CpG DNA 佐剂对猪伪狂犬病疫苗免疫效果的影响

曹玉美，孙龙，兰云，叶至树，陆江，梁恒英，颜辉孟，伍少钦

（广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场，广西 横县 530317）

CpG DNA 佐剂对猪伪狂犬病疫苗免疫效果的影响

曹玉美，孙龙，兰云，叶至树，陆江，梁恒英，颜辉孟，伍少钦

（广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场，广西 横县 530317）

为了明确CpG DNA佐剂对猪伪狂犬病疫苗免疫效果的影响，本试验在猪伪狂犬病野毒阴性场随机选择了90头育肥猪（分为3组，每组30头），分别设为猪伪狂犬病疫苗+CpG DNA佐剂组（A），猪伪狂犬病疫苗组（B），间隔30d二次免疫猪伪狂犬病疫苗组（C），比对A、B、C组猪只在首免前、二免前、二免后30d、出栏前的猪伪狂犬病免疫抗体水平。结果显示：在合格率方面，A组与C组相当，且均优于B组；在抗体平均值方面，A组能够更快地刺激机体对猪伪狂犬病毒的免疫反应，产生保护性抗体。结论：CpG DNA佐剂对猪伪狂犬病疫苗有增效作用，且免疫抗体上升快，持续时间长。

CpG DNA佐剂；猪伪狂犬病；疫苗；免疫抗体

猪伪狂犬病是一种由猪伪狂犬病毒引起的急性传染病，可引发妊娠母猪流产、死胎及呼吸道症状。该病在猪群具有传播快、死亡率高、流行范围广、传播途径多、病原体顽固等特点，每年给养猪业造成了巨大的损失。目前，进行疫苗接种是预防、控制甚至消灭伪狂犬病最主要的措施之一。国内外已经有很好的基因缺失弱毒苗可用于控制与净化，但在育肥阶段单纯免疫一针猪伪狂犬病疫苗，所产生的免疫抗体水平有限，不足以保护整个育肥期；间隔30d免疫猪伪狂犬病疫苗，能获得良好的免疫抗体，但是增加人工及疫苗等成本。CpG DNA是一种DNA序列，其核心是一些未甲基化的CpG基序，具有免疫激活功能。为了减少工作量、节约成本，探讨CpG DNA佐剂对猪接种伪狂犬病疫苗是否有增效作用，在减少免疫次数的情况下，我们开展了本试验。

1 材料与方法

1.1 试验材料 试验猪：105～175日龄育肥猪，源自广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场一个育肥场；饲养方式按良圻原种猪场既定操作规程进行；CpG DNA佐剂：来源于某生物制品厂，猪伪狂犬病活疫苗：购自国外某疫苗公司，猪伪狂犬病gB抗体ELISA试剂盒。主要仪器设备：BioTek-ELx800仪，各种规格移液器，普通离心机。

1.2 试验分组及处理 选择猪伪狂犬病野毒呈阴性的育肥猪90头，随机分为3组，每组30头，分别设为猪伪狂犬病疫苗+CpG DNA佐剂组（A），猪伪狂犬病疫苗组（B），间隔30d二次免疫猪伪狂犬病疫苗组（C）。各组免疫时间及方式见表1。

1.3 检测指标及方法 分别于免疫前、二免前、二免后30d、出栏前对每头试验猪进行前腔静脉采血（2～3mL），血液置室温下1h凝固后以3000r/min离心3min，取上清，-20℃保存备用。血清检测猪伪狂犬病免疫抗体，严格按照试剂盒说明书进行。判断标准：S/N值＜0.6为阳性，0.6～0.7为可疑，≥0.7为阴性；S/N值＜0.2为合格。

表1 各组免疫时间、方式

1.4 统计分析 试验数据用SPSS软件进行单因子方差分析。

2 结果与分析

2.1 免疫抗体阳性率及合格率 详见表2、图1和图2。猪伪狂犬病抗体阳性率方面：免疫前，A、B、C组均处于低水平；二免前、二免后、出栏前，3组均呈上升趋势。

猪伪狂犬病抗体合格率方面：免疫前，A、B、C组抗体均处于低水平；二免前，A组较B、C组抗体上升快，二免后30d，A、B、C组抗体均呈上升趋势，且A、C组优于B组；出栏前，A、C组抗体合格率达100%，免疫抗体水平相当，远远优于B组。

