不同处理方式对白藓不定芽诱导影响的试验初探

李春丽

(黑龙江省牡丹江市三道林场)



不同处理方式对白藓不定芽诱导影响的试验初探

李春丽

(黑龙江省牡丹江市三道林场)

本文研究了不同处理方式对白藓不定芽诱导的影响，结果表明，0.1%氯化汞和10%次氯酸钠两种灭菌剂的灭菌效果有着明显地差异，白藓地下芽的最佳灭菌剂为0.1%氯化汞，灭菌适宜时间为10min，其灭菌的效果最好，污染率和死亡率均较低。MS培养基中加入NAA、6-BA不同浓度及配比对白藓地下芽启动培养的萌发率影响差异较大，以MS+NAA0.8mg/L+6-BA 0.6mg/L培养基为白藓地下芽的最佳诱导培养基。

白藓 灭菌 不定芽诱导

白藓(Dictamnus dasycarpus Thrcz.)别名八股牛、白羊鲜、羊鲜草、山牡丹、八木籽等，为芸香科多年生宿根草本[1]。其以干燥根皮入药，俗称白鲜皮，具有清热解毒、祛风化湿、止痒等功效[2]，主治皮肤瘙痒、荨麻疹、黄水疮、湿疹、肝炎和风湿性关节炎等疾病[3]。在我国主要产于东北三省、内蒙古、河北、江西等地[4]，常生于山坡林缘、疏林灌丛和草甸。随着白藓皮需求量的增加，野生资源已满足不了市场需求，再加上野生白藓资源不断遭到破坏，因此白藓的工厂化育苗和大面积人工栽培的研究尤为重要。本文研究了不同处理方式对白藓不定芽诱导的影响，旨在探讨其有效的组织培养繁殖方法，建立优良的无性繁殖体系，为白藓的充分利用和人工栽培提供优质苗木。

1 材料与方法

1.1 试验材料

于5～7月，选择生长健壮、无病虫害的白藓优良单株作为试验植株，取优良单株的地下幼芽为外植体。

1.2 试验设计与方法

外植体灭菌方法：将待实验用的地下芽用自来水冲洗，并用细毛刷把表面泥土刷净，然后置于超净工作台上用75%酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗2～3次，然后进行灭菌。灭菌试验设计为：分别采用0.1%氯化汞和10%次氯酸钠进行灭菌，0.1%氯化汞和10%次氯酸钠灭菌时间设置为8min、10min、12min、14min、16min5个处理。灭菌后用无菌水冲洗5次，滤纸吸干表面水分，接种于培养基中，每瓶接种一个外植体，每个处理接种10瓶，重复3次，接种一周后观测并统计其污染率。

不定芽诱导培养基与方法：以MS为基本培养基添加不同浓度的NAA、6-BA作为不定芽诱导培养基，试验设计见表1。将灭菌后的地下芽接种于表1的培养基中，每个培养基接种20瓶，重复3次，接种后观察不定芽的发生情况。

2 结果与分析

2.1 不同灭菌方法对白藓地下芽接种效果的影响

从图1可以看出，两种灭菌剂处理对白藓地下芽接种的污染率和死亡率的影响有着明显的差别。用0.1%氯化汞灭菌时，地下芽的污染率随着灭菌时间的增加而明显地下降，而死亡率随之逐渐上升。当0.1%氯化汞灭菌时间为8min时，外植体死亡率最低，但是污染率最高，高达45.2%；灭菌时间为10min时，污染率为20.4%，死亡率为6.5%；当灭菌时间继续上升时，其地下芽死亡率明显上升，灭菌12min、14min和16min处理的死亡率分别比10min处理增加了15.3%、28.1%和35.6%，而污染率下降并不大。当10%次氯酸钠灭菌时间为16min时，污染率最低，但死亡率最高，达18.7%；当灭菌时间为14min时，污染率和死亡率与其他处理相比，较为适中。10%次氯酸钠灭菌处理，污染率随着灭菌时间的延长而降低，而死亡率随之升高。两种灭菌剂相比较，0.1%氯化汞的灭菌效果好于10%次氯酸钠。由此可得出结论白藓地下芽的最佳灭菌处理为0.1%氯化汞灭菌10min。

