刺络泻血对高脂血症模型大鼠血脂、NO及ET-1影响的研究

战慧敏 赵慧玲 谭 丽 陈子晨 张 博 曾 蕊 魏丹蕾

(北京中医药大学针灸推拿学院,北京,100029)

刺络泻血对高脂血症模型大鼠血脂、NO及ET-1影响的研究

战慧敏 赵慧玲 谭 丽 陈子晨 张 博 曾 蕊 魏丹蕾

(北京中医药大学针灸推拿学院,北京,100029)

目的:观察刺络泻血疗法对高脂血症大鼠一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)及血脂的影响,探讨刺络泻血疗法对高脂血症模型大鼠调脂的作用及机制。方法:将32只雄性SD大鼠随机分为4组,每组8只即空白对照组、模型组、刺血观察组、药物观察组,除空白对照组外,其他组大鼠给予高脂饲料喂养建立高脂血症模型。造模成功后空白对照组不进行任何干预;模型组只进行抓取及按压;刺血观察组在大鼠后肢浅静脉进行刺血干预,0.3～0.5 mL/次,2次/周,治疗4周;药物观察组给予辛伐他丁2 mg/(kg·d)灌胃干预,治疗4周。观察大鼠的血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清TC、TG、HDL-C、ET-1含量均显著上升,NO含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,刺血组及药物组大鼠血清TC、TG、HDL-C、ET-1含量均降低,NO含量均上升,差异有统计学意义(P<0.01);各组大鼠血清HDL-C含量差异无统计学意义(P>0.05),但模型组较空白组有下降趋势,刺血组及药物组较模型组均有上升趋势。结论:刺络泻血疗法可以纠正脂质代谢异常,并通过抑制ET-1含量的增加而维持血管内皮细胞平衡,从而减轻和延缓内皮细胞损伤。

刺络泻血;高脂血症;血脂;一氧化氮;内皮素-1;大鼠

高脂血症(Hyperlipidemia,HLP)是脑卒中、冠心病、心肌梗死和动脉粥样硬化等心脑血管疾病的主要危险因素之一[1]。世界卫生组织的报告也指出,胆固醇水平的升高是全球五大主要致死原因之一[2],我国在2002年60岁以上人群的患病率分已经达到23.4%[3],HLP的发病率也会随着老年人口的增长而不断升高。因此对HLP的防治研究已成为目前医学界一项重要的研究课题,积极寻求安全、有效的调脂方法具有重要的临床意义。刺血疗法是一种使用安全、操作简便且不良反应小的传统中医疗法,有研究表明刺血疗法能降低血液黏滞度,刺激血管引起血管平滑肌细胞复杂的信号传导变化,产生细胞内、细胞间及血管中部和整体的调节反应[4]。我们在本实验采用高脂饲料喂养建立HLP模型大鼠,观察刺血对大鼠的血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的影响。探讨刺血疗法治疗HLP的相关机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 清洁级雄性SD大鼠32只,体重(200±20)g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证号:SCXK(京)2012—0001。饲养于室温22 ℃,相对湿度45%清洁条件下,自由进食及饮水,适应性饲养1周。

1.1.2 试剂与仪器 高脂饲料(82.5%基础饲料,10%猪油,5%蛋黄粉,2%胆固醇,0.5%胆酸钠)由科奥协力有限公司生产;10%水合氯醛(北京中医药大学生理教研室配制);辛伐他汀(杭州默沙东制药有限公司生产,批号:20130068);小号三棱针(华佗牌);一次性注射针头(上海金塔医用器材有限公司);TC、TG、HDL-C、LDL-C、NO、ET-1试剂盒(北京环宇金科生物医学技术有限公司);离心机(eppendorf公司高速冷冻离心机5810R)。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备 动物适应性饲养1周后,采用完全随机设计法,利用随机数字表将32只SD大鼠随机分为4组,每组8只,即A空白组、B模型组、C刺血组、D药物组。空白组喂以普通饲料,其余3组采用喂养特制高脂饲料法诱发大鼠HLP模型,依据每周测定的大鼠体重设定1周饲料剂量,均分为每日量饲养,每日的饲养量为70 g/kg,至8周末。

