X-连锁无丙种球蛋白血症患儿ABO血型一例

覃小矿，马曙轩，侯云生，王孟键

（1.柳州市妇幼保健院输血科，广西柳州545001；2.首都医科大学附属北京儿童医院输血科，北京100045；3.柳州市妇幼保健院检验科，广西柳州545001)

·短篇报道·

X-连锁无丙种球蛋白血症患儿ABO血型一例

覃小矿1，马曙轩2，侯云生3，王孟键2

（1.柳州市妇幼保健院输血科，广西柳州545001；2.首都医科大学附属北京儿童医院输血科，北京100045；3.柳州市妇幼保健院检验科，广西柳州545001)

基因检测；X-连锁无丙种球蛋白血症；ABO血型

在儿科患者血型鉴定中经常会遇到正反定型不符的情况，临床上会考虑是否为抗原减弱或抗体减弱并针对性的增加试验进行验证。但如果先从患儿的病历资料入手，大致分析其正反不符的原因可减少试验的盲目性，最后加以血型基因型检测进行确证得出正确结果。本文就最近工作中遇到的一例由X-连锁无丙种球蛋白血症导致的ABO正反定型不符进行分析检测，通过血型基因检测确认患儿血型，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料患儿，田某某，男，14岁4个月17 d，以“咳嗽5 d，咯血3 d”入院。查体：体温(T) 37.5℃，心率(P)90次/min，呼吸(R)22次/min，血压(BP) 120/70 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，双肺呼吸音粗，未闻及干湿啰音。左腕关节稍肿胀，无活动受限，伸侧皮肤可见一直径约2 cm大小红色陈旧性瘢痕，无渗出。初步诊断：咯血原因待查；X-连锁无丙种球蛋白血症；肺炎；左侧桡骨慢性骨髓炎；鼻窦炎。入院后申请备O型RHD(+)红细胞2 U，输血前检测中发现患儿ABO血型正反定型不一致。

1.2 血型鉴定方法

1.2.1 卡式及试管法复核严格按照卡式法及试管法操作流程进行复核血型，试剂卡选用美国奥森多公司血型鉴定试剂卡(批号：ABR132A)，3%～5%标准红细胞(A1细胞和B细胞)选用江阴力博公司生产(批号：20160428)，采用强生全自动血型分析仪(ORTHOAUTOVUE Innova)进行复核。

1.2.2 吸收放散试验取1 mL受检者红细胞用生理盐水洗涤3次，加20滴相对应的经标化的抗血清(抗-A和抗-B，效价为64)，37℃孵育10 min后放置4℃冰箱吸收2 h，离心取上清液检测吸收前后抗体效价的变化，再用冷盐水洗涤数次，当末次上清液相应抗血清效价为0时，提示洗涤充分。取洗净的红细胞加半量0.9%生理盐水，于56℃水浴中放散，振荡数次，10 min后取出，3 500 r/min离心5 min，取上清液为放散液，加相应的标准红细胞悬液1滴，观察结果。

1.2.3 血型基因检测采用TIATamp Blood DNA Kit(天根公司)提取标本基因组DNA，并检测DNA浓度，最佳浓度为30～50 ng/μL，按照人类ABO血型基因分型PCR-SSP检测试剂盒(天津秀鹏生物技术开发有限公司)操作说明进行PCR扩增，每孔加入患儿DNA提取液(10 μL)及dNTP-Buffer稀释液(110 μL)的混合液各10 μL。扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像后分析其SSP基因结果。

2 结果

2.1 患儿血型正反定型结果血清学方法判定患儿正定型为O型，反定型为AB型，正反定型不符，排除了人为技术试剂等原因后，重新采集患儿的标本进行试管法检测，与之前的结果一致，见表1。

表1 患儿血型正反定型结果

2.2 患儿血清吸收放散结果吸收前后标化的抗-A和抗-B的效价不变，均为64；放散后的放散液与A1、B、O细胞均不反应，提示显示患儿红细胞上无A、B抗原，血浆中亦无抗-A、抗-B抗体。

2.3 患儿血型基因结果通过对患儿的DNA进行PCR-SSP分析后，得到相应的孔位及目的条带，显示5、7、10孔位为阴性，故患儿血型基因型检测为O1O2，表型为O型，见图1。

图1 患儿PCR扩增产物电泳图

3 讨论

通常情况下，影响血型正反定型不符的原因有很多，根据兰炯采等[1]推荐，主要分为几个大类：(1)红细胞抗原减弱或消失；如ABO亚型，白血病导致抗原减弱等；(2)红细胞额外反应，如自身凝集素，类B等；(3)混合凝集，如近期输异型血导致；(4)血清定型减弱或无反应，如新生儿或者老年人，低丙种球蛋白等；(5)血清额外反应如冷自身抗体或同种抗体等。大部分的ABO正反定型不符都可以通过分析以上的原因，查阅相关资料，结合病史分析，设计针对性的试验如洗涤红细胞、增加反应时间和血清量、酶处理红细胞、吸收放散试验、唾液型物质测定等方法通常能获得满意的结果，但如果笔者先从患儿病历诊断分析入手，可增加试验的针对性，减少试验的盲目性。