表2 各组免疫抗体阳性率及合格率情况

图1 各组抗体阳性率趋势

图2 各组抗体合格率趋势

2.2 免疫抗体平均值 由表3可知，首次免疫前抗体水平：A、B、C组差异不显著；二免前：A组与B组差异不显著，B组与C组差异不显著，A组与C组差异显著，从抗体平均值优越性来看，A＞B＞C；二免后30d抗体：A、B、C组差异不显著，从抗体平均值优越性来看，A＞C＞B；出栏前抗体：A、B、C组差异不显著，从抗体平均值优越性来看，A＞C＞B。综合所有数据分析得出：A组免疫抗体上升快，持续时间长，上市前维持了理想的抗体水平。

表3 各组免疫抗体差异性比较

3 讨论

疫苗免疫效果受诸多因素的影响，包括疫苗质量、动物个体差异、母源抗体水平、免疫佐剂等。要想疫苗产生较高的、全面的特异性免疫反应，一般同时需要具有体液免疫和细胞免疫，而疫苗佐剂能够起到增强免疫反应的作用。大量试验证实，CpG DNA佐剂的核心CpG基序具有免疫激活功能。

本研究主要比对了CpG DNA佐剂与猪伪狂犬病弱毒疫苗配伍免疫，猪伪狂犬疫苗一次免疫及猪伪狂犬病疫苗两次免疫的效果，结果证实佐剂配伍的效果明显。在合格率方面，CpG佐剂参与组的免疫效果与二次免疫猪伪狂犬病疫苗的效果相当，均优于伪狂犬病疫苗一次免疫组。在抗体平均值方面，CpG佐剂能够更快地刺激机体对猪伪狂犬病毒的免疫反应，较快地产生保护性抗体。尽管二针注射猪伪狂犬病疫苗仍能在出栏前有较高的免疫保护力，但是首免后的抗体上升时间较佐剂参与组慢，人工耗费大。

猪伪狂犬病疫苗每1mL为2.25元，CpG每头份（0.5mL）为4元。疫苗免疫应激主要表现在当天吃料停止，增重停止，推迟出栏，推迟出栏每天耗料约7.74元。因此，从免疫效果和成本上综合选择，A组只免疫一针，能够保持较好的免疫水平，且可大幅度减少人工投入，值得推荐。

4 结论

CpG DNA佐剂对猪伪狂犬病疫苗有免疫增效作用，免疫抗体上升快，持续时间长，临床上推荐使用。目前，CpG DNA佐剂在口蹄疫疫苗免疫方面的应用较多，在伪狂犬病疫苗上的研究较少，相信在不久的将来，CpG DNA作为一种佐剂分子，将会运用得更多，在控制疫病方面起到重要作用。

[1]景志忠，蒙学莲，窦永喜，等.CpG DNA重组质粒对猪O型口蹄疫病毒抗原的免疫佐剂效应[J].畜牧兽医学报，2009，40（6）：862-866.

[2] 杨楷，潘贵珍，胡庭俊，等.复方天门冬多糖注射液对猪伪狂犬病疫苗免疫效果的影响[J].南方农业学报，2014，45（11）：2081-2086.

[3] 杨毅，李文刚，饶宝，等.猪伪狂犬病疫苗的研究进展[J].江西农业学报，2010，22（3）：154-157.

[4]陈俊鹏，林树育，吴群彬，等.分子佐剂CpG DNA的研究进展及应用概况[J].现代农业科技，2012（24）：269.

S852.52

B

1001-8964（2017）06-0024-03

2017-02-22

受优质瘦肉型配套系种猪选育与产业化示范项目（桂科重14121003-2-3）

曹玉美（1983-），女，广西贺州人，畜牧师，研究方向：规模化猪场主要疫病控制与净化。