一起猪瘟与蓝耳病混合感染并继发传染性胸膜肺炎病例的综合诊断与防控

■文/山东农业大学动物科技学院 陈同煜 彭 涛 王玉超 古金元 胡东方 刘思当山东费县梁邱兽医站 范贵瑞

一起猪瘟与蓝耳病混合感染并继发传染性胸膜肺炎病例的综合诊断与防控

■文/山东农业大学动物科技学院 陈同煜 彭 涛 王玉超 古金元 胡东方 刘思当山东费县梁邱兽医站 范贵瑞

山东某小规模自繁自养猪场发生一起以断奶仔猪和育肥猪为主的急性呼吸道病疫情，病猪表现高热、气喘、被毛粗乱、弓背瘦弱、先便秘后腹泻等病症，呈明显窝发特点，几乎全群发病，病死率高达60%。通过病死猪剖检诊断、细菌分离鉴定、组织病理学检查和分子生物学检测，确诊为猪瘟与蓝耳病毒混合感染并继发胸膜肺炎病例。通过加强生物安全措施，未发病猪群对相关病毒性疾病进行了紧急免疫，并经药敏试验筛选敏感药物，对猪群实施药物防治，使该猪场疫情得以迅速控制。

猪瘟；蓝耳病；胸膜肺炎放线杆菌；诊断；防治

猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征(俗称“蓝耳病”)是危害养猪生产的重要病毒性疾病。近年来，规模化养殖场均高度重视猪瘟和蓝耳病的免疫防控，使两种疫病的防控取得了显著成效，但一些小规模猪场或散养户因为免疫程序不合理或操作不规范等因素导致这两种疾病仍然时有发生，给猪群健康生产带来了严重危害。且常成为其他病毒或细菌性疾病发生的“导火索”，进而给猪场造成更大的经济损失。下面就一起猪瘟与蓝耳病混合感染并继发传染性胸膜肺炎的重症疫情进行分析讨论，为类似疾病的诊治提供参考借鉴。

1 发病背景

山东某小规模自繁自养猪场现有存栏经产母猪30余头，于2016年12月初发生一起严重的伤亡疫情。病猪表现高热(40.5～41.5℃)、气喘、被毛粗乱、弓背瘦弱、先便秘后腹泻，有的出现耳尖发绀、腹部及四肢末端呈青紫色病症，主要集中于20～30kg保育猪群，50～80kg肥猪也有发病死亡，呈明显窝发特点且传播迅速，发病率近乎100%，病死率高达60%。猪场使用国内某厂家伪狂犬疫苗3日龄滴鼻，14日龄蓝耳经典弱毒苗肌肉注射，30日龄猪瘟细胞苗一次免疫，猪瘟与蓝耳病母猪均为跟胎免疫。发病后紧急投服氟苯尼考、强力霉素抗生素及注射板蓝根针剂，效果不明显，遂前来就诊。

2 综合诊断

2.1 病猪临床检查

送检病猪主要表现高热、气喘、耳尖发绀、耳部及臀部皮肤潮红发紫、背部皮肤密布针尖大出血点、被毛粗乱、眼睑肿胀出血(图1-A)。

2.2 病猪剖检病变

下颌淋巴结、腹股沟淋巴结等出血肿大，切面黑白相间呈大理石样(图1-B)；喉头黏膜出血(图1-C)；肾表面散布针尖大出血点(图1-D)；肺尖叶、心叶及两侧膈叶上部暗红色实变，间质增宽伴有轻微水肿(图1-E)；心外膜出血(图1-F)；脾脏淤血；膀胱黏膜点状出血；脑膜充血、出血。

图1 病猪临床及剖检病变

2.3 组织病理学病变

对剖检猪的淋巴结、脾脏、肾脏、心脏、肺脏、脑组织采样，10%中性福尔马林溶液固定，常规方法制作石蜡切片，H.E染色，镜检。淋巴结发生出血性坏死性淋巴结炎病变(图2-A)；肺脏高度充血，被膜下淋巴窦显著扩张，充满浆液、纤维素及嗜中性白细胞，肺泡内浆液、纤维素渗出，肺泡壁毛细血管显著充血，部分肺组织呈典型间质性肺炎病变(图2-B、C)；心内膜下出血，伴有炎性细胞浸润和浆液、纤维素渗出，心肌纤维变性坏死(图2-D)；肾脏间质出血，淋巴细胞浸润(图2-E)。软黏膜充血、淋巴细胞浸润，神经元变性坏死并发生噬神经现象，血管周围间隙淋巴细胞浸润，胶质细胞灶状增生，呈病毒性脑炎病变(图2-F)。

