赛山梅组培快繁技术初探

张 琦，臧巧路，林新春

（浙江农林大学 亚热带森林培育国家重点实验室培养基地，浙江 临安 311300）

赛山梅组培快繁技术初探

张 琦，臧巧路，林新春

（浙江农林大学 亚热带森林培育国家重点实验室培养基地，浙江 临安 311300）

以赛山梅Styrax confusus的带芽茎段为外植体，MS为基本培养基，对其进行微繁实验。结果表明，赛山梅的最佳增殖培养基为MS+1 mg·L-1BA，其最高增殖系数为4.00，且芽丛生长旺盛；最佳生根培养基为1/2MS +1 mg·L-1IBA，生根率为40%，根系较长且健壮；试管苗移栽至泥炭、蛭石、珍珠岩配制比例为1:1:1的混合基质中，成活率为58%。

赛山梅；组织培养；快繁

赛山梅Styrax co nfusus，安息香科Styracaceae安息香属Styrax落叶乔木，广泛分布于浙江、江苏、四川、广东、广西、福建等省海拔100 ~ 1 700 m的丘陵、山地疏林中[1-2]。安息香属植物具有生长迅速的特点而被作为一种速生树种利用；安息香科中秤锤树Sinojackia xylocarpa，野茉莉Styrax japonicus等植物的花或成熟果实颜色艳丽，可作为观赏植物[3]；另有中华安息香S. ch inensis的树干通直，材质坚硬，纹理清晰致密，便于加工，可作为工业用材；安息香属植物分泌的树脂称“安息香”，含较多的香脂酸，是贵重的药材，还可用于制作高级香料[4-5]。安息香具有提神、活血、止痛等功能，安息香属植物具有很高的经济及社会价值而具有广阔的市场前景。安息香属植物的传统繁殖技术主要有种子繁殖、扦插繁殖、根蘖繁殖，但这些技术往往繁殖周期较长、增殖系数较低，且受季节限制，而组织培养具有繁殖速度快、增殖系数大、缩短生产周期、不受季节限制等优点，已在各种观赏、药用和材用植物中得到了广泛应用[6-8]。赛山梅传统的繁殖方式为种子繁殖，其繁殖周期过长，种子发芽率低，无法满足市场需求，利用植物组织培养技术有望实现其快速繁殖[9-11]。目前在安息香属植物中，仅对越南安息香Styrax tonkinensis（又名白花树）进行了组培快繁技术研究[12]。本实验通过植物组织培养技术来实现赛山梅的离体快速繁殖，为赛山梅的无性快繁和产业化育苗提供技术支持，对安息香属其他树种的组织培养具有重要的参考和借鉴价值。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料为赛山梅的无菌试管苗，来自浙江农林大学智能实验楼培养室，赛山梅种子来自浙江省林业科学研究院。

1.2 试验方法

1.2.1 初代培养 选用MS为赛山梅增殖培养的基本培养基，添加BA浓度为0.3 mg·L-1，选取长势良好带有2 ~ 5个芽的茎段为试验材料，每试管一茎段。4周后，选取生长良好、健壮的植株进行实验。

1.2.2 芽增殖培养 选用MS为赛山梅芽增殖培养的基本培养基，采用完全随机区组设计，6苄基腺嘌呤(BA)设置0，0.3 mg·L-1，1.0 mg·L-13个浓度梯度，萘乙酸(NAA)设置0，1.0 mg·L-1，3 mg·L-13个浓度梯度，共9组处理（表1）。各培养基中添加30 g·L-1蔗糖以及3 g·L-1固化剂，pH为5.7。选取长度2 cm左右，带有一个顶芽且长势一致的茎段为试验材料（图1a），接种于增殖培养基中。每组处理20管，4周后，统计芽的生长和增殖状况，实验重复2次。

