HPLC法测定注射用泮托拉唑钠中的有关物质

张 静，翟丽杰，高立娜（吉林大学第二医院药学部，长春 130041）

HPLC法测定注射用泮托拉唑钠中的有关物质

张 静＊，翟丽杰#，高立娜（吉林大学第二医院药学部，长春 130041）

目的：建立测定注射用泮托拉唑钠中有关物质的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为KromasilHypersilODS，流动相为0.01mol/L磷酸氢二钾溶液（调节pH为7.0）-乙腈（梯度洗脱），流速为1.0m L/m in，检测波长为290 nm，柱温为40℃，进样量为20μL。结果：杂质A、B、C+E、D检测质量浓度线性范围分别为0.416 8～1.042 0μg/m L（r＝0.999 8）、0.195 0～0.487 5μg/m L（r＝0.999 9）、0.389 0～0.972 5μg/m L（r＝0.999 8）、0.198 6～0.496 5μg/m L（r＝0.999 8）；定量限分别为0.834、0.780、1.556、0.794 ng/m L，检测限分别为0.417、0.390、0.778、0.397 ng/m L；精密度试验的RSD＜1.0%，重复性试验中总杂质峰面积的RSD＜1.0%；回收率分别为98.81%～102.49%（RSD＝1.18%，n＝9）、95.31%～98.44%（RSD＝0.91%，n＝9）、96.88%～98.44%（RSD＝0.52%，n＝9）、97.87%～101.28%（RSD＝1.05%，n＝9）。结论：该方法简便、准确，可用于注射用泮托拉唑钠中有关物质的测定。

高效液相色谱法；注射用泮托拉唑钠；有关物质；测定

泮托拉唑钠由德国百克顿（Gulden）公司开发上市，是继奥美拉唑、兰索拉唑之后的新一代质子泵抑制剂（PPI），为消化性溃疡的一线治疗药[1-6]。在全球上市后，因其抑酸作用强而持久、溃疡愈合率高、不良反应少和药物相互作用少的显著优势，迅速成为治疗与胃酸有关的消化系统功能紊乱性疾病的特效药物。其与奥美拉唑和兰索拉唑相比，对质子泵具有更高的选择性，抑制胃酸的分泌达到一个新水平，疗效明显占优。目前，该制剂已被新版《中国药典》[7]、《英国药典》[8]、《美国药典》[9]和《欧洲药典》[10]收载。而《英国药典》《美国药典》《欧洲药典》收载的仅有泮托拉唑钠原料药标准，无注射用无菌粉末标准；而《中国药典》中虽收载了泮托拉唑钠原料药和注射用无菌粉末标准，但是并没有对各杂质作相应的限度要求。因此，本研究参考相关文献[7]，采用高效液相色谱法（HPLC）建立了测定注射用泮托拉唑钠中有关物质的方法，以期为完善该制剂的质量标准提供参考。

1 材料

1.1 仪器

LC-20A型HPLC仪，包括LC-20AD XR二元梯度泵、SIL 20A HT自动进样器、CTO-20A柱温箱、SPDM 20A二极管阵列检测器（日本Shimadzu公司）；FE20K型酸度计（瑞士Mettler-Toledo公司）；ZH-2型旋涡混合器（天津药典标准仪器厂）；M illi-Q Advantage A10型超纯水仪（美国M illipore公司）。

1.2 药品与试剂

注射用泮托拉唑钠[石药集团中诺药业（石家庄）有限公司，批号：C058131101、C058131102、C058131103，规格：60mg/支]；注射用泮托拉唑钠（原研药，德国奈科明制药有限公司，批号：203869，规格：40mg/支）；泮托拉唑钠对照品（批号：20140511，纯度：99%）、杂质A对照品（批号：20140511，纯度：99%）、杂质B对照品（批号：20140511，纯度：99%）、杂质C对照品（批号：20140511，纯度：99%）、杂质E对照品（批号：20140511，纯度：99%）均购自深圳达尔森科技有限公司；杂质D对照品（美国Waters公司，批号：20140511，纯度：99%）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil Hypersil ODS（125mm×4.0mm，5µm）；流动相：0.01mol/L磷酸氢二钾溶液（调节pH为7.0）（A）-乙腈（B），梯度洗脱（0～40min，80%→20%A；40～45min，20%→80%A）；流速：1.0m L/m in；检测波长：290 nm；柱温：40℃；进样量为20µL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液 精密称取泮托拉唑钠对照品和杂质A、B、C、D、E对照品各约1mg，分别置于10m L量瓶中，加乙腈溶解并定容，摇匀，即得泮托拉唑钠和杂质A、B、C、D、E的单一对照品贮备液。分别量取上述泮托拉唑钠单一对照品贮备液1m L，杂质A单一对照品贮备液80μL，杂质B、C、D、E单一对照品贮备液各40μL，置于同一10m L量瓶中，加乙腈溶解并定容，摇匀，即得混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取样品适量，置于25m L量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 空白对照溶液 取处方比例辅料适量（约相当于泮托拉唑钠4mg处方所需辅料量），置于100m L量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 系统适用性溶液 取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、泮托拉唑钠对照品各适量，置于5m L量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀，即得。