1.2.2 干预方法 第5周起开始干预治疗,空白组、模型组不给于任何治疗,只抓取按压;刺血组取双侧足三里、丰隆穴(参考实验针灸学[5])刺血,总计出血量0.5 mL,2次/周;药物组给予辛伐他汀2 mg/(kg·d)灌胃治疗。

1.2.3 指标检测与方法 第8周末,全部大鼠禁食、禁水12 h,10%水合氯醛腹腔注射麻醉,腹主动脉取血5 mL,静置1 h后,4 ℃,3 000 r/min离心15 min,取分离的上层血清,送检血脂4项(TC、TG、HDL-C、LDL-C);采用ELISA法测定一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)含量,严格按照试剂盒说明书操作。

2 结果

2.1 各组大鼠血脂4项指标比较 与空白组比较,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量显著上升,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,刺血组及药物组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与空白组比较,模型组大鼠血清HDL-C含量有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,刺血组及药物组大鼠血清HDL-C含量均有上升趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。本实验的造模方法可能对HDL-C作用不明显。见表1。

2.2 各组大鼠血清NO、ET-1比较 与空白组比较,模型组大鼠血清NO含量显著降低,ET-1含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,刺血组及药物组大鼠血清NO含量均上升,ET-1含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。见表2。

表1 各组大鼠血清血脂4项含量比较

注:与正常对照组比较,*P<0.01;与模型组比较,△P<0.05,△△P<0.01。

图1 各组大鼠血清血脂4项含量比较

表2 各组大鼠血清NO、ET-1含量比较

注:与正常对照组比较,*P<0.01;与模型组比较,△P<0.05,△△P<0.01。

图2 各组大鼠血清NO含量比较

图3 各组大鼠血清ET-1含量比较

3 结论

HLP,即脂质代谢紊乱,是指由于脂肪代谢或运转异常使血浆中一种或几种脂质高于正常水平的病症。可直接引起一些严重危害人体健康的疾病,同时也是老龄化社会中危害老年人身心健康的严重全身性代谢性紊乱疾病。

中国古代医籍中并没有“高脂血症”这一病名记载。HLP是一个现代医学概念,根据HLP的临床表现,其应当归属于“脂”“膏”范畴,病因责之于“痰浊”“瘀血”,肝失疏泄,脾失健运,痰湿偏盛,是该病的基本病机[6],因此与肝、脾、肾功能失调关系密切。《素问·血气形志》云:“凡治病必先去其血,乃去其所苦,伺之所欲,然后泻有余,补不足。”刺血治疗HLP是在总结前人运用针灸治疗HLP的经验基础上产生的,且现代研究表明刺血疗法治疗HLP有显著疗效[7]。本实验基于临床经验及文献分析,选取足三里及丰隆穴为治疗HLP的主要穴位。足三里穴是足阳明胃经合穴,是“四总穴”之一。《千金要方》记载:“胸中瘀血稽满,胁膈痛不能久立,膝痞寒,三里主之。”同时足三里为下合穴,可以调六腑功能,有调理中焦、疏通经络、扶正祛邪的功效。足三里穴对消化系统有明显的调整作用,“肚腹三里留”说明足三里可以调理胃肠及消化功能;可以纠正血脂代谢异常。现代研究表明足三里穴能够提升HDL-C水平[8]。丰隆穴为胃经的络穴,可以治疗脾胃二经疾患,在《针灸集成》中指出:“针灸法渚痰饮病取丰隆”。因此丰隆穴具有通调脾胃,健脾化痰的作用。且是目前临床及实验研究治疗HLP使用频次最高的穴位[9]。HLP治疗当以化痰,祛瘀为主[10],因此本实验选取足三里和丰隆穴进行刺血的治疗。

目前已有大量研究证实,TC的升高与冠心病(CHD)及动脉粥样硬化(AS)的发生具有很强的相关性[11]。TC在血液中的含量每增加1%,CHD的危险就会增加2%～3%[12]。TG升高可使LDL-C的升高和HDL-C的降低,而导致AS的发生,同时还有不少研究表明,HDL-C升高与CHD发生率呈负相关,而LDL-C升高则与CHD的发生率呈正相关[13]。因此降低TC、TG、LDL-C含量,升高HDL-C是治疗HLP的关键,也是防止AS及心脑血管疾病发生的有效途径。

