妊娠晚期妇女阴道假丝酵母菌感染情况及其耐药性分析

魏寒松+马春红+李立旻+马庆敏+李会敏

摘要：目的 观察妊娠晚期妇女假丝酵母菌感染的病原菌类型分布及其对抗真菌药的敏感性。方法 收集产科住院患者阴道拭子，接种沙保罗葡萄糖琼脂平板。使用Vitek 2 compact微生物鉴定系统进行菌种鉴定，ATB-FUNGUS 3进行药敏试验。所有数据采用WHONET5.6进行统计分析。 结果 妊娠晚期阴道真菌感染以白假丝酵母菌为主（83.23%），其次为光滑假丝酵母菌（14.93%），其它假丝酵母菌占1.84%。白假丝酵母菌、光滑丝酵母菌对5种常用抗真菌药耐药率均低于10%。其它假丝酵母菌对唑类药物耐药率较高。结论 白假丝酵母菌对常见抗真菌药敏感性较高，其它假丝酵母菌耐药性高于白假丝酵母菌。治疗假丝酵母菌感染时应结合菌种鉴定及药敏试验结果合理选择抗真菌药物。

关键词： 妊娠；假丝酵母菌；真菌药敏试验

Infection of Candida Vaginalis in Women with Late Pregnancy and its Drug Resistance

WEI Han-song，MA Chun-hong， LI Li-min，MA Qing-min，LI Hui-min

（Department of Clinical Laboratory，Ninghe Tianjin Hospital，Tianjin 301500，China）

Abstract：Objective To observe the effect of late pregnancy women in Candida infection of pathogenic bacteria types distribution and antifungal drug sensitivity.Methods Collected obstetric hospitalized patients vaginal swab，inoculation of glucose agar.Sandy Paull strains were identified using Vitek 2 compact microbial identification system，ATB-FUNGUS 3 susceptibility test.All the data were analyzed by WHONET5.6 statistical analysis.Results Candida albicans were mainly infected with Candida albicans（83.23%），followed by Candida glabrata（14.93%）and Candida albicans accounted for 1.84%.Candida albicans，Smoothe yeast resistance to five commonly used antifungal agents were less than 10%.Other Candida strains have higher resistance to azole drugs.Conclusion Candida albicans is more sensitive to common antifungal agents，and other Candida strains are more resistant to Candida albicans.Treatment of Candida infection should be combined with the identification of bacteria and drug susceptibility test results reasonable choice of antifungal drugs.

Key words：Pregnancy；Candida；Fungal susceptibility test

20%～30%健康無症状非妊娠妇女阴道内可以分离到假丝酵母菌属，大多数为白假丝酵母菌。如果随访时间超过1年，则分离率可超过70%[1]。当酵母样真菌与宿主之间寄生的平衡被暂时干扰，它们能够引起外阴阴道假丝酵母菌病（vulvovaginal candidasis ， VVC），并伴随炎症等临床特征。VVC常常与某些已知的危险因素有关，例如，妊娠、不恰当使用抗生素引起微生物菌群失调和免疫抑制剂的使用等[2]。

多数VVC患者在没有明确诊断的前提下就给予OTC药物治疗，因此，其准确发病率不明。据估算，约有75%的女性在育龄期至少有过1次VVC发作，其中约半数会复发。在美国关于VVC发病率的描述只有两项以发病人群为基础的研究[3]。

本研究通过形态学及体外培养研究等方法，调查分析妊娠晚期妇女阴道假丝酵母菌感染情况，及其对常用抗真菌药物的耐药情况。为该疾病的流行病学研究和临床医师抗感染治疗提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1标本来源于我院 2014年1月～12月的产科住院患者，从阴道后穹窿分别用无菌棉拭子和一次性转运拭子取分泌物做涂片显微镜检查和真菌培养。直接涂片镜检可见真菌孢子及菌丝，培养发现假丝酵母菌生长者纳入到本实验中。

1.1.2 仪器与试剂 哥伦比亚血琼脂平板、沙保罗葡萄糖培养基购自梅里埃上海生物制品有限公司。Vitek 2 compact 全自动微生物鉴定系统、ATB-FUNGUS3酵母样真菌药敏试剂盒（微量稀释法）购自法国生物梅里埃公司。MJX-250BⅢ霉菌培养箱购自天津泰斯特仪器有限公司。

1.2方法

1.2.1所有标本同时接种哥伦比亚血琼脂平板和沙保罗葡萄糖琼脂平板，35℃有氧环境培养24～72 h。使用VITEK 2 Compact 全自动微生物鉴定系统YST鉴定卡对纯培养菌落进行鉴定。使用梅里埃ATB-FUNGUS 3药敏试剂盒进行药敏试验。结果判断参照试剂盒说明书。参照鉴定仪器与药敏试剂盒推荐的质控菌株ATCC 2950光滑假丝酵母菌、ATCC6258 柔假丝酵母菌对细菌鉴定与药敏进行质控。质控结果在控的情况下记录试验结果。