2.3 系统适用性和专属性试验

取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液、空白对照溶液、系统适用性溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图1。由图1可知，在该色谱条件下，各待测有关物质均能达到基线分离，分离度＞1.5；理论板数以泮托拉唑钠峰计为15 800，保留时间为11.025min。结果表明，其他成分对测定无干扰。

2.4 破坏性试验

图1 系统适用性和专属性试验高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms of system suitability and specificity test

按如下方法制备各破坏样品溶液——（1）酸破坏样品溶液：取样品适量（约相当于泮托拉唑钠40mg），置于100m L量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液12m L，于室温下静置10min，加适量0.01mol/L氢氧化钠溶液中和，再加0.001mol/L氢氧化钠溶液-乙腈（1∶1，V/V）溶解并定容，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。（2）碱破坏样品溶液：取样品适量（约相当于泮托拉唑钠40mg），置于100m L量瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液12m L，振摇使其全部溶解，于室温下放置1 h，加适量1mol/L盐酸溶液中和，再加0.001mol/L氢氧化钠溶液-乙腈（1∶1，V/V）溶解并定容，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。（3）高温破坏样品溶液：取样品适量（约相当于泮托拉唑钠40mg），置于圆皿内，于120℃加热40min，取出，冷却至室温，置于100m L量瓶中，加0.001mol/L氢氧化钠溶液-乙腈（1∶1，V/V）溶解并定容，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。（4）高湿破坏样品溶液：取样品适量（约相当于泮托拉唑钠40mg），置于平皿内，开口置于盛有硝酸钾饱和溶液的密闭容器中（湿度为92.5%），于25℃条件下放置72 h，置于100m L量瓶中，加0.001mol/L氢氧化钠溶液-乙腈（1∶1，V/V）溶解并定容，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。（5）光照破坏样品溶液：取样品适量（约相当于泮托拉唑钠100mg），置于平皿内，开口置于（7 500±500）lx强光下照射72 h，置于100m L量瓶中，加0.001mol/L氢氧化钠溶液-乙腈（1∶1，V/V）溶解并定容，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

取上述破坏样品溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图2。由图2可知，样品在酸、碱、高温、高湿、光照条件下均有不同程度的降解，杂质峰有所增多，但各降解杂质峰与主成分峰之间以及各降解杂质峰之间分离良好（分离度均＞1.5）。

2.5 线性关系考察

图2 破坏性试验高效液相色谱图Fig 2 HPLC chromatogramsofdestructive test

范围见表1。

表1 回归方程与线性范围Tab 1 Regression equationsand linear ranges

2.6 定量限与检测限考察

取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，倍比稀释，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。当信噪比为10∶1时，得杂质A、B、C+E、D的定量限（LOQ）分别为0.834、0.780、1.556、0.794 ng/m L；当信噪比为3∶1时，得检测限（LOD）分别为0.417、0.390、0.778、0.397 ng/m L。

2.7 精密度试验

取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，杂质A、B、C+E、D峰面积的RSD分别为0.03%、0.03%、0.06%、0.05%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.8 重复性试验

取样品（批号：C058131101）适量，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，供试品溶液中只检出杂质A和杂质C+E，杂质A峰面积的RSD＝0.22%（n＝6），杂质C+E峰面积的RSD＝0.17%（n＝6），总杂质峰面积的RSD＝0.98%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.9 回收率试验

从联盟初创期特征来看，各BIM联盟在分析内外部条件基础上，确定各自战略目标、寻找合作伙伴，签署联盟协议和纲领文件，设立专家库、成立专家委员会，制定发展规划、技术路线，开展标准研究制定、课题研究、人才培养、互动交流等工作。但对于联盟技术突破性创新、全产业链深度合作、利益分配共享、风险共担、资金投入、市场占领等内容并未充分涉及。

分别量取“2.2.1”项下杂质A、B、C、D、E的单一对照品贮备液各适量，置于同一10 m L量瓶中，加0.001 mol/L氢氧化钠溶液-乙腈（1∶1，V/V）溶解并定容，摇匀，即得。按上述方法制备低、中、高质量浓度的混合对照品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算回收率，结果见表2。

表2 回收率试验结果（n＝9）Tab 2 Resultsof recovery test（n＝9）

2.10 样品有关物质测定

取4批样品各适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品中含有关物质的量，结果见表3。由表3可知，3批国产样品均只检测出两个已知杂质，即杂质A以及杂质C+E，并均＜0.2%，总杂质＜1.0%；原研药样品中杂质C+E含量＞0.2%，杂质A未达到检测限。

表3 样品有关物质测定结果（n＝3，%）Tab 3 Resultsof related substancesdeterm ination of samples（n＝3，%）

3 讨论

3.1 柱温的选择

笔者考查了不同柱温（30℃和40℃）对样品分离的影响。结果表明，不同柱温的测试结果均符合系统适用性要求，保留时间无明显差别；但柱温40℃条件下各峰对称性、分离度及柱效更好，更有利于样品的分离。因此，本试验的柱温选择为40℃。

