通迪胶囊的长期毒性研究

郑东森++季晖++胡庆华

【摘 要】 目的：观察通迪胶囊对SD大鼠的长期毒性作用，为临床应用提供参考依据。方法：将120只SD大鼠分成4组，通迪胶囊高剂量组、中剂量组、低剂量组和阴性对照组，连续给药26周，恢复4周，每周记录摄食量和体重，分别于第13周、26周和恢复4周后处死三分之一大鼠，检测血液学、血液生化学指标，系统尸解并计算脏器系数，对重要脏器做病理组织学检查。结果：通迪胶囊各剂量组与对照组比较，摄食量、体重和脏器系数未出现统计学差异（P>0.05），血液学、血液生化指标和病理组织学检查未见与通迪胶囊相关异常，恢复期未见迟发性毒性。结论：实验设置的最低剂量为临床剂量的15.5倍，故该药在临床剂量下长期使用毒性低，安全性良好。

【关键词】 通迪胶囊；长期毒性；SD大鼠

【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2017）09-0040-06

Long-term Toxicity Study of Tongdi Capsule

ZHENG Dongsen JI Hui HU Qinghua*

China Pharmaceutical University， Nanjing 210009， China

Abstract：Objective To study the long-term toxicity of tongdi capsule in SD rats and provide a reference for clinical application. Methods 120 SD rats were randomly divided into four groups： high dose group， middle dose group， low-dose group and negative control group. All rats were administrated for 26 weeks and then recovered for 4 weeks， recorded food intake and body weight weekly. 1/3 rats were killed after 13 weeks， 26 weeks and the remaining recovered for 4 weeks. The hematological and biochemical parameters， organ coefficient and histopathology of major organs were measured. Results There was no significant influence of tongdi capsule on food intake， body weight，histopathology，organ coefficient， hematological and biochemical parameters（P>0.05）.Conclusion The lowest dose set by the experiments is 15.5 times of clinical dose，therefore the tongdi capsule is safe in clinical use.

Keywords：Tongdi Capsule；Long-Term Toxicity；SD Rats

通迪胶囊由三七、紫金莲、延胡索、七叶莲、细辛、鸡屎藤六味中药组成，主要包含人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、细辛酯素、白花丹醌等活性成分[1]，具有活血行气，散瘀止痛的功效，临床用于治疗癌痛、术后疼痛、跌打伤痛、肩颈痹痛、头痛、痛经等[2]，已取得了良好疗效。为进一步证明该药在临床上长期应用安全无毒副作用，故进行大鼠连续重复进口给药长期毒性实验，观察是否会由于药物蓄积而对机体产生毒性反应及其严重程度，确定无毒性反应剂量，为临床安全用药提供参考。

1 仪器与材料

1.1 药物 通迪胶囊（半成品，批号：20160211，贵州景诚药业）。本实验室常温密闭保存，临用时用蒸馏水溶解并稀释为所需质量浓度混悬液。

1.2 试验动物 SPF级SD大鼠120只，6周龄，体重100～120g，雌雄各半，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，动物生产合格证号：2008001658379。于恒温恒湿动物房雌雄分笼饲养，每笼5只。室温：22～26℃，相对湿度：60%～70%，12h交替光照，标准饲料，自由饮水，笼具每天清洗消毒1次，通风良好，室内配有空调。实验前动物在动物房内适应性喂养7d。

1.3 仪器 迈瑞BC-5800全自动血液细胞分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）；贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪（日本Beckman Coulter K.K.）；徕卡ASP 200s全封闭式组织脱水机（德国Leica）；徕卡EG1140半自动包埋机（德国Leica）；徕卡RM2245半自动轮转式切片机（德国Leica）；徕卡ST4040半自動染色机（德国Leica）；奥林巴斯DP72-BX45病理显微成像系统（日本Olympus）。

2 方法

2.1 剂量分组 将适应性喂养后的大鼠，随机分为四组，每组30只，雌雄各半，分别为通迪胶囊高剂量组、中剂量组、低剂量组和阴性对照组。

2.2 给药方法及周期 灌胃给药，每周6d，每天1次。高剂量组给药剂量为2.8g/kg（相当于成人临床用量62倍），中剂量组为1.4g/kg（相当于成人临床用量31倍），低剂量组为0.7g/kg（相当于成人临床用量15.5倍），各剂量组给予等体积、不等浓度的通迪胶囊溶液，对照组给予等体积溶剂（蒸馏水）。给药周期为26周，停药后再观察4周。

2.3 观察指标 一般观察包括动物外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便等，摄食量和体重每周称量记录1次。给药中期13周时每组处死雌雄各5只，给药26周结束时每组处死雌雄各5只，停药4周后再处死每组剩下的雌雄各5只。计算脏器系数，检测血液学、血液生化学指标以及系统尸解和病理组织学检查。

2.4 数据处理 采用Microsoft Excel和GraphPad Prism进行数据处理检验，计算均值（x）及标准差（s），各剂量组与对照组比较，进行One Way ANOVA检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 一般状况 在26周给药过程及恢复期间，大鼠精神状态、反应，行为活动，排便情况、口、眼及孔道分泌物、毛色，清洁度等日常观察指标均未见异常。