1.2.2所有數据采用WHONET 5.6 软件进行统计分析。

2结果

2.1假丝酵母菌种类、患者年龄分布 从2627份产科住院患者阴道拭子中分离到假丝酵母菌489株，分离率18.61%。其中白假丝酵母菌407株占83.23%，光滑假丝酵母菌73株占14.93%，其它假丝酵母菌9株占1.84%，以白假丝酵母菌为主，其次为光滑假丝酵母菌。从年龄分布来看，感染人群以21～30岁（77.10%）为主，其次为31～40岁（13.10%），其它年龄段占9.8%。见表1。

2.2假丝酵母菌对5种抗真菌药物的敏感性 本研究中发现有2例（0.5%）白假丝酵母菌对两性霉素B耐药；有3例（0.7%）白假丝酵母菌，1例光滑假丝酵母菌对5-氟胞嘧啶呈现剂量依赖性敏感（SDD）。未发现其它酵母菌对上述两种药呈现耐药。所分离到的酵母菌对唑类抗真菌药物都呈现出不同程度的耐药性，光滑假丝酵母菌要略高于白假丝酵母菌，但二者要明显低于其它假丝酵母菌，见表2。

3讨论

假丝酵母菌属在女性VVC患者中的分布与地区和种群相关。通常在单纯性或复杂性VVC的患者中，同一份阴道拭子只能分离到一种假丝酵母菌；但是，也有少数患者（2～5%）发现同时存在两种或两种以上假丝酵母菌感染[4]。本试验中，未发现存在两种或以上假丝酵母菌感染的情况。其原因可能由于假丝酵母菌在沙保罗平板上菌落形态差别较小，未使用显色培养基。因此，不排除有漏检的可能。

与欧美相比，非白假丝酵母菌在亚非国家更为常见。在土耳其、印度和尼日利亚，光滑假丝酵母菌所致VVC比例占30～37%[5-6]。但是，我们观察到所有非白假丝酵母菌占比为16.77%。这与国内其它研究及美国的报道非常相似[7]。

研究表明，依照美国CLSI M27-A检测阴道分离酵母菌对氟康唑的敏感性，提示大约21.1%菌株对氟康唑耐药[1]。也有研究表明，阴道酵母菌对氟康唑和氟胞嘧啶耐药性较低分别为（3.7% 和3.0%）[8]。在本研究中，白假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌对5种抗真菌药物的耐药率都处于较低水平。其中，两性霉素B耐药率低于1%，5-氟胞嘧啶未发现耐药株，氟康唑耐药率低于3%，伊曲康唑耐药率低于6%，伏立康唑耐药率低于3%。在不同菌株中，氟康唑MIC值升高仅见于克柔假丝酵母菌（R：75.0%，SDD：25%，主要考虑存在天然耐药）。耐药率低的原因可能是试验对象身体状况良好、无慢性病病史、无长期使用抗真菌药物史。因此，从该人群中分离到的酵母菌大多数为野生型菌株。

本研究还发现，部分感染患者阴道内分离的非白色假丝酵母菌，体外药敏试验对吡咯类抗真菌药不敏感。但是，使用氟康唑治疗该耐药株表现出良好的临床疗效。我们推测其可能与减少阴道真菌数量、缓解阴道负荷有关。

由于条件的限制，很少有医院将真菌药敏试验用于对VVC患者的管理和动态监测。但是，我们认为在顽固性VVC或突破性真菌感染患者优化治疗时，药敏试验具有较大的指导意义。本研究提示我们，治疗假丝酵母菌感染时应结合菌种鉴定及药敏试验结果合理选择抗真菌药物。

参考文献：

[1]Ragunathan L，Poongothai GK，Sinazer AR，et al.Phenotypic Characterization and Antifungal Susceptibility Pattern to Fluconazole in Candida species Isolated from Vulvovaginal Candidiasis in a Tertiary Care Hospital[J].J Clin Diagn Res，2014，8（5）：DC01-04.

[2]Achkar JM，Fries BC.Candida infections of the genitourinary tract[J]. Clin Microbiol Rev，2010，23（2）：253-273.

[3]Geiger AM，Foxman B，Gillespie BW.The epidemiology of vulvovaginal candidiasis among university students[J].Am J Public Health，1995，85（8Pt1）：1146-1148.

[4]Gamarra S，Morano S，Dudiuk C，et al.Epidemiology and antifungal susceptibilities of yeasts causing vulvovaginitis in a teaching hospital[J]. Mycopathologia，2014，178（3）：251-258.

[5]Asticcioli S，Sacco L，Daturi R，et al.Trends in frequency and in vitro antifungal susceptibility patterns of Candida isolates from women attending the STD outpatients clinic of a tertiary care hospital in Northern Italy during the years 2002-2007[J].New Microbiol，2009，32（2）：199-204.

[6]Holland J，Young ML，Lee O，et al.Vulvovaginal carriage of yeasts other than Candida albicans[J].Sex Transm Infect，2003 Jun，79（3）：249-250.

[7]陈凤燕，张丽霞，徐柏平. 阴道假丝酵母菌病的病原菌耐药性分析[J].中华医院感染学杂志，2014，24（9）：2133-2137.

[8]Richter SS，Galask RP，Messer SA，et al.Antifungal susceptibilities of Candida species causing vulvovaginitis and epidemiology of recurrent cases[J].J Clin Microbiol，2005，43（5）：2155-2162.