豨莶草对大鼠急性痛风性关节炎治疗作用

2017-07-05 13:48陈方挺傅旭春蒋芳萍白海波蔡田恬
浙江中西医结合杂志 2017年6期
关键词:足趾秋水仙碱痛风性

陈方挺 傅旭春 蒋芳萍 白海波 蔡田恬

·实验研究·

豨莶草对大鼠急性痛风性关节炎治疗作用

陈方挺1傅旭春2蒋芳萍3白海波3蔡田恬4

目的观察豨莶草对大鼠急性痛风性关节炎治疗作用。方法SD大鼠50只,随机分成空白对照组、模型组、秋水仙碱组、豨莶草水提组和豨莶草醇提组,每组10只。采用大鼠后肢右侧踝关节腔内注射尿酸钠法建立急性痛风性关节炎大鼠模型,各组分别于造模前2h、造模后6、22h给予相应的药物。观察各组大鼠的足趾体积、致炎关节组织腔内白介素10(IL-10)含量变化。结果

造模后24h模型组大鼠足趾体积为(0.3620±0.1273)mL,较空白对照组(0.0615±0.0520)mL显著增加(P<0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、豨莶草醇提组大鼠足趾体积均有明显缩小[(0.1638± 0.0534)mL、(0.1796±0.0943)mL比(0.3620±0.1273)mL,P均<0.01];秋水仙碱组、豨莶草醇提组大鼠后肢踝关节肿胀程度也较模型组有明显改善[(1.69±0.27)mm、(1.72±0.59)mm比(2.37±0.37)mm,P均<0.01],血清IL-10则明显升高[(240.64±53.95)pg/mL、(215.65±70.35)pg/mL比(139.35±62.78)pg/ mL,P<0.01,P<0.05]。结论豨莶草乙醇提取物对尿酸钠诱导的急性痛风性关节炎有治疗作用。

大鼠;急性痛风性关节炎;豨莶草提取物;秋水仙碱

豨莶草为菊科植物豨莶(Siegesbeckia orientalis L.)、腺梗豨莶(Siegesbeckia pubescens Makino)或毛梗豨莶(Siegebeckia glabrescens Makino)的干燥地上部分,收载于《中国药典》2010版[1],具有祛风湿,通经络,清热解毒之功效,用于风湿痹痛,筋骨无力,腰膝酸软,四肢麻痹,半身不遂,风疹湿疮等。据文献报道,豨莶草能调整机体免疫功能,抑制局部组织炎症介质,减轻关节局部炎症反应,从而达到治疗类风湿性关节炎的作用[2-3]。豨莶草可缓解急性痛风性关节炎疼痛,控制症状[4-5]。豨莶草亦可用于治疗高尿酸血症,能改善高尿酸血症肾损害大鼠的肾功能,对高尿酸血症肾脏病理损害有修复作用[6]。本研究采用在大鼠后肢右侧踝关节腔内注射尿酸钠的方法建立急性大鼠痛风性关节炎模型[7],观察豨莶草乙醇提取物对尿酸钠诱导的大鼠急性痛风性关节炎的治疗作用。报道如下。

1 材料与试剂

1.1 实验动物清洁级雄性SD大鼠50只,体质量190~210g,购自浙江省动物实验中心,动物生产许可证号:SCXK(浙)2003-0001。试验前,将动物置(23± 2)℃屏障级动物房中饲养1周,标准饲料,饮用水为纯净水。

1.2 药品与试剂豨莶草药材饮片,购自杭州中药饮片厂(批号110103);尿酸(批号037K0694)购自SIGMA-AIDRICH公司;生理盐水(批号20092018),浙江莎普爱思制药有限公司;大鼠白细胞介素10(IL-10)试剂盒(批号1387113)为武汉博士德生物工程有限公司生产;乙醇(分析纯,杭州化学试剂有限公司,批号20110118)。秋水仙碱片(批号110921),购自昆药集团股份有限公司。

1.3 仪器YLS-7B足趾容积测量仪,山东省医学科学院设备站;Sunrise-basic光吸收酶标仪,瑞士Tecan公司;Allegra64R离心机,贝克曼库尔特公司产品;XW-80A漩涡混合器,上海医大仪器厂;游标卡尺,上海台海工量具有限公司。JHS-080型精密恒温恒湿箱,上海精宏实验设备有限公司。