患儿为14岁青春期男孩，近一年来经常因“肺炎”静点抗生素处理，病情反复；20+d前患“中耳炎”未愈，且患儿自幼时开始表现出抵抗力弱，半年前患儿连续感染“麻疹”、“水痘”，4岁时曾患有“支原体肺炎”，治疗约1个月余，治愈；2011年左手腕骨髓炎史、开窗引流手术史，否认特殊家族遗传病史。实验室检查CD系列提示B淋巴细胞亚群明显降低，Ig系列提示IgA、IgG、IgM明显降低，经基因检测确诊为X-连锁无丙种球蛋白血症(X-linked agammaglobulin，XLA)，因此怀疑患儿由于体内缺乏免疫球蛋白而致反定型无凝集出现。

XLA是由于人类酪氨酸激酶(BTK)基因突变导致前B细胞进一步成熟为B细胞障碍引起的原发性免疫缺陷病，为X-连锁隐形遗传病。大多患病者都有BTK基因的突变[2]，由于B细胞发育受阻，导致体内缺乏B细胞和免疫球蛋白，故体内检测不到相应的血型抗体。本病的发病率(0.5～1.0)/10万[3]，发病者均为男性，其中约20%的XLA患者可能并发关节炎，亦可能合并幼年特发性关节炎[4-5]。临床症状通常发生在6个月以后，一旦母源性抗体从婴儿的血液中消失，易发生反复的呼吸道和胃肠道感染[6]。XLA的诊断多依赖临床和血丙种球蛋白检测，血IgA、IgG、IgM均明显降低，CD淋巴细胞检测发现B淋巴细胞缺如，T淋巴细胞增加，CD4/CD8倒置，静脉注射免疫球蛋白替代疗法是治疗该疾病的标准疗法。

该患儿已经14岁，正定型为O型，反定型尚未出现任何抗体，吸收放散试验提示患儿红细胞上无A、B抗原，血清中无抗-A、抗-B抗体。为了弄清患儿的真实血型，我们采用了基因检测的方法进行确证，结果证实患儿确实为O型，但由于其B淋巴细胞发育成熟受阻，导致其血清中无相应的血型抗体出现。近来来，血型基因型检测技术的快速发展，解决了我们血型鉴定工作中的很多问题[7-8]。目前针对ABO血型系统基因型检测方法主要有PCR-DNA测序法、PCR-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)、PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)和PCR-SSCP等[9]，血型基因分型克服了血型血清学方法的种种限制[10]。因此，在血清学方法不能确定患儿ABO血型的情况下，可以采用基因学方法确认。临床诊断常常是我们处理血型正反不符的重要参考资料，结合临床病例资料可以合理的分析解释试验结果，避免试验的盲目性，增加试验的针对性，有效提高我们处理疑难血型的能力。本例患儿最后通过基因型确定其为O型RHD(+)，配给O型阳性红细胞2U主次侧均无凝集和溶血，配血相合，输注后无输血反应。

[1]兰炯采,陈静娴,马红丽,等.推荐ABO疑难血型三步分析法[J].中国输血杂志,2010,23(3):165-168.

[2]王晓川,王莹,金兼弘和,等.X连锁无丙种球蛋白血症的基因诊断[J].中华儿科杂志,2005,43(6):449-452.

[3]Nasseri S,Sorouri R,Pourpak Z,et al.Molecular characterization of Bruon's tyrosine kinase deficiency in 12 Iranian patients with presumed X-linked agammaglobulinemia[J].Investig Allergol Clin Immunol,2011,21(7):572-574.

[4]Sukumaran S,Marzan K,Shaham B,et al.A child with X-linked agammaglobuinemia and enthesitis-related arthritis[J].Int J Rheumatol,2011,2011:175973.

[5]Toth B,Volokha A,Mihas A,et al.Genetic and demographic features of X-agammaglobulinemia in Eastern and Central Europe:a cohort study[J].Mol Immunol,2009,46(10):2140-2146.

[6]李小琳,付四毛.X-连锁无丙种球蛋白血症3例报告并文献复习[J].临床儿科杂志,2014,32(7):690-693.

[7]庄光艳,闫芳,侯玉涛,等.血液病致ABO抗原减弱的血型基因定型研究[J].北京医学,2014,6:478-480.

[8]肖建宇,曾荣,史广耀,等.多重PCR-SSP方法在RHD基因检测中的应用[J].中国输血杂志,2013,26(12):1202-1204.

[9]朱发明,傅启华,金蕾,等.PCR-SSP法检测A～(1,2)BO～(1,2)血型基因型[J].临床检验杂志,2000,18(5):267-269.

[10]朱祥明,杨通汉,姚富柱,等.基因分型技术应用于疑难ABO血型的分型[J].临床输血与检验,2015,17(6):554-557.

R725.5

D

1003—6350（2017）10—1705—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.10.054

2016-11-28)

马曙轩。E-mail：masxfwyy@sina.com