表1 白藓不定芽诱导培养基

图1 不同灭菌方法对白藓地下芽接种效果的影响

2.2 不同激素及配比对地下芽启动培养的影响

从表1可知，白藓地下芽接种于不同诱导培养基中其萌发率有着明显地差别。在MS培养基中加入NAA和6-BA两种激素，白藓地下芽可在15～20d后开始萌动，出现分化现象，但不同激素浓度配比的分化数量和萌发率各不相同。试验的所有培养基中，当NAA浓度为0.4mg/L和6-BA浓度为0.3mg/L时，地下芽的萌发率为61.7%，随着6-BA和NAA浓度的增加，白藓地下芽的萌发率逐渐上升，当NAA浓度为0.8mg/L和6-BA浓度为0.6mg/L时，萌发率最大，高达83.3%；当NAA浓度大于0.8mg/L、6-BA浓度大于0.6mg/L时，随着两种激素浓度的增加，白藓地下芽的萌发率逐渐下降；当两种激素浓度为试验设计最大浓度时，其萌发率下降至56.7%。经方差分析和多重比较，结果表明：加入不同激素及浓度配比的培养基间白藓地下芽的萌发率存在显著性差异(P=0.008<0.05)，特别是培养基5处理与其他培养基间达到极显著差异。因此，白藓地下芽的最佳诱导培养基为MS+NAA0.8mg/L+6-BA 0.6mg/L。

表2 不同培养基对白藓地下芽启动培养的影响

注：同列不同小写字母表示差异显著(P值<0.05)。

3 结论

在白藓的组织培养中，对外植体的有效灭菌对试验的成功至关重要。灭菌剂的选择和灭菌时间会因取材部位和取材时间的不同而不同。组培中常用的灭菌剂有氯化汞、次氯酸钠、双氧水、过氧化钠等，不同的灭菌剂其灭菌时间也有所不同，有时灭菌时间过短，污染率较高，有时灭菌时间过长，污染率虽有下降，但外植体会出现失水萎蔫等现象。本试验以白藓地下芽为外植体，采用0.1%氯化汞和10%次氯酸钠作为灭菌剂进行灭菌试验研究，结果表明：白藓地下芽的最佳灭菌剂为0.1%氯化汞，灭菌适宜时间为10min，其灭菌的效果最好，污染率和死亡率均较低。不同的培养基对白藓组织培养的诱导率有着重要的影响，本文研究了MS培养基中加入NAA、6-BA不同浓度及配比对白藓地下芽启动培养萌发率的影响，结果表明，随着6-BA和NAA浓度的增加，白藓地下芽的萌发率逐渐上升，当NAA浓度为0.8mg/L和6-BA浓度为0.6mg/L时，萌发率最大；不同激素及浓度配比的培养基间白藓地下芽的萌发率存在显著性差异。白藓地下芽的最佳诱导培养基为MS+NAA0.8mg/L+6-BA 0.6mg/L。

[1]中国科学院植物志编辑委员会.中国植物志[M].43卷，2分册.北京：科学出版社，1997：167.

[2]张明发，沈雅琴.白鲜皮药理作用的研究进展[J].抗感染药学，2012，(2)：95-99.

[3]马文海，张静主编.大兴安岭主要药用植物栽培技术[M].哈尔滨：东北林业大学出版社，2006：73.

[4]中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴[M].2册.北京：科学出版社，1980：551.

责任编辑：王宇红、葛君

校 对：王大军

Experimental Study on Effects of Different Treatments on the Adventitious Buds Induction of Dictamnus dasycarpus Thrcz.

LiChunli

(First-auther's address:Sandao forest farm of Mudanjiang city, Mudanjiang157000,Heilongjiang,China)

This paper studied the effects of different treatment on the adventitious buds induction of D. dasycarpus Thrcz. The results showed that 0.1% mercuric chloride and 10% sodium hypochlorite sterilization effect of two kinds of fungicides had obvious difference, the best sterilization agent fraxinella underground buds was 0.1% mercuric chloride, the suitable sterilization time was 10min, pollution rate and mortality were lower. Join the NAA and 6-BA of different concentration and ratio of underground bud initiation culture influence germination rate differences of MS in culture medium, culture medium was the best culture medium of bud induced fraxinella underground by MS+NAA0.8mg/L+6-BA 0.6mg/L.

Dictamnus dasycarpus Thrcz.; sterilization; adventitious bud induction

2016-12-18