制首乌对去卵巢大鼠子宫指数和性激素水平的影响研究

朱 璨 李尧锋 彭 芳 杨长福 谭登友

贵阳中医学院，贵州 贵阳 550025



实验研究

制首乌对去卵巢大鼠子宫指数和性激素水平的影响研究

朱 璨 李尧锋 彭 芳 杨长福*谭登友

贵阳中医学院，贵州 贵阳 550025

目的：研究制首乌对去卵巢大鼠子宫指数和血清性激素水平的影响。方法：将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、制首乌高、中、低剂量组、阳性对照组。采用手术建立去卵巢大鼠模型，假手术组摘除双侧卵巢周围等体积脂肪，造模后7d，制首乌高、中、低剂量组分别灌服浓度为0.3 g/mL、0.15 g/mL 、0.075 g/mL的制首乌水煎液，阳性对照组灌服浓度为0.018mg/mL的补佳乐，连续给药28d。计算各组大鼠子宫指数，ELISA法测定大鼠血清雌二醇( E2)、卵泡刺激素( FSH)、黄体生成素( LH)水平。结果：与假手术组比较，模型组大鼠子宫指数下降，血清中E2含量降低、LH和FSH 浓度升高(P<0.05)。与模型组比，制首乌各处理组可不同程度的升高子宫指数和血清E2含量，降低LH、FSH浓度(P<0.05)。结论：制首乌可通过调节子宫指数和性激素来调节生殖轴，说明其具有植物雌激素样作用。

制首乌；去卵巢；植物雌激素

“肾藏精，主生殖”、“女子以肝为先天”、“肝肾同源”，中医学认肝肾主宰“肾-天癸-冲任-胞宫”生殖轴，肝肾亏虚，是女性诸病的根本原因。现代女性在各种社会环境因素诱导下，更容易发生性腺衰老和性激素失衡，导致提前出现卵巢功能衰竭、不孕、更年期等病症。中药补益肝肾法具有独特的疗效，制首乌作为重要的补益药之一，其味苦、甘，微温，归肾、肝经，功能补肝肾、益精血[1]。《本草纲目》记载其“能养血益肝，固精益肾，健筋骨，乌须发，为滋补良药”。有研究表明何首乌饮可预防和延缓卵巢颗粒细胞凋亡，延缓睾丸衰老[2，3]。但制首乌对去势大鼠生殖内分泌研究尚未见报到，本实验采用手术建立去卵巢大鼠模型，并给予制首乌补肝肾、益精血，探索其对去卵巢大鼠子宫指数和性激素的影响。

1 仪器与材料

1.1 动物 清洁级SD雌性大鼠，未孕，体重250～270 g，60只，购自长沙天勤生物技术有限公司[动物生产许可证号：SCXK(湘)2014-0010]。

1.2 主要仪器 KG-SX-700高压灭菌锅(上海茸研仪器有限公司);TG20-WS高速离心机(湖南湘立科学仪器有限公司);Varioskan Flash多功能酶标仪(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)。

1.3 主要试剂和药品 雌二醇( E2)、卵泡刺激素( FSH)、黄体生成素( LH) 酶联免疫试剂盒(北京科盈美科技有限公司，各批号20151020)；戊酸雌二醇(补佳乐)(拜尔医药保健有限公司，国药准字J20130009)；制首乌(北京同仁堂药材有限公司)。制首乌水煎液浓缩至含生药0.3g/mL药液，0.45mm微孔滤膜过滤，置于 4℃ 冰箱保存。

2 方法

2.1 模型制备[4]将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、制首乌高、中、低剂量组、阳性对照组，每组10只。25%乌拉坦腹腔注射麻醉，固定，无菌条件下，肋弓与脊椎夹角处沿后正中线作一1.0～1.5cm的皮肤切口，皮肤切口向右牵拉,钝性分离骶脊肌长约1.0cm，可见一乳白色脂肪团,脂肪团中找到一黄豆大小粉红色桑椹样的卵巢，结扎后切除右侧卵巢，脂纺团回纳腹腔，注入1×105 U青霉素，缝合肌肉。将皮肤切口向左拉，同理切除左侧卵巢。缝合皮肤。术后注意保暖。假手术组大鼠同样手术操作，但仅切除等体积脂肪。

2.2 药物处理 造模后7d，制首乌高、中、低剂量组分别灌服浓度为0.3g/mL、0.15g/mL、0.075g/mL的制首乌水煎液，阳性对照组灌服0.018mg/mL补佳乐，假手术组、模型组灌服蒸馏水，灌胃量1mL/100g。连续给药28d。

2.3 子宫指数 处死动物，取子宫，剔除粘附脂肪等组织，称重，计算子宫指数(子宫湿重/体重×100%)。

2.4 血清性激素检测 末次给药次日，麻醉大鼠后，股动脉取血，静置20min后，室温下离心20min ，转速2500r/min，取上清液，严格按照试剂盒说明书操作，酶联免疫法测定血清E2、FSH、LH水平。

3 结果

3.1 制首乌水煎液对去卵巢大鼠子宫指数的影响 与假手术组相比，模型组大鼠子宫指数明显降低(P<0.05)；与模型组比较，制首乌各处理组和阳性对照组均能提高去卵巢大鼠的子宫指数(P<0.05)，其中制首乌高剂量组和阳性对照组具有高度统计学意义(P<0.01)。详见表1。

