仔猪致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验

赵美盈

（青海省西宁市大通县黄家寨镇兽医站，青海西宁 810000）

仔猪致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验

赵美盈

（青海省西宁市大通县黄家寨镇兽医站，青海西宁 810000）

从西宁市4个养猪场采集到50份仔猪黄、白痢腹泻粪便样品，总共分离出50株大肠杆菌，其中致病性大肠杆菌有10株，对该10株致病性大肠菌进行药物敏感性试验，发现对丁胺卡那霉素、菌必治和恩诺沙星等药物敏感，对庆大霉素、四环素、氨苄青霉素、阿莫西林以及复方新诺明等药物有耐药性。临床上选用敏感药物防治仔猪大肠杆菌病，能够有效控制疫病。

仔猪；致病性大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验

仔猪大肠杆菌病是由大肠埃希氏杆菌引起的一种急性传染病，可导致新生仔猪生长发育不良或大批量死亡，严重危害养猪业的健康发展。根据仔猪发病日龄和临床表现，能够分为三种：仔猪黄痢（多发于1～3日龄仔猪，以排出黄色粪便和迅速死亡为特征）、仔猪白痢（多发于7～30日龄仔猪，以排出灰白色粥状粪便为特征）和仔猪水肿病（常见于断奶后1～2周的仔猪，发病突然，致死率高达100%）。本文对50份仔猪黄、白痢腹泻粪便样品进行了细菌分离、生化试验、动物致病性试验及药物敏感性试验，旨在为防治仔猪大肠柑橘病提供科学依据。

1 材料

1.1 病料采集

从西宁市4个养猪场（A、B、C、D）采集到50份仔猪（1～30日龄）腹泻粪便样品。其中A猪场15份样品，B猪场23份样品，C猪场6份样品和D猪场6份样品。

1.2 培养基和药物

营养肉汤、营养琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、微量生化鉴定管以及药敏纸片。

1.3 实验动物

50只体重约20g的小白鼠。

2 方法

2.1 细菌分离

取少量样品，在麦康凯琼脂平板上划线进行细菌分离，于37℃培养24h后观察菌落的生长情况，再从麦康凯琼脂平板上挑取单个可疑菌落划线于伊红美蓝琼脂平板上，于37℃培养24h后观察培养基上的菌落特征，然后对可疑菌落涂片，革兰氏染色，镜检。

2.2 生化试验

对分离菌进行肠杆菌常规生化试验，试验项目有：糖分解试验（甘露醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖和麦芽糖），甲基红试验（M-R试验），靛基质试验，硫化氢试验，枸橼酸盐利用试验，尿素酶试验以及动力试验。

2.3 动物致病性试验

将52只健康小白鼠分成试验组（50只）和对照组（2只）。采用分离菌肉汤培养物腹腔接种试验组小白鼠，按0.4ml/只，每株分离菌接种一只；采用无菌肉汤接种对照组小白鼠，按0.4ml/只。间隔2h观察一次小白鼠发病死亡状况，持续观察2d，将病死小白鼠先用新洁尔灭浸泡，无菌剖检，采集心血涂片，经革兰氏染色镜检，并将病料接种再伊红美蓝琼脂，根据试验结果统计4个猪场致死性大肠杆菌分离率。

2.4 药敏试验

对分离的致病性大肠杆菌采用圆形纸片扩散法进行药物敏感性试验。

3 结果

3.1 细菌分离结果

共分离出50株细菌。分离菌在麦康凯琼脂平板上的菌落特征表现为湿润、边缘整齐，隆起、圆形，呈红色，中等大小；在伊红美蓝琼脂平板上的菌落特征表现为边缘整齐、隆起、圆形，呈紫黑色、带金属光泽，中等大小。分离的菌株革兰氏染色均为阴性，为无芽胞、无荚膜、两端钝圆的短杆菌，初步判定为大肠杆菌。

3.2 分离菌生化试验结果

所有分离菌株均可分解葡萄糖，产酸产气；均可分解甘露醇、麦芽糖和乳糖，产酸；部分菌株可以分解蔗糖，产酸。所有菌株经动力试验、靛基质试验以及甲基红试验（M-R试验）为阳性；经尿素酶试验、枸橼酸盐利用试验和硫化氢试验为阴性，所有菌株生化反应结果同大肠杆菌典型的生化反应特性相一致，据此能够判定分离菌株均为大肠杆菌。

3.3 动物致病性试验结果（表1）

将分离菌株接种小白鼠约18h后，开始出现死亡，2d内有10个菌株导致小白鼠死亡，接种其他菌株的小白鼠有轻微症状；对照组的2只小白鼠健活。

表1 仔猪大肠杆菌病原分离结果

3.4 药敏试验结果

10株致病性大肠杆菌对丁胺卡那霉素、菌必治和恩诺沙星敏感；对庆大霉素、四环素、氨苄青霉素、阿莫西林以及复方新诺明不敏感（耐药率100%）；对环丙沙星、氟哌酸中度敏感；对链霉素、卡那霉素、痢特灵、头孢氨苄及氯霉素有耐药性。

4 小结与讨论

（1）4个猪场50份粪便样品均可分离出大肠杆菌，其中10株是致病性菌株。4个猪场（A、B、C、D）致病性大肠杆菌检出率分别为20%、17.4%、33.3%和16.7%，由此可见导致仔猪发生腹泻的原因部分是由致病性大肠杆菌直接感染引起，还有部分原因是猪场日常饲喂管理不当，造成仔猪机体抗病力下降，由条件致病菌或其他病原体引起。

（2）药敏试验结果能够看出，大肠杆菌对多种药物如链霉素、卡那霉素、氯霉素以及氨苄青霉素、阿莫西林等均产生了耐药性，原因可能是猪场长期使用抗生素防治疾病，或普遍使用抗生素作为饲料添加剂，以致大肠杆菌的耐药性非常严重。为此，猪场防治疾病时应首先进行药敏试验，采用对疾病敏感性强的药物治疗，尽量联合交叉用药，防止耐药菌株的产生。

（3）临床上仔猪大肠杆菌病的发生同仔猪机体抵抗力、环境卫生条件、气候变化、饲料营养及饲养管理等因素密切相关，应从坚持自繁自养、严格引种，注重母猪饲管、改善饲养条件，疫苗注射以及合理选择用药等方面综合防控本病。

[1] 姚火春.兽医微生物学实验指导[M].北京：中国农业出版社，2002.

[2] 周华林，熊江林，王长义，等.猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析[J].中国畜牧兽医，2009，36（1）：109-111.