3.2 流动相A的pH考察

笔者考查了流动相A的不同pH（6.5、7.0和7.5）对样品中已知杂质分离的影响。结果表明，流动相A的pH为6.5时，杂质A与主峰无法分离；流动相A的pH为7.5时，杂质C+E与杂质D无法完全分离；而流动相A的pH为7.0时，各杂质与主峰以及各杂质间的分离均较好。故本试验选择流动相A的pH为7.0。

3.3 稳定性试验

本试验曾进行稳定性试验，考察了供试品溶液（批号：C058131101）在室温下放置0、1、2、3、4 h时的总杂质峰面积。结果，总杂质峰面积在4 h内明显增加，表明进行有关物质测定时，供试品溶液应在制备后立即测定，以免对测定结果产生不必要的干扰。

3.4 杂质C+E的考察

注射用泮托拉唑钠中的杂质C为5-（二氟甲氧基）-2-｛（RS）-[（3，4-二甲氧基-2-吡啶基）甲基]亚磺酰基｝-1甲基-1H-苯骈咪唑，杂质E为6-（二氟甲氧基）-2-｛（RS）-[（3，4-二甲氧基-2-吡啶基）甲基]亚磺酰基｝-1甲基-1H-苯骈咪唑，杂质C是以杂质B（硫醚）为起始原料经过氧化物氧化得到的，其与杂质E互为异构体，无法完全分离[9-10]。本文参考《欧洲药典》和《美国药典》系统适用性标准[9-10]，测定杂质C和E时，以其总量C+E表示，作为同一杂质考虑。

综上所述，本方法简便、准确，可用于注射用泮托拉唑钠中有关物质的测定。

[1] 李军，部敬顺，张鉴.注射用泮托拉唑钠的稳定性考察[J].中国药房，2005，16（21）：1655-1657.

[2] 孙丹，朱娴.注射用泮托拉唑钠在各注射液中配伍的稳定性考察[J].化工中间体，2015（10）：114-115.

[3] 王丽云，吕旭幸.注射用泮托拉唑钠的杂质含量及其杂质谱的比较[J].抗感染药学，2015，12（4）：499-504.

[4] 蒋鹏，钱新毅.质子泵抑制药：泮托拉唑[J].医药导报，2003，22（3）：184-186.

[5] 王婧斯，李桂龙，王成港，等.泮托拉唑钠有关物质分析方法的比较[J].药物评价研究，2012，35（2）：109-112.

[6] 王荔，毕煌垒.泮托拉唑不良反应分析[J].中国药房，2010，21（28）：2582-2683.

[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：704-706.

[8] British Pharmacipoeia Comm ission Office.British Pharmacopoeia 2015：VolumeⅡ[S].2015：494.

[9] The United Stated Pharmacipoeia Commission Office.The United Stated Pharmacopoeia：37[S].2015：3264.

[10] European Pharmacipoeia Comm ission Office.European Pharmacopoeia：8.0[S].2015：4680.

（编辑：刘 柳）

Determ ination of Related Substances in Pantoprazole Sodium for Injection by HPLC

ZHANG Jing，ZHAILijie，GAO Lina（Dept.of Pharmacy，the Second Hospital of Jinlin University，Changchun 130041，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the determination of related substances in Pantoprazole sodium for injections.METHODS：HPLC method was adopted.The determination was performed on Kromasil Hypersil ODS column w ith mobile phases consisting of 0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate buffer solution（pH adjusted to 7.0）-acetonitrile（gradient elution）at a flow rate of 1.0 m L/m in.The detection wavelength was set at 290 nm，and the column temperature was 40℃，and injection volume was 20μL.RESULTS：The linear ranges of impurity A，impurity B，impurity C+E，and impurity D were 0.416 8-1.042 0 μg/m L（r＝0.999 8），0.195 0-0.487 5μg/m L（r＝0.999 9），0.389 0-0.972 5μg/m L（r＝0.999 8），0.198 6-0.496 5μg/m L（r＝0.999 8），respectively.The limits of quantitation were 0.834，0.780，1.556，0.794 ng/m L；the limits of detection were 0.417，0.390，0.778，0.397 ng/m L，respectively.RSD of precision testwas lower than 1.0%；in repetitive test，RSD for total peak area of impurity was lower than 1.0%；the recoveries were 98.81%-102.49%（RSD＝1.18%，n＝9），95.31%-98.44%（RSD＝0.91%，n＝9），96.88%-98.44%（RSD＝0.52%，n＝9）and 97.87%-101.28%（RSD＝1.05%，n＝9）.CONCLUSIONS：Themethod is convenient，accurate and suitable for the determ ination of related substance in Pantoprazole sodium for injection.

HPLC；Pantoprazole sodium for injection；Related substances；Determ ination

R927

A

1001-0408（2017）15-2142-04

2016-08-18

2016-12-19）

＊主管药师，硕士。研究方向：临床药学。电话：0431-88796629。E-mail：jingwei_zhang@sina.com

#通信作者：副主任药师，硕士。研究方向：临床药学。电话：0431-88796413。E-mail：109788809@qq.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.15.35