1.2.3 生根培养 选用 1/2 MS为赛山梅生根培养的基本培养基，分别添加0，0.3，1.0，3.0，10.0 mg·L-1浓度的吲哚乙酸(IBA)和1，2，4 mg·L-1浓度的NAA，共8组处理（表2）。各培养基中添加30 g·L-1蔗糖以及3 g·L-1固化剂，pH为5.7。选取芽长大于1 cm和长势一致的带芽茎段为试验材料，接种于生根培养基中。每组处理20管，4周后，统计根的生长状况，实验重复2次。

1.2.4 试管苗移栽 选取高4 ~ 5 cm，根系长且粗壮的试管苗于强光下（20 000 lx）炼苗1周。1周后取出试管苗，在40℃左右温水中洗净残余的培养基后，移栽到混合基质中（泥炭：蛭石：珍珠岩=1:1:1），4周后统计移栽成活率。

1.2.5 培养条件和数据统计分析 光培养条件：温度（25±2）℃，光周期16 h/8 h，光照强度2 400 lx；芽增殖系数=新生总芽数/接种总芽数；试管苗根诱导率=诱导出根的试管苗/试管苗总数×100%；运用SPSS 19.0与DPS 6.50进行数据分析，方差分析采用Duncan法。

表1 不同植物激素对赛山梅增殖的影响Table 1 Effect of different hormones on proliferation of shoot

2 结果与分析

2.1不同浓度BA和NAA组合对赛山梅芽增殖的影响

不同的NAA和BA配比会对赛山梅芽的增殖产生不同的影响。从表1可以看出，NAA浓度不变时，随BA浓度的增加，芽的增殖系数总体呈上升的趋势；当BA浓度不变时，随NAA浓度的增加，芽的增殖系数呈下降趋势。在BA浓度1.0 mg·L-1，NAA浓度为0 mg·L-1时，叶片嫩绿，不易褐化，芽生长旺盛（图1b）且增殖系数达到4.00。实验显示，赛山梅的最佳增殖培养基为MS+1mg·L-1BA。

2.2 不同浓度的IBA和NAA对赛山梅生根诱导的影响

5个不同浓度的IBA和3个不同浓度的NAA对赛山梅进行生根诱导。由表2可知，随着IBA浓度的增加，根的数量先增加后减少，在浓度为1 mg·L-1和3 mg·L-1的IBA中达到峰值，但在含有3 mg·L-1IBA的培养基中诱导出的根基部有愈伤化现象（图1c）。在1 mg·L-1浓度的IBA中，根粗壮，较长，生根数也最多（图1d）。而

2 不同浓度IBA ent concentration生根率/% NAA /(mmg·L-1） IB表2 Table 2 Differe BA /(mg·L-1）A和NAA对赛山ns of IBA and NA % 平 生根特征0影响tion of S. confusus 0.00无生根根0 0 0 0 1 2 4 0.3 1.0 3.0 10.0 0 0 0 0 40 40 30 30 30 60 2.7 2.7 0.9 2.3 1.1 2.0无生根较粗壮纤细较粗短，粗短，粗短，粗短，根壮，较长较长，有部分愈伤基部膨大基部膨大基部膨大基部膨大，部分伤化分愈伤化注：生根数代代表平均值±标准准误；多重比较采采用Duncan法，数数值后有相同字母山梅生根诱导的影AA on root induct平均每株生根数0b 0b 75±1.056a70±1.161a95±0.450ab35±1.193ab15±0.625ab00±0.580ab母表示差异不显著著（P<0.05）。

研究结果表明，一定浓度的BA可以促进芽的增殖，而NAA会抑制芽的增殖且随着NAA浓度的增加抑制作用更强。该结论与张亮亮的研究结果一致，NAA对安息香属的白花树芽增殖也有抑制作用[12]，但白花树的最佳增殖的BA的浓度为0.3 mg·L-1，而赛山梅最佳的增殖所需BA浓度更高，为1 mg·L-1。

大多研究认为，IBA和NAA都有促进植株生根的作用[13-14]。本实验结果表明一定浓度的IBA，NAA都可以促进生根，但过高质量浓度的IBA易导致基部膨大，出现愈伤化现象严重且根较短，不利于移栽成活，这与陈芳等的研究存在较大差异[10]。不同的木本植物对生根诱导所需生长调节剂的浓度不同，因此 NAA的浓度不适宜用来进行赛山梅试管苗的诱导。更低浓度的NAA是否有利于促进赛山梅生根将在今后的实验中做进一步论证。同时，本研究中试管苗的生根率不高，仍需对生根条件进行优化。

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会. 中国植物志（第60卷、第2分册）[M]. 北京：科学出版社，1987：113.

