胃痛平胶囊中白屈菜红碱含量的测定方法

段树卿+刘微+尹占芳

[摘要]目的 建立胃痛平胶囊中白屈菜红碱的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定胃痛平胶囊中白屈菜红碱的含量，色谱柱为Agilent XDB-C18（4.6 mm×150 mm，2.5 μm），流动相为乙腈-1%三乙胺溶液（磷酸调节pH值至3.0）（26∶74），检测波长为269 nm，柱温为25℃，流速为1.0 ml/min，进样体积为10 μl。结果 白屈菜红碱的线性范围：2.62～43.67 μg/ml（r=0.9999），平均加样回收率为98.88%，RSD为1.91%（n=9）。結论 所建立的方法准确、灵敏、简便，稳定性和重现性良好，专属性强，可较好地控制胃痛平胶囊的质量。

[关键词]胃痛平胶囊；白屈菜红碱；高效液相色谱法

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）12（c）-0129-04

Determination method of content of chelerythrine in Weitongping Capsules

DUAN Shu-qing1，2 LIU Wei1 YIN Zhan-fang1

1.Jingfukang Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Chengde 067000，China；2.New Excipients of Traditional Chinese Medicine Engineering Research Center of Hebei Province，Chengde 067000，China

[Abstract]Objective To establish a method for the determination of chelerythrine in Weitongping Capsules.Methods The content of chelerythrine in Weitongping Capsules was determined by high performance liquid chromatography （HPLC）.The chromatographic column was Agilent XDB-C18 （4.6 mm×150 mm，2.5 μm）.The mobile phase was acetonitrile-1% triethylamine solution （26∶74；pH value re-adjusted to 3.0）.The detection wavelength was 269 nm，the column temperature was 25℃，the flow rate was 1.0 ml/min，and the injection volume was 10 μl.Results Linear range of chelerythrine was 2.62-43.67 μg/ml （r=0.9999）.The average recovery was 98.88% and RSD was 1.91% （n=9）.Conclusion The established method is accurate，sensitive and simple，in good stability and reproducibility，and specificity，which can control the quality of Weitongping Capsule in a better way.

[Key words]Weitongping Capsules；Chelerythrine；High performance liquid chromatography

胃痛平胶囊是由白屈菜经适宜加工制成的胶囊剂，收载于原卫生部药品标准中药成方制剂第二十册，具有缓急止痛的功效，用于慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡及肠胃痉挛引起的疼痛等。

白屈菜为罂粟科白屈菜属植物，含有白屈菜碱、白屈菜红碱、血根碱等生物碱类成分，其中白屈菜红碱的含量较高，并且是一种生理活性物质，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抑制蛋白激酶C、抗微管聚合抑制细胞有丝分裂等作用[2]。

胃痛平胶囊现行标准除胶囊剂的常规检验外，只有一项薄层鉴别项。目前，未查到国内外文献对胃痛平胶囊中白屈菜红碱的含量测定的相关报道，为此，笔者参考相关文献[3-15]，采用高效液相色谱法（HPLC）测定胃痛宁胶囊中白屈菜红碱的含量，为胃痛平胶囊的质量控制提供参考。

1仪器与材料

Agilent 1260高效液相色谱仪，VWD检测器（美国Agilent公司）；KQ-500DE医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AE 240 十万分之一电子分析天平（瑞士梅特勒）。

白屈菜红碱对照品（批号111718-201402），购于中国食品药品检定研究院；乙腈（美国Fisher）为色谱纯；甲醇（天津佳兴化工玻璃仪器工贸有限公司）为分析纯，水（三级反渗法制得纯化水）。胃痛平胶囊、阴性样品及阴性样品制备所用原料均由颈复康药业集团有限公司提供。

2方法与结果

2.1色谱条件

采用Agilent XDB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，2.5 μm）；以乙腈-1%三乙胺溶液（磷酸调节pH值至3.0）（26∶74）为流动相；检测波长为269 nm；柱温：25℃；流速：1.0 ml/min；进样体积：10 μl。

2.2溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取白屈菜红碱对照品适量，加甲醇制成含白屈菜红碱8 μg/ml对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备 取胃痛平胶囊内容物，研细，取约0.8 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加盐酸-甲醇（0.5∶100）混合溶液25 ml，称定重量，水浴加热回流90 min，放冷；再称定重量，用盐酸-甲醇（0.5∶100）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15 ml，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解；转移至10 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性样品溶液的制备 按处方中的药味配制不含白屈菜的阴性样品，依“2.3”项下方法制备阴性对照液。

