切花月季‘雪山’的离体快繁体系的建立

刘洋　陈万鹏　刘祥君

摘要：取切花月季‘雪山一年生枝条4-7节茎段为外植体，建立其离体快繁体系。以Ms培养基为基础，通过不同浓度的植物激素配比筛选最适培养基，探讨分析植物激素对其分化及增殖的影响。结果表明，‘雪山月季离体培养的最适初代培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA 0.05mg/L+GA3 0.1mg/L，最适继代培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA3 0.1mg/L，最适生根培养基为1/2MS+IBA 0.3mg/L。

关键词：雪山；切花月季；离体快繁；IBA

切花月季（RosaCVS），为蔷薇科蔷薇属的有刺灌木，花单生茎顶，花姿优美，花重瓣，花形、花色丰富，深受大众喜爱。其中，白色切花月季‘雪山种植范围广，适应力强，广受切花种植者和消费者欢迎。切花月季的传统繁殖方式是扦插法，作为无性繁殖的一种方式，扦插能够保留品种的优良性状，但受原种苗数量的限制，难以快速形成规模，长期扦插繁殖，植株老化，品种退化。通过建立切花月季的离体快繁体系，利用组织培养技术培养种苗具有繁殖速度快，复壮品种等优点，对于月季新品种的扩繁与大规模推广具有重要意义。本文以切花月季‘雪山为试材，研究建立切花月季离体快繁体系，为商品化生产切花月季名优品种提供科学依据。

1.试材与方法

1.1试验材料

晴天上午，取辽宁广播电视大学现代农业示范体验基地花卉温室内的切花月季‘雪山健壮植株上的当年生未开花枝条为试材。去除顶部3个芽，留4～7节腋芽，去复叶留叶柄，剪成带单腋芽的小段。

1.2试验方法

1.2.1初代培养。试材处理：将剪切好的带腋芽茎段浸入肥皂水冲刷，自来水流水冲洗1h。在超净工作台上用75%酒精消毒30s，无菌水冲洗1次，0.1%氯化汞溶液浸泡并搅拌7～8min，无菌水冲洗3次，放在灭菌后的滤纸上吸干表面水分，切除茎段两端受损部分，垂直插入初代培养基。

初代培养基以MS培养基为基础，蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，附加不同浓度的6-BA、NAA、GA3，采用3因素3水平正交实验设计（L9（34）），共设9个处理（如表1），每个处理接种30瓶，每瓶接种1个茎段，设3次重复，20d后统计出芽数量及质量。

1.2.2继代培养。初代培养苗长到2～3cm时，将嫩芽切割下来去除原茎段及大叶片，接入继代培养基中。共设9个处理（如表1），每个处理接种20瓶，每瓶接种1棵幼嫩植株，设3次重复，25d为1周期，2个周期后调查增殖及生长状况。

1.2.3生根培养。将生长健壮，高度在3～5cm的丛生苗分切单株，转接人生根培养基中。生根培养基以1/2MS为基础，蔗糖15g/L，琼脂6.5g/L，附加不同浓度的NAA或IBA，设4个处理（如表2所示），每处理转接20瓶，每瓶3棵单株幼苗，20d后统计结果。

1.2.4炼苗移栽。当组培苗根系平均长度在0.5cm以上时，将瓶苗转移至欲移栽的温室中3～5d，再开盖炼苗2d。取出幼苗洗净根部残留的培养基，移栽到用0.1%多菌灵消毒的基质上（泥炭：蛭石：珍珠岩=1：1：1），覆膜喷水保持基质湿润并遮阳。视环境条件及幼苗生长状况逐步揭膜。

2.结果与分析

2.1腋芽的诱导与分化

月季茎段接种5d后，腋芽开始萌动。培养20d后对组培苗进行芽增殖情况统计，由表3可知，萌动率最高值出现在A2处理，萌动率最高为87.8%，随着6-BA浓度的升高萌动率降低。从芽生长状况来看，当6-BA浓度达2.0mg/L时，腋芽见不同程度玻璃化，当GA₃浓度在0.1mg/L时，腋芽表现粗壮。芽增殖倍数随6-BA浓度升高而升高，综合结果表明，培养基MS+6-BA1.5mg/L+NAA 0.05mg/L+GAs 0.1mg/L为诱导‘雪山腋芽诱导与分化的最适培养基。

2.2增殖继代培养

初代嫩芽继代增殖培养50d后，增殖结果因激素配比不同而异。如表4所示，嫩芽增殖倍数随6-BA浓度的升高而增大，但浓度过高且无NAA、GA3配合时会影响苗高且有玻璃化现象产生。低浓度NAA可提高苗高，配合适当浓度GAs可培育壮苗。综合结果表明，MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA3 0.1mg/L为‘雪山组培苗的最适继代培养基，此处理芽苗生长粗壮，叶色深绿，增殖倍数为5.1，平均苗高4.25cm。

2.3生根培养的效果

‘雪山继代苗接种到含NAA的生根培养基上4～6d，嫩茎基部膨大开始出现愈伤组织，10d后分化为不定根，20d后统计生根率、平均根数、平均根长均不及B3、B4处理。将继代苗接种到含IBA的生根培养基中5d后，嫩茎基部开始生成白色根原基，10d后逐步生产为白色根须，综合生长情况分析，1/2MS+IBA0.3mg/L适合‘雪山继代苗的生根，生根率最高为94.8%，根白而粗，生根苗长势健壮。

2.4炼苗移栽的效果

生根组培苗根长0.5cm以上时转移到育苗温室中进行炼苗移栽，成活率可达75%以上。生根苗的健壮程度和株高对移栽成活率影响显著，株高低于2.5cm或高于5cm时，成活率显著下降。此外当根长超过1.5cm、根部呈黄褐色的老根苗移栽后也不易成活。

3.讨论

植物組织培养方法主要分为愈伤组织再分化和芽诱导2种，目前切花月季组织培养以芽诱导方式培养较为普遍。本试验以‘雪山切花月季1年生4～7节茎段腋芽为试材，以MS培养基为基础，添加不同浓度配比的植物激素，筛选出‘雪山组织培养最适初代培养基为MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.05mg/L+GA30.1mg/L，最适继代培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.1mg/L+GA 3 0.1mg/L，最适生根培养基为1/2MS+IBA0.3mg/L。本试验筛选出的培养基配比与其他品种切花月季有一定差异，这可能与其基因型不同或试验条件不同有关。

生根苗的株高、根长及健壮程度直接影响移栽成活率，俞燕芳认为生根苗的最适株高为2.5～4cm，本试验生根苗低于2.5cm或高于5cm时，成活率显著下降。株高过高的生根苗自身消耗较大且茎纤细不易输送水分及养料至顶部，因而致死。根系过长移栽时易受损且缓苗慢。

本试验初步建立了切花月季‘雪山的离体快繁体系，为商品化生产切花月季名优品种提供科学依据。此外试验过程中出现褐化及污染现象，其产生机理及解决方法还有待进一步探讨。endprint