2 实验方法

2.1 尿酸钠溶液制备

2.1.1 尿酸钠晶体制备取6mL的氢氧化钠溶液(1mol/L)与1g尿酸钠标准品,在无菌条件下加入经高压杀毒的蒸馏水194mL,煮沸,搅拌使得尿酸钠完全溶解,自然冷却后滴加盐酸溶液(1mol/L)至pH值等于7,于4℃冰箱保存24h,弃上清,将沉淀用生理盐水洗涤3次,滤纸吸干水分后再用无水乙醇洗涤沉淀物2次,置于干燥箱中,70℃环境下烘烤2h,将粉末研细后过孔径250μm的金属筛,装瓶备用。

2.1.2 尿酸钠乳液制备实验前将尿酸钠结晶置于180℃烤箱烘烤2h,用95%乙醇洗涤离心(3500r/min,10min)3次,室温自然干燥,取500mg尿酸钠结晶加9mL生理盐水、1mL吐温80加热搅拌,配制成50g/L尿酸钠溶液10mL。

2.2 豨莶草水提物制备取豨莶草药材饮片5kg,加入10倍量水浸润2h,煎煮提取3次(每次提取时间依次为2.5h、1h和1h),合并提取液浓缩后加辅料喷雾干燥得喷雾粉,备用。试验时用蒸馏水配制成所需浓度30mg/mL应用。

2.3 豨莶草乙醇提取物制备取豨莶草饮片5kg,加入8倍量70%乙醇浸润2h,回流提取3次(每次提取时间依次为2.5h、1h和1h),合并提取液回收乙醇后加辅料喷雾干燥得喷雾粉,备用。试验时用蒸馏水配制成所需浓度30mg/mL应用。

2.4 大鼠痛风性关节炎模型[7]的建立将50只雄性大鼠随机分成空白对照组、模型组、秋水仙碱组、豨莶草水提组和豨莶草醇提组,每组10只。各组于造模前2h开始第一次给药,豨莶草醇提组给药浓度为30mg/mL,剂量为10mL/kg,空白对照组和模型组给予等剂量蒸馏水,秋水仙碱给药浓度为0.135mg/mL,剂量为10mL/kg。2h后将模型组、秋水仙碱组、豨莶草醇提、水提组大鼠右踝关节适度弯曲,消毒酒精局部消毒,将1mL注射器的针头通过两骨突之间插入胫骨肌腱内侧,进针方向约为45°,踝关节腔中注入50g/L的尿酸钠乳液约60μL,进行伸曲、旋转运动1min。空白对照组大鼠关节腔注射10%吐温80 60μL(以注射用生理盐水配制)。造模后6h、22h各组均再次给予相应药物。造模后24h观察各项指标变化。

2.5 观察指标(1)关节肿胀情况:观察大鼠造模前后精神状况、右踝关节同一部位的肿胀情况、颜色、皮温及活动情况。(2)实验前后大鼠足趾体积和直径的变化:大鼠足趾体积测量:用油性记号笔标记所有大鼠右踝关节同一部位,利用足趾测量仪分别测量各组大鼠造模前及造模后24h时间点时标记处的体积,计算造模后24h足趾肿胀度。肿胀度=造模后大鼠右后足的足趾体积-造模前大鼠右后足的足趾体积;大鼠关节部位直径测量:以游标卡尺测得造模后大鼠右踝关节注射尿酸钠部位厚度减去造模前厚度,所得差值作为考察肿胀的另一指标。(3)炎症因子:摘除大鼠眼球取血,血液离心10min(6000转/ min),取上清液,采用夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒检测IL-10含量。

2.6 统计学方法应用SPSS16.0统计软件进行单因素方差分析,数据以平均数±标准差(x±s)表示,P<0.05为差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 大鼠关节肿胀情况造模后大鼠表现出明显的烦躁不安,右踝关节出出现明显红、肿、热,且伴有一定的功能障碍,活动能力下降,运动受限,与造模前相比,关节体积有所增加。而空白对照组大鼠未表现出明显的烦躁情绪,右踝关节处也未出现明显的红、肿、热现象,活动不受影响,关节体积也未出现明显增加。