2.4 病原学检查

对剖检病猪的脑、脾脏、肝脏、肾脏、淋巴结及扁桃体采样，液氮保存，将冻存于液氮中的组织病料解冻后取适量组织加入灭菌PBS液并研磨成匀浆，9,000rpm离心4min，取上清液，使用北京全式金EasyPure Viral DNA/RNA kit(批号为J30723)提取病毒核酸。根据GenBank中公布的序列分别设计猪瘟病毒、猪蓝耳病经典毒株的特异性引物，片段大小分别为599bp和372bp，用PCR/RT-PCR方法扩增，将扩增产物在1.5%的琼脂糖凝胶中电泳，根据紫外凝胶成像仪下条带位置判定病猪的病原感染状况。

2.5 细菌分离鉴定及药物敏感试验

采集肺组织划线接种于含新生牛血清(终浓度10%)和NAD(终浓度20g/mL)的TSA培养基上，37℃培养24～48h后挑取疑似菌落进行传代纯化，培养24～48h后可见圆整、中央凸起，闪光不透明，直径1～2mm的小菌落，革兰氏染色镜检，观察到菌体呈革兰氏阴性，多为球杆菌或短杆菌，初步诊断疑似胸膜肺炎放线杆菌(APP)。同时，挑取细小单菌落接种于含新生牛血清(终浓度10%)和NAD(终浓度20g/ mL)的TSB液体培养基中进行增菌，37℃，12h后挑取菌液进行PCR鉴定。根据Genbank公布的序列设计胸膜肺炎放线杆菌(APP)的特异性引物，片段大小346bp，经验证具有较好的特异性和扩增效率，用PCR/RT-PCR方法扩增后，将扩增产物在1.5%的琼脂糖凝胶中电泳，紫外凝胶成像仪下根据条带位置判定病猪的病原感染状况。

分别挑取两种细菌及培养基其他形态菌落均匀涂布于新鲜血琼脂平板上，选取头孢噻呋钠、强力霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、阿莫西林、庆大霉素、丁胺卡那霉素、林可霉素药敏片，每片药物含量10μg。无菌镊子将药敏片按一定间隔分别平贴于培养基表面，于37℃CO2培养箱中培养24h。根据抑菌圈直径(φ)判定细菌对药物的敏感程度，判定标准为：φ≥25mm为极度敏感；15mm≤φ＜25mm为高度敏感；10mm≤φ＜15mm为中度敏感；φ＜10mm为低度敏感；无抑菌圈则为耐药。结果显示：头孢噻呋钠、恩诺沙星极度敏感；丁胺卡那霉素、庆大霉素高度敏感，氟苯尼考、阿莫西林中度敏感，强力霉素、林可霉素低度敏感。

图2 组织病理学变化

3 结论

综合分析上述试验结果，此次疫情可能是猪瘟与蓝耳病混合感染并继发猪传染性胸膜肺炎所致。该猪场在有疫苗免疫保护的情况下却暴发严重疫情，可能与以下3方面因素有关，①该场免疫存在漏洞，初生仔猪猪瘟、蓝耳病、伪狂犬病仅免疫一次，同样母猪仅跟胎免疫一次，显然这样的免疫强度难以提供较好的免疫保护。②该养殖户在疫苗免疫和药物肌肉注射时，没有执行“一猪一针”原则，而是一个针头打一窝，致使本次疫情呈明显的窝发特点。③该场猪舍条件简陋，冬季御寒能力差，加之生物安全措施不完善，是造成细菌性疾病滋生和蔓延的又一因素。

图3 1.5%琼脂糖凝胶电泳注：M：DL-2000 Marker；+：阳性对照，-：阴性对照；右侧S：检测样品。

图4 分离菌株革兰氏染色 200X

图5 1.5%琼脂糖凝胶电泳

4 防控

4.1 加强生物安全举措封闭猪场，严禁外来人员进出，立即淘汰无治疗价值病猪，全场实行带猪消毒，加强猪场卫生消毒。

4.2 药物防治和紧急免疫

4.2.1 发病猪只猪干扰素肌肉注射。4.2.2 全群包被恩诺沙星和黄芪多糖拌料，饮水添加电解质和多种维生素，

连用3～5d。 4.2.3 选用高效猪瘟细胞苗对发病猪群紧急免疫，剂量为正常免疫的3～5倍，保证一猪一针，防治交叉感染。

4.3 加强饲养管理

清洁猪舍环境卫生，降低猪只饲养密度，提高猪舍温度，保证新鲜空气流通，均衡饲料营养，定期带猪消毒，减少各类应激反应。

4.4 调整猪群免疫程序

4.4.1 对胎次较高、产能低下母猪进行淘汰，母猪群猪瘟、蓝耳病、伪狂犬病的疫苗免疫由跟胎免疫改为3～4次/年普免。

4.4.2 新生仔猪进行猪瘟超免，首免1月后进行二次加强免疫；伪狂犬病出生当天滴鼻，使用专用雾化喷头，保障滴鼻效果；同时加强保育仔猪蓝耳病疫苗免疫。

经实施上述防治措施，使得该猪场疫情得以快速控制，及时遏制了经济损失，猪场恢复稳定生产。■