表1 制首乌水煎液对去卵巢大鼠子宫指数的影响 ±s)

注：与假手术组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 制首乌水煎液对去卵巢大鼠性激素水平的影响 与假手术组比较，模型组大鼠血清E2含量明显降低、FSH和LH浓度显著升高(P<0.05)。与模型组相比，制首乌高、中剂量组和阳性对照组均能显著升高去卵巢大鼠的血清E2含量，降低模型大鼠血清FSH浓度(P<0.05，P<0.01)；制首乌中、低剂量组和阳性对照组能明显降低血清LH浓度(P<0.05)。详见表2。

表2 制首乌对去卵巢大鼠性激素水平的影响 ±s)

续表2 表2 制首乌对去卵巢大鼠性激素水平的影响 ±s)

注：与假手术组比较，△P<0.05；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

4 讨论

国内外学者发现制首乌具有广泛的药理作用，如延缓衰老，增强免疫力，抗菌抗炎，抗癌及抗诱变，保肝，降血脂及抗动脉粥样硬化等作用[2-8]。制首乌既能补肝肾、延缓衰老，其对于“下丘脑-垂体-卵巢-子宫”生殖轴应有一定的调节作用。E2、FSH和LH是女性生殖轴的重要激素，E2不仅对女性生殖系统的生长、发育、分化有重要的调控作用，而且对骨骼系统、心血管系统、中枢神经系统的正常功能也有重要影响； FSH 、LH 共同作用，调控卵巢各种性激素的合成与分泌，促进卵泡的正常生长发育。当卵巢功能减退时，由卵巢合成并分泌的E2含量降低，在生殖轴负反馈调节下，腺垂体分泌的FSH和LH浓度升高[9]。

本实验中发现，去卵巢大鼠子宫指数和血清中E2含量明显下降，FSH和LH浓度明显升高。而制首乌各处理组和阳性对照组可不同程度的升高模型大鼠子宫指数和血清E2含量，并降低FSH、LH浓度。其中制首乌高剂量组和阳性对照组效果最为明显。结果可知，制首乌能改善内源性雌激素缺乏导致低雌激素和高促性腺激素状态。本研究提示，该药具有植物雌激素样作用。

植物雌激素(Phytoestrogen，PE)是天然存在于一些植物中、具有雌激素效能的化合物。当女性进入绝经期，或者由于多种因素诱发性腺衰老、体内雌激素水平下降，即会出现更年期综合征、骨质疏松、心血管疾病及老年性痴呆等疾病。应用雌激素替代疗法则易产生高血凝状态、高血压、水肿及痴呆等副作用，并增加乳腺癌及子宫内膜癌等雌激素依赖性肿瘤的发病危险。所以，近几年来己经更多地被PE代替[10]。本实验结果表明制首乌可通过调节性激素和子宫指数来调节生殖轴，并提示该药具有植物雌激素作用，为指导临床用药，为更年期妇女保健、雌激素依赖性肿瘤的用药提供了理论依据，但制首乌植物雌激素作用的机制有待进一步研究。

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Effect of Polygoni Multiflori Radix Preparata on Uterine Coefficient and Sex Hormones in Ovariectomized Rats

ZHU Can LI Yaofeng PENG Fang YANG Changfu*TAN Dengyou

Gui Yang College of Traditional Chinese Medicine,Guiyang 550025,China

Objective To study the effect of Polygoni Multiflori Radix Preparata on uterine coefficient and sex hormones in ovariectomized rats.Methods Rats(n=60) were randomly divided into sham-operation, model, Polygoni Multiflori Radix Preparata high dose、middle dose、low dose and positive control groups.Taken operation to set up the model of ovariectomized rats, and removed isopyknic fat in sham-operation group.After 7 days, the Polygoni Multiflori Radix Preparata high dose、middle dose and low dose groups were respectively given drugs as 0.3 g/mL、0.15 g/mL 、0.075 g/mL, the positive control group was given drug as 0.018 mg/mL, and sustainted 28 days.Figured up the uterine coefficient, and maked use of ELISA to measure the level of serous E2、FSH、LH of all rats.Results Compared with sham-operation rats, the uterine coefficient of the model group declined, and the content of serous E2 decreased, and the concentration of FSH and LH increased(P<0.05).Compared with model group, the Polygoni Multiflori Radix Preparata and positive control groups could inordinately increase the uterine coefficient and the serous E2, reduce the serous FSH and LH.Conclusion Polygoni Multiflori Radix Preparata can improve the reproduction by adjust uterine coefficient and sex hormones.It hints that Polygoni Multiflori Preparata has the function likes Phytoestrogen.

Polygoni Multiflori Radix Preparata；Ovariectomized；Phytoestrogen

贵阳中医学院中西医结合基础学科资助项目(黔学位合字ZDXK[2016]25号);贵州省科技厅科技计划课题(黔科合SY字[2013]3021号)；贵州省科教青年英才培养工程项目(黔省专合字[2012]165号)；贵州省2015年度省级本科教学工程建设项目。

朱璨，女，硕士，助教，研究方向为中医药防治生殖系统疾病。E-mail:992204746@qq.com

杨长福，男，博士，副教授，研究方向为中药及天然药物防治疾病的生化机制。E-mail:zfy435140961@qq.com

R285.5

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1007-8517(2017)10-0025-03

2017-03-27 编辑：陶希睿)