HPLC法测定大黄提取物中5种蒽醌的含量

卓俊睿

遵义医药高等专科学校 贵州省遵义市 563006

HPLC法测定大黄提取物中5种蒽醌的含量

卓俊睿

遵义医药高等专科学校 贵州省遵义市 563006

目的：采取HPLC法测量评定中药材大黄中5种蒽醌（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的含量。方法：采用依利特ODS2 C18、柱(200mm×4.6mm,5μm)，流动相为无水甲醇-浓度0.1%磷酸(75:25,V/ V），流速为1ml/min，检测波长为255nm，柱温26℃。结果：芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸的回归方程如下：Y=1.97X-0.35，相关系数R=0.99993;Y=0.98X-0.21，相关系数R=0.99996;Y=1.26X-0.16，相关系数R=0.99994;Y= 2.35X +0.17，相关系数R=0.99992;Y=1.93X+0.08，相关系数R=0.99992;5种蒽醌的回收率如下：99.49%,97.37%,99.21%,98.84%和98.74%。结论：用HPLC法测定大黄提取物中5种蒽醌的含量不仅简单快捷，而且具有准确性高、重现性好的特点，可以用于推广。

HPLC法；芦荟大黄素；大黄素甲醚；大黄酚；大黄素；大黄酸

目前对大黄的研究已较为深入，然而以HPLC法对大黄蒽醌含量的测定仍然欠缺研究，因此开展本研究，希望提供参考。

1 研究材料

大黄样品采用自成都市大黄中药材培植基地所产的掌叶大黄。实验仪器为Ultimate3000高效液相色谱仪、赛多利斯BT125D电子天平及KQ-250D型超声波清洗器。主要试剂方面，芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸5中对照品及磷酸、分析甲醇、色谱甲醇等均来自市场购买，去离子水由研究者自制。

2 研究方法

2.1 色谱条件

255nm的检测波长；1ml/min的流速；柱温26℃；色谱柱采用依利特ODS2 C18、柱(200 mm x4.6 mm,5μm)。

2.2 自制溶液对照品

取适量大黄对照品，应用无水甲醇，分别配置5种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的对照品溶液，采用浓度20、10、20、20、和20μg/ml 。

2.3 自制供试品

精确称量取用大黄中药材0.500g，放置在25ml的容量瓶内，分别添加无水甲醇20ml和超声波提取35min，待溶液冷却至接近室内温度，加入无水甲醇，定容到刻度，使震荡溶解，用0.20μm滤膜过滤。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察

依据前文所述色谱条件，取用对照品溶液，精密吸取2、5、10、20、40μL，并分别进行进样测定，以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行回归分析，得到5种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的线性回归方程。

2.4.2 精密度考察

依据前文所述色谱条件，吸取对照品的混合溶液，5次连续进样，计算5种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）峰面积下的RSD。

2.4.3 稳定性考察

各吸供试品溶液，间隔2h进行一次测定，得到供试品溶液中5种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）峰面积下的RSD。

2.4.4 重复性考察

取大黄样品精密称取5份，按照供试品的制备方法，制作溶液用于方法测定，依结果计算5种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的保留时间以及峰面积下的RSD。

2.4.5 回收率考察

大黄样品已知含量，精密称取0.500g，共取三份，每一份中加入相同含量的对照品，按照供试品制备方法处理，得出平均回收率及RSD。

2.5 大黄含量测定

按照供试品制备方法，制得大黄样品溶液后进样20μl，在255nm处，检测样品各成分所对应峰面积，根据所计算的线性回归方程，得出5种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）含量。

3 结果

3.1 方法学考察结果

（1）线性关系考察。计算得出大黄样品中5种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的线性回归方程，发现5种蒽醌成分均呈良好线性关系。具体结果见表1。

表1：5种蒽醌成分的线性回归方程

（2）精密度考察。计算得出大黄样品中5种蒽醌成分精密度良好，RSD分别是0.55%、1.25%、1.87%、1.08%和1.61%；（3）稳定性考察。计算得出大黄样品中5种蒽醌成分稳定性良好，在12个小时内保持稳定。RSD分别是1.91%、1.30%、1.42%、1.54%、1.51%（n=7）；（4）重复性考察。计算得出大黄样品中5种蒽醌成分重复性较好，在保留时间上的RSD分别是0.72%、2.04%、1.09%、1.74%、1.63%，在峰面积上的RSD分别是1.44%、1.82%、1.91%、0.74%、1.06%；（5）回收率考察。计算得出大黄样品中5种蒽醌成分回收率分别是99. 49% ,97. 37% ,99. 21% ,98. 84%、98. 74%，其RSD分别是0.41%、1.47%、0.55%、1.32%、0.84%；方法学考察结果说明，用HPLC法测定大黄提取物中5种蒽醌的含量不仅简单快捷，而且准确性高、重现性好。

3.2 含量测定结果

成都产掌叶大黄的5种蒽醌成分分别如下：芦荟大黄素0.076%；大黄素甲醚0.145%；大黄酚0.823%；大黄素0.187%；大黄酸0.113%。

4 结论

本研究通过使用HPLC法，对大黄药材中5种游离蒽醌含量进行测定，确定了这种方法简单快速、准确性高、重现性好，可用于大黄药材质量评定。

[1]颜永刚,尹立敏,王红艳等.HPLC法同时测定大黄炮制品中10种化 学 成 分 的 含 量[J].中 国 药房,2016,27(27):3839-3842.

[2]毛春芳,施忠,罗琳等.HPLC法同时测定大黄中芦荟大黄素等11种成分的量[J].中草药,2014,45(16):2400-2403.

卓俊睿（1991-），女，贵州省遵义市人。遵义医药高等专科学校助教。硕士学位。专业为药物化学,主要研究方向为生物催化与手性合成。