3.2 体重增长的影响 对大鼠每周体重进行1次统计，各组大鼠体重增长情况良好。各给药组与阴性对照组之间并无统计学差异（P>0.05），体重增长呈线性增加。

3.3 摄食量的影响 对各组大鼠摄食量每周进行一次统计，各组与阴性对照组相比未见明显异常。

3.4 脏器及其系数的影响 给药组大鼠给药13周、26周及恢复期后心、肝、肺、肾、脑、脾、胸腺、前列腺、睾丸、子宫、卵巢等脏器系数与对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05），表明通迪胶囊连续长期给药后对大鼠各脏器无明显毒性影响。

3.5 血液学指标的影响 给药组大鼠在给药期和恢复期后，其白细胞计数（WBC）、淋巴细胞计数（LYM）、单核细胞计数（Mon）、嗜酸性粒细胞计数（Eos）、嗜碱性粒细胞计数（Bas）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HGB）、血小板計数（PLT）、凝血时间（CT）等主要血常规指标与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。给药26周后，高剂量组中性粒细胞计数（Neu%）与阴性对照组相比存在统计学差异（P<0.05），13周及恢复期后Neu%与对照组相比没有统计学差异。

3.6 生化指标的影响 给药组大鼠在给药期和恢复期，其总胆红素（TBIL）、总蛋白（TP）、丙氨酸氨基转换酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（Urea）、肌酐（Cr）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、A/G等主要血液生化指标与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。给药13周及恢复期后，各剂量组天门冬氨酸氨基转换酶（AST）与对照组相比无统计学差异（P<0.05）。给药26周后，高剂量组AST与对照组相比存在统计学差异（P<0.05）。

3.7 对脏器病理组织学的影响 给药13周后，少数大鼠个别脏器出现下列病变：①高剂量2只大鼠肝细胞轻微空泡变和小叶炎症；4只大鼠有轻度间质性肺炎；3只大鼠结肠粘膜轻微或轻度变性坏死，炎细胞浸润。②对照组3只大鼠肝细胞轻微空泡变，4只大鼠轻度间质性肺炎；2只肾脏间质见极少量炎细胞浸润。给药26周后，少数大鼠个别脏器出现下列病变：①高剂量1只大鼠周围肺组织间质出血，充血。5只大鼠有轻度间质性肺炎；5只大鼠小肠粘膜轻微或轻度变性坏死，炎细胞浸润。②对照组5只大鼠轻度间质性肺炎；5只大鼠轻度小肠粘膜糜烂。恢复期后，少数大鼠个别脏器出现下列病变：①高剂量1只大鼠周围肺组织间质出血，充血。4只大鼠有轻度间质性肺炎；5只大鼠小肠粘膜轻微或轻度变性坏死。②对照组5只大鼠轻度间质性肺炎；5只大鼠轻度小肠粘膜糜烂。上述肺组织及肠黏膜病变高剂量及对照组均出现，无剂量相关性，肺组织病变属于动物自发性病变[9]。肠黏膜病变可能为标本固定不当所致。其他病变例数少。其余受检脏器实质细胞无变性坏死，间质无炎症等毒性病理变化。

4 讨论

通迪胶囊临床推荐成人日用量为6粒，用于治疗经络阻滞所致的癌症疼痛，术后疼痛，跌打伤痛，肩颈痹痛以及胃脘疼痛，头痛，痛经等[2]，目前关于通迪胶囊的报道主要为临床观察与含量测定，未见其安全性评价的相关报道，由于缺乏毒性研究且临床研究不会服用过量药物，本实验对其长期毒性进行评价，为临床安全用药提供参考。

参照《药物重复给药毒性试验技术指导原则》，以0.7、1.4、2.8g/kg的剂量，相当于成人临床用量62、3、15.5倍，给药体积为10 mL/kg。灌胃给药6个月，停药1个月。研究结果显示，通迪胶囊各剂量组大鼠与对照组相比，一般行为活动、摄食量、体重和脏器系数等均无显著性差异，未出现动物死亡及毒性相关现象。给药13周及恢复期后血常规与血液生化学结果未见显著差异。给药26周后，血常规指标仅见高剂量组中性粒细胞（Neu%）高于对照组，（P<0.05），该差异仅限于单一剂量组，且在给药初期及恢复期并未见明显异常。差异变化幅度较小，无明显剂量相关性，均值在正常值参考范围内[3]，可能为个体感染及炎性细胞浸润所致，与药物毒性无明显相关[4-6]。血液生化指标仅见高剂量组AST高于对照组（P<0.05），上述差异仅见于单一时期，单一对照组，其他组别并无显著性差异，差异幅度较小，无明显剂量相关性，均值在正常范围内[7-8]，且在查看相关肝脏组织病理切片后并未发现任何肝组织病变，故考虑为动物个体原因所致，与通迪胶囊毒性作用无关。病理组织学检查结果显示，鼠肺组织发生轻度病变，但高剂量和对照组均出现，且其病变例数较少，无剂量相关性，属于动物自发性病变[9-10]。其余受检脏器实质细胞无变性坏死，间质无炎症等毒性病理变化。

综上所述，通迪胶囊对SD大鼠长期给药无明显毒性作用，其安全性良好，表明临床使用剂量并不会对人体一般状况、饮食、体重、血液及各主要组织脏器的生长发育及组织形态方面产生影响。

参考文献

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[10]王三琼， 陈萨， 覃芝，等. 80只空白对照组SD大鼠自发性病变病理分析[C]// 中国西部实验动物学术年会. 2009.

（收稿日期：2017-3-10 编辑：梁志庆）