[2] 黄淑美. 安息香科的系统位置及地理分布[J]. 亚热带热带植物学报，1994，2（4）：15－33.

[3] 彭重华，张程，巫涛，等. 湖南安息香科种质资源及其在园林中的应用前景[J]. 广东农业科学，2011，38（7）：76－79.

[4] 王峰，鄢琼芳，华会明. 安息香属植物化学成分及药理作用研究进展[J]. 广东药学院学报，2009，25（5）：541－545.

[5] 王一波，陈欢，王淑美，等. 中药安息香药理作用研究进展[J]. 亚太传统医药，2015，11（3）：48－49.

[6] 张程. 中国安息香科植物种质资源及研究进展[J]. 江西林业科技，2010，（6）：42－46.

[7] 曹天旭，宿肇辉，韩超慧. 铁皮石斛组培快繁技术的研究[J]. 黑龙江农业科学，2014，（5）：30－34.

[8] 闫海霞，蒋月喜，黄昌艳，等. 月季‘卡罗拉’的组培快繁技术[J]. 热带作物学报，2016，37（9）：1741－1746.

[9] 王江民. 安息香的生产与栽培技术[J]. 农村实用技术，2005，（2）：17－18.

[10] 陈芳，白平，李勇杰，等. 西南桦优良无性系组培快繁技术[J]. 西部林业科学，2015，44（5）：8－12.

[11] 董玉玲，陈茂盛，王秀兰，等. 木本油料作物美藤果组织培养植株再生体系的建立[J]. 分子植物育种：2016，14（2）：462－470.

[12] 张亮亮，何云核，柳新红，等. 白花树组织培养技术研究[J]. 浙江林业科技，2013，33（3）：16－19.

[13] Chand P K, Sahoo Y, Pattnaik S K, et al. In vitro meristem culture-an efficient ex situ conservation strategy for elite mulberry germplasm. In: Mohanty RC (ed) Environment: change and management[M]. Kamla Raj Enterprises，New Delhi，India， 1995，127－133.

[14] Saxena S. In vitro propagation of the bamboo (Bambusatulda Roxb.) through shoot proliferation[J]. Plant Cell Rep，1990，9（8）：431－434.

Experiment on Microprapagation of Styrax confuses

ZHANG Qi，ZANG Qiao-lu，LIN Xin-chun
(State Key Laboratory Cultivation Base of Subtropical Silviculture, Zhejiang A & F University, Lin’an 311300, China)

Experiments were conducted on tissue culture of Styrax confuses by stem with bud as explants. The results showed that MS supplemented with 1 mg/L of BA had the best effect for bud multiplication, with the highest proliferation coefficient of 4.00, and the bud cluster grew well. The best medium for rooting was 1/2 MS supplemented with 1 mg/L of IBA, with rooting rate up to 40%, and the roots were long and strong. Plantlets were transplanted in medium of peat, vermiculite and perlite with a ratio at 1:1:1. Survival rate was 58% after 4 weeks.

Styrax; S. confusus; tissue culture; micropropagation

S723.1+32.6

A

1001-3776（2017）01-0051-04

10.3969/j.issn.1001-3776.2017.01.009

2016-09-21 ；

2016-12-31

浙江省科技厅项目(2012C22097)，浙江农林大学学生科技创新项目(1011210047)

张琦，硕士研究生，从事森林培育方向研究；E-mail：754989034@qq.com。通信作者：林新春，教授，博士，从事植物生物技术研究；E-mail：lxc@zafu.edu.cn。