3.2 各组大鼠24h足趾体积比较实验前各组大鼠足趾体积差异无统计学意义(P>0.05),而造模后各组大鼠关节均出现不同程度的肿胀,其中模型组大鼠关节肿胀最为明显。造模后24h模型组大鼠足趾体积较对照组显著增加(P<0.01),秋水仙碱组、豨莶醇提组大鼠足趾体积与模型组比较,均有不同程度缩小(P<0.01),豨莶草醇提组比水提组缩小更明显(P<0.01),醇提组大鼠关节肿胀程度与秋水仙碱组相似(P>0.05)。见表1。

表1 各组急性痛风性关节炎大鼠实验前后足趾体积比较(mL,x±s)

3.3 各组大鼠24h肿胀关节直径比较实验前各组大鼠右踝关节直径比较,差异无统计学意义(P>0.05),造模24h后大鼠右踝关节直径以模型组肿胀最严重,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,豨莶醇提组、秋水仙碱组大鼠右踝关节直径均有明显缩小,差异有统计学意义(P<0.01),见表2。

3.4 各组大鼠血清IL-10水平比较造模后24h模型组、各给药组大鼠血清IL-10低于空白对照组(P<0.01),以模型组为最低,显示造模成功;与模型组比较,各给药组IL-10水平都有所上升,秋水仙碱组最显著(P<0.01),豨莶草醇提组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),秋水仙碱组与豨莶草醇提组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表2 各组急性痛风性关节炎大鼠实验前后右踝关节直径比较(mm,x±s)

表3 各组急性痛风性关节炎大鼠血清中的IL-10水平比较(x±s)

4 讨论

文献[4]报道,豨莶草外敷可用于治疗急性痛风性关节炎。本研究结果表明,豨莶草提取物对尿酸钠诱导的大鼠急性痛风性关节炎模型具有一定的抗炎作用,且以醇提组作用显著。张磊等[8]研究显示,利用奇壬醇提取率作为评价标准发现豨莶草乙醇提取线性好,回收率高。除此以外,豨莶草乙醇提取物急性毒性远小于水提取物,使用更安全[9]。

研究指出,豨莶草可以降低踝关节组织中组胺和白细胞介素IL-lβ、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;能有效抑制踝关节滑膜细胞血干细胞黏附因子-1(VCAM-1)、环氧合酶(COX-2)、转录因子NF-KB表达等[5]。Park等[10]报道,豨莶酸可能通过抑制诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA和蛋白的表达抑制一氧化氮(NO)的产生,并且抑制蛋白从而起到抗炎作用。而在针对抗炎作用机制的研究中,目前研究比较广泛的抗炎性白细胞介素类细胞因子主要有白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-4(IL-4)等,其中IL-10是一种强有力的抗炎性细胞因子,又称细胞因子合成抑制因子,主要由Th2、Th0、单核-巨噬细胞、成纤维细胞等在各种免疫活化状态下产生,IL-10的含量增加与抗炎活性提高有关。本研究结果提示豨莶草乙醇提取物抗急性痛风性关节炎作用的机制可能与抗炎因子IL-10含量增加有关。

[1]中华人民共和国药典2010版一部[S].中国医药科技出版社,2010:345-345.

[2]王发辉,冯起校,黄超文.豨莶草药理研究进展[J].辽宁中医药大学学报,2011,13(10):102-104.

[3]宋业朋,于清宏.豨莶草煎剂治疗佐剂型关节炎的实验研究[J].中国医学工程,2012,20(11):14-16.

[4]周卫惠.豨莶草止痛散外敷治疗急性痛风性关节炎疗效观察[J].辽宁中医药大学学报,2009,11(9):86-87.

[5]孙贵才.复方豨莶草胶囊对实验性大鼠急性痛风性关节炎细胞因子及COX-2表达影响的研究[D].黑龙江中医药大学,2007.

[6]于雪峰,李登宇,孙贵才,等.复方豨莶草胶囊降血尿酸及对肾损害的保护作用[J].中医药学报,2007,35(2):18-21.

[7]何泳龙,青玉凤,周京国.高尿酸血症及痛风性关节炎动物模型及其中药复方治疗概况[J].川北医学院学报,2015,30(4):574-578.