2.3专属性试验

按“2.1”项下色谱条件，将对照品溶液、供试品溶液及各阴性对照液分別注入液相色谱仪测定，结果显示，在该色谱条件下，阴性无干扰（图1）。

2.4 定量限的确定

取标准曲线工作液中最低浓度的对照品溶液稀释，按“2.1”项下的色谱条件进行检测，进样量为10 μl，然后不断按倍数稀释，测出白屈菜红碱浓度为0.5240 μg/ml的溶液信噪比为10∶1，确定定量限为5.2400 ng。

2.5 检测限的确定

取标准曲线工作液中最低浓度的对照品溶液稀释，按“2.1”项下的色谱条件进行检测，进样量为10 μl，然后不断按倍数稀释，测出白屈菜红碱浓度为0.1747 mg/ml的溶液信噪比为3∶1，确定检测限为1.747 ng。

2.6线性关系考察

精密称取白屈菜红碱对照品适量，加甲醇分别制成含白屈菜红碱43.670、21.840、8.734、4.367、2.620 μg/ml，按照“2.1”项下色谱条件进行HPLC分析。以白屈菜红碱的峰面积（Y）对白屈菜红碱的浓度（X）绘制标准曲线，得回归方程Y= 7683X-15.669 ，r=0.9999（n=5）。结果表明，白屈菜红碱在2.62～43.67 μg/ml范围内线性关系良好。

2.7精密度试验

取白屈菜红碱（浓度为8.732 μg/ml）对照品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件，各重复进样6次，记录每次的色谱峰面积，计算RSD值，结果显示白屈菜红碱RSD为0.28%，表明仪器精密度良好。

2.8重复性试验

精密称取同一批已知浓度胃痛平胶囊内容物9份，1～3份每份0.4 g，4～6份每份0.8 g，7～9份每份1.2 g，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，记录白屈菜红碱峰面积，计算含量。结果见表1，白屈菜红碱的平均含量为111.416 μg/g，RSD为1.30%（n=9）。表明该样品处理方法重现性好。

2.9稳定性试验

取按照“2.3”项下方法制备的供试品溶液，分别在制备后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 h进样10 μl，记录色谱峰面积，结果显示白屈菜红碱色谱峰面积RSD为0.19%。表明供试品溶液在10 h内稳定性良好。

2.10加样回收率试验

精密量取已测定白屈菜红碱含量的样品（含量为123.47 μg/g）9份，精密称定0.4 g，分别加入一定量对照品，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，以供试品溶液中绝对质量分数计算加样回收率，结果白屈菜红碱平均回收率为98.88%，RSD为1.91%（表2） 。

2.11 样品含量测定

按“2.1”项下色谱条件测定颈复康药业集团有限公司胃痛平胶囊（批号491133，491134，520331，520032， 620225，620226，620091，620092）中白屈菜红碱的含量（表3） 。

3讨论

3.1待测成分的选择

目前，国内外文献有对胃痛平胶囊的研究报道[6]，但对胃痛平胶囊中有关白屈菜红碱含量测定的报道较少。本实验对胃痛平胶囊中白屈菜的主要成分白屈菜红碱进行分析，建立其含量测定方法。

3.2检测波长的选择及色谱柱、仪器的耐用性

以二级阵列检测器对白屈菜红碱进行全波长扫描，在269 nm处均有比较大吸收，故选用269 nm作为检测波长；选用了两种色谱柱（Agilent XDB- C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，2.5 μm），YMC-Pack ODS-A色谱柱（4.6 mm×250 mm，2.5 μm），分离效果均较好，且分离时间适中；考察了Agilent 1100和Agilent 1260两种型号的高效液相色谱仪对胃痛平胶囊进行测定，均可用于样品测定。

3.3提取溶剂及提取时间的选择

选用了2种提取方法（水浴加热回流，直接超声），均对被测成分无干扰且可较好地分离，水浴加热回流含量较高，选择水浴加热回流的方法；考察了不同溶剂（甲醇、70%甲醇、50%甲醇、不同比例盐酸-甲醇），结果用盐酸-甲醇（0.5∶100）作为提取溶剂，所提白屈菜红碱含量较好，最终确定选用盐酸-甲醇（0.5∶100）作为提取溶剂；考察了回流时间45、60、90、120 min，结果显示回流90 min 即可提取完全。

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