药添加剂对血液生化指标的影响，结果也同样表明中草药饲料添加剂对肉牛营养状况、血液生化指标有良好影响，且高剂量组肉牛效果更为明显。

5 中草药添加剂防治牛病

5.1 中草药的抑菌、驱虫、抗病毒作用

许多中草药具有抗菌、抗病毒、驱寄生虫等作用，其作用机制主要包括两个方面：一是药物有直接抑菌、杀菌作用，能直接有效抑制或杀灭侵入体内的微生物或寄生虫；二是通过“扶正祛邪”机理，中草药通过扶植机体正气，提高机体防御机能、免疫功能、抗氧化水平等，祛除病邪，达到抵御疾病的效果。常见的抗菌、抗病毒的中草药有板蓝根、蒲公英、黄连、黄柏、黄芪、金银花、野菊花、鱼腥草、大蒜、苦参、穿心莲等；常见的抗驱虫剂有槟榔、大蒜、青蒿、槟榔、石榴皮等。将这些纯天然的中草药作为添加剂饲喂，可以有效替代抗生素的使用，既保障了对牛的瘤胃零伤害，也减少了耐药性和药物残留的产生。

5.2 中草药对牛普通病的防治作用

系统考虑肉牛饲养管理环境，综合运用中医及中药理论体系，辨明症候后合理利用方剂，并配伍成特殊需要的饲料添加剂，可以有效预防和治疗肉牛各种常见疾病。如肉牛消化系统常见前胃迟缓、瘤胃积食等病症，可通过添加神曲、麦芽、陈皮等消食、理气、行滞的中草药进行防治；夏天通过添加薄荷、荷叶、淡竹叶、金银花等疏散风热、清热解暑的中草药，可有效防治风热感冒并减少热应激；母牛产后乏情可采用淫羊藿、当归、益母草、阳起石、香附、菟丝子等中草药组成的催情散方剂进行调理。只要结合整体观念、辨明症候，并合理选用中草药组方，便可做到“未病先防”和“既病防变”的作用。

参考文献

[1]王汝富,俞联平,赵庆平,李新媛,陈兴荣,任越,罗亮.牛羊复方中草药饲料添加剂的研制及应用效果评价[J].中国草食动物,2011,(03)∶22-24.

[2]董思堂.中草药在肉牛养殖疾病防治中的应用[J].现代农业科技,2012(24)∶291-292.

[3]周学辉,李伟,杨世柱,郭兆斌.中草药饲料添加剂对河西肉牛生产性能及食用品质影响的研究[J].黑龙江畜牧兽医, 2015(07)∶98-100.

[4]高辉,杨静静,等.中草药添加剂对犊牛生产性能和血液生化指标的影响[J].安徽农业大学学报,2013,40(06)∶950-954.

[5]周学辉,杨世柱,李伟,郭兆斌.中草药饲料添加剂对河西肉牛血液生化指标影响的研究[J].中国草食动物科学,2012 (06)∶23-25.

[6]赵明净,董发明,张蒙蒙,朱天才.中草药饲料添加剂对育肥后期肉牛增重效果的影响[J].黑龙江畜牧兽医,2013(07)∶60-61.

[7]刘超.中草药在肉牛养殖和疾病防治的优点[J].中国畜禽种业,2016(03)∶54.

[8]张颖.中草药添加剂在肉牛生产中的应用[J].中国动物保健,2009(02)∶88-90+92.

[9]李健,李梦云,薛帮群,司丽芳,张自强,李翔,位兰.中草药添加剂在牛生产中的应用进展[J].中国奶牛,2011(20)∶49-53.

作者简介：邹振兴，硕士，执业兽医师，研究方向：临床兽医学。

鞍山市科学技术局项目（2013SY09）；辽宁省大学生创新创业训练计划资助项目（2015101690019）

R284

A

10.14025/j.cnki.jlny.2017.13.020

赵健竹，在读本科生，研究方向：生物学。

孙晓泽，硕士，讲师，研究方向：植物栽培与繁育。分中草药都无毒副作用，是良好的“绿色”饲料添加剂。