[8]张磊,刘佳,于静.正交法试验优选豨莶草的提取工艺[J].河北医药,2015,37(14):2204-2205.

[9]蒋芳萍,傅旭春,白海波.豨莶草的小鼠急性毒性及抗小鼠急性痛风性关节炎作用[J].中国现代应用药学,2012,30(12):1289-1291.

[10]Pak HJ,Kim IT,Won JH,et al.Anti-inflammatory activities of ent-16alphaH,17-hydroxy-kauran-19-oic acid isolated from the roots of Siegesbeckia pubescens are due to the inhibition of iNOS and COX-2 expression in RAW 264.7 macrophages via NFkappaB inactivation[J].Eur J Pharmacol,2007,558(1-3):185-193.

(收稿:2016-12-28修回:2017-01-24)

Effects of Herba Siegesbeckiae on Acute Gouty Arthritis Rat Model

CHEN Fangting1,FU Xuchun2,JIANG Fangping3,BAI Haibo3,CAI Tiantian4.
1 Department of Pharmacy,Yongkang Orthopedics Hospital,Jinhua(321300), China;2 Institute of Materia Medica,Zhejiang University City College,Hangzhou(310015),China;3 Hangzhou Huadong Medicine Group Pharmaceutical Research Institute Co.Ltd.,Hangzhou(310012),China;4 Department of Pharmacy,Zhejiang Traditional Chinese Medical Hospital,Hangzhou(310006),China

ObjectiveTo investigate the effect of herba siegesbeckiae on acute gouty arthritis in rats.Methods Fifty SD rats were randomly divided into five groups(n=10):control group,model group,colchicin group,the water extract of herba siegesbeckiar group,and the ethanol extract of herba siegesbeckiar group.Except for control group, the model of acute gouty arthritis was established by injecting sodium urate into the right ankle joint of the rats'hindlimb in other four groups.The corresponding drugs were administered 2 hours before molding and 6 and 22 hours after molding.After 24 hours after molding,the toe volume of rats was measured and the level of interleukin-10(IL-10)in inflammatory joint tissue was determined.ResultsThe toe volume of rats in model group was bigger than that of control group(0.3620±0.1273mL vs 0.0615±0.0520mL,P<0.05).After drug intervention,the toe volume in colchicin group,the water extract of herba siegesbeckiar group,and the ethanol extract of herba siegesbeckiar group was significantly reduced(0.1628±0.0534mL,0.1796±0.0943mL,0.3620±0.1273mL,P<0.05);the swelling degree of the ankle joint of rats'hindlimb in colchicin group and the ethanol extract of herba siegesbeckiar group was significantly attenuated and the serum IL-10 was significantly increased compared with those in model group(1.69±0.27mm,1.72±0.59mm vs 2.37±0.37mm,all P<0.01;240.64±53.95pg/mL,215.65±70.35pg/mL vs 139.35±62.78pg/mL,P<0.01 or P<0.05).ConclusionEthanol extract of herba siegesbeckiae has a therapeutic effect on acute gouty arthritis induced by sodium urate.

rats;acute gouty arthritis;extract of herba siegesbeckiae;colchicin

1浙江省永康市骨科医院药剂科(金华321300);2浙江大学城市学院药物研究所(杭州310015);3杭州华东医药集团新药研究院有限公司(杭州310012);4浙江省中医院药剂科(杭州310006)

傅旭春,E-mail:fuxc@zucc.edu.cn

猜你喜欢
足趾秋水仙碱痛风性
秋水仙碱在冠状动脉粥样硬化性心脏病防治中的研究进展与争议
秋水仙碱在心血管疾病中应用的研究进展
非布司他治疗痛风性关节炎的疗效
第1足趾甲皮瓣与第2足趾复合组织组合移植急诊再造拇指的临床应用
秋水仙碱在冠心病中应用的新进展
四黄散外敷联合平衡罐治疗急性痛风性关节炎临床研究
足趾分解移植修复多手指组织缺损的临床应用
基于“开玄府,通络脉”理论探讨风药泄浊化瘀在痛风性关节炎治疗中的应用
小心,半熟的金针菇有毒!
彝药“我思”治疗痛风性关节炎60例临床观察