本实验结果显示,刺络泻血疗法可有效降低HLP大鼠血清中TC、TG、LDL-C含量及升高HDL-C含量。运用足三里穴的调理胃肠消化功能及丰隆穴的通调脾胃，健脾化痰的作用,于此二穴刺血,充分发挥了经络的调节作用。通过疏通经络,调节机体脏腑功能,进一步促进体内脂质代谢,下调血清中TC、TG、LDL-C含量,上调HDL-C含量;同时刺络泻血疗法能够发挥“祛瘀生新”的功用,将体内代谢异常的脂质随泻出的血液自然排出体外,并抑制体内脂质过分合成,以此来降低血液黏稠度,起到对血液成分良性调节的作用,从而纠正血液中脂质代谢的紊乱。且刺血组与辛伐他丁药物治疗组比较无明显差异,更好的说明刺络泻血疗法治疗HLP的有效性及实用性。

NO、ET-1是一种活性物质,由血管内皮分泌释放。能够调节小血管的舒张和收缩、抑制血小板聚集、炎性反应细胞浸润及炎性反应因子的过度表达[14]。NO为血管舒张因子,ET-1为缩血管物质,它们相互拮抗但又共同保持血管功能。HLP会抑制内皮型一氧化氮合成酶(eNOs)的表达并使之失活,NO合成与释放减少,同时ET-1的含量会明显增加,导致血管内皮细胞功能受损[15-17]。

本实验结果显示,刺络泻血疗法能够提高一氧化氮合酶的活性,促进NO的合成与释放,并将高脂状态下血管内皮中异常增多的ET-1随泻出的血也排出,从而有效调节血管的舒张和收缩,维持血管张力,抑制血小板的聚集,减轻和延缓血管内皮细胞受损,降低由HLP所引发的AS及心脑血管疾病的发生率。尤其刺血观察组与辛伐他丁观察组并无差异,说明刺络泻血疗法在保护血管内皮细胞方面与辛伐他丁效果相当。

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(2016-11-07收稿 责任编辑：王明)

Effect of Blood-letting Puncture on Blood Lipid, NO and ET-1 in Rats with Hyperlipidemia

Zhan Huimin, Zhao Huiling, Tan Li, Chen Zichen, Zhang Bo, Zeng Rui, Wei Danlei

(SchoolofAcupuncture-MoxibustionandTuinaofBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective:To observe the effect of blood-letting puncture therapy on NO, ET-1 and blood lipid in rats with hyperlipidemia, and explore its therapeutic effect and mechanism in treating hyperlipidemia. Methods:A total of 32 male SD rats were randomly divided into 4 groups, which are control group, model group, blood pricking group and medical group. Except for the control group, the other three groups were made into hyperlipidemia models by high fat diet. After modeling, rats in control group

no treatment. The model group was fixed to receive blood-letting puncture therapy on the superficial vein of the rats hind leg, 0.3-0.5 mL each time, 2 times a week.To observe the levels of TC, TG, HDL-C, LDL-C, NO and ET-1. Results:Comparing to the control group, the level of TC, TG, LDL-C, ET-1 of the model groups significantly increased, and the level of NO content in the model groups significantly decreased with significant difference (P<0.01). Comparing to the control groups, the levels of TC, TG, LDL-C, ET-1 content in the other groups decrease, and the levels of NO content in the blood-letting group and medicine group increased, and the difference is significant (P<0.05，P<0.01). The content of HDL-C in each group do not have significant difference (P>0.05), however, compared to control group, the model group shows a tendency of decrease, while blood-letting group and medicine group has a tendency of increase. Conclusion:Blood-letting puncture therapy can correct lipid metabolism abnormalities. Besides, by inhibiting the increase of ET-1 content and maintain vascular endothelial cell balance, it can reduce and delay endothelial cell injury.

Blood pricking therapy; Hyperlipidemia; NO; ET-1; Rats

战慧敏(1990.07—),女,硕士,北京中医药大学,研究方向:刺血疗法作用机制的实验与临床研究,E-mail:zhanzhanhm2008@163.com

赵慧玲(1957.07—),女,硕士,主任医师,教授,北京中医药大学,研究方向:刺血疗法作用机制的实验与临床研究,E-mail:zhaohuiling3895@sohu.com

R245.31

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.05.037