孔雀致病性大肠杆菌的分离鉴定

许宇霞 王志永

摘要： 某野生动物园，孔雀出现食欲减退、肿脸、流泪、严重腹泻、消瘦死亡，有个别的孔雀出现急性死亡。为确定引起孔雀症状及死亡的病原菌，剖检死亡的孔雀，无菌采集病死孔雀肝脏、心血、肾脏等病料组织进行病原菌的分离鉴定，分离到1株病原菌。通过细菌培养特性、形态学观察、生化特性试验、动物致病性试验等鉴定方法，分离的病原菌为致病性大肠杆菌。药敏试验结果表明： 头孢曲松、恩诺沙星、氟苯尼考、多西环素、左氧氟沙星5种药物敏感；对大观霉素中敏；对阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素3种药物耐药。

关键词： 孔雀；致病性大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验

中图分类号：S858.9 文献标识码：B 文章编号：2096-3637（2017）07-0013-02

孔雀是我国养殖的主要的珍禽，分布在我国的许多地区，具有、观赏、食用、保健等价值。随着孔雀的养殖量的增加，发病率和死亡率逐渐增高，尤其是致病性大肠杆菌病引起孔雀的腹泻、死亡报道越来越多[1-2]。致病性大肠杆菌常引起禽类败血症、气囊炎、肝周炎、心包炎、肉芽肿、关节炎、眼炎等多种病理变化，禽类感染致病性大肠杆菌具有较高的发病率和死亡率。大肠杆菌易产生耐药性，当发生该病时应进行药敏试验，科学用药[3-4]。

2017年6月中旬，某野生动物园，孔雀出现食欲减退、肿脸、流泪、严重腹泻、消瘦死亡，有个别的孔雀出现急性死亡，为确定引起孔雀症状及死亡的病原菌。采肝脏等病料组织，分离到了1株病原菌，被鉴定为致病性大肠杆菌，通过药敏试验，分析其耐药性，科学指导用药，本研究为孔雀致病性大肠杆菌的防治提供了基础。

1 材料与方法

1.1病料来源

某野生动物园突然死亡的孔雀，无菌采集病死孔雀肝脏、心血等病料组织。

1.2主要试剂与仪器

麦康凯培养基、伊红美蓝培养基、血琼脂培养（广东环凯微生物科技有限公司）；药敏纸片、生化鉴定试剂管及（杭州天和微生物试剂有限公司）；恒温培养箱、显微镜、超净工作台等常规设备由本研究室提供。

1.3 实验动物

健康雏鸡10只，购自某养殖场。

1.4 细菌分离培养

将无菌采集肝脏、心血等病料接种于血琼脂平板，置于37℃培养箱12～18h，挑取血琼脂平板上优势单个菌落，接种于麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂培养基进行鉴别与纯化培养，取纯化的细菌进行革兰氏染色，显微镜观察形态。

1.5 细菌生化特性鉴定

按照说明书将纯化的细菌，加到生化试剂鉴定管内，进行培养与鉴定。

1.6 细菌致病性试验

将10只雏鸡分成2组，每组5只，第1组腹腔注射致病性大肠杆菌0.5mL（108CFU/mL），第2组为空白对照组腹腔注射等量的无菌的生理盐水，观察7d，记录每组的发病和死亡数据并进行鉴定病原菌。

1.7 药敏试验

采用K-B药敏纸片法进行药敏试验，参照CLSI的标准判断耐药（R）、敏感（S）或中介（I）进行结果判断药敏试验结果。将菌液均匀的涂布麦康凯琼脂培养基表，并无菌粘贴药敏纸片，置37℃恒温箱培养12～18h。测量每种药物的抑菌圈直径。

2 结果

2.1病理剖检变化

病死孔雀剖检可见，肝脏肿大、质脆，表面纤维素性渗出物，肝周炎； 心包积液、心包炎；脾脏出血肿大，肠道有不同程度出血点、粘膜脱落；盲肠扁桃体出血、肿胀；肠系膜淋巴结肿大，小肠有出血性肠炎变化。

2.2 细菌分离鉴定结果

从病死的孔雀的肝脏、心血组织中分离病原菌，在血液琼脂平板生长良好，形成灰白色、边缘光滑、湿润半透明的菌落；在麦康凯琼脂平板上长出中等大小，圆形微凸起、表面光滑湿润红色菌落；在伊红美蓝琼脂长出大小一致、圆形凸起、表面紫黑色携带金属光泽的菌落。

2.3 细菌形态学观察结果

显微镜下观察，分离菌可见多数散在排列、两端钝圆，革兰氏阴性短杆菌。

2.4 生化特性鉴定结果

分离菌株生化特性，吲哚试验阳性，V-P试验呈阴性；由表1可知，分离菌株符合大肠杆菌的生化特性。与伯杰氏细菌手册报道的一致。

2.5 动物致病性试验结果

试验组雏鸡在攻毒后48h，出现死亡，到攻毒后的72h出现全部死亡，对死亡的雏鸡剖检后，从肝脏中分离到了大肠杆菌；对照组的雏鸡未明显的变化，因此，证实了分离菌株具有致病性。

2.6 药敏试验

由表2可知，头孢曲松、恩诺沙星、氟苯尼考、多西环素、左氧氟沙星5种药物敏感；对大观霉素中敏；对阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素3种药物耐药。

3 讨论

本实验通过从发病孔雀的体内分离1株病原菌，通过多种方法鉴定，被鉴定为致病性大肠杆菌病。大肠杆菌病是一种条件性疾病、常发病，该菌其血清型多，不同血清型以及不同地区的大肠杆菌对药物敏感性也存在差异性，受地区性限制，因此难以控制[5]。大肠杆菌易产生耐药性，通过分析其耐药性，选择敏感药物。本实验药敏结果显示，分离菌株對头孢曲松、恩诺沙星、氟苯尼考、多西环素、左氧氟沙星5种药物敏感；对大观霉素中敏；对阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素3种药物耐药。在治疗大肠杆菌病时，应该选择敏感的药物进行治疗，提高治疗效果，同时注意环境卫生消毒和平时的饲养管理，减少应激，减少该病的发生。

参考文献

[1]崔焕忠，周佰祥，张辉，等.孔雀致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验[J].中国兽医杂志，2011，47（10）：33-34.

[2]刘华，祁克宗，朱良强，等.一株孔雀源大肠杆菌分离鉴定与致病特性初步研究[J].安徽农学通报，2010，16（19）：27-29.

[3]陸承平.兽医微生物学[M].第五版，北京：中国农业出版社，2015.

[4]苗银萍，蒋大伟，许兰菊，等.鸡腹泻病原菌的分离鉴定及药敏试验研究[J].河南农业学，2011，41（4），148-153.

[5]张召兴，李蕴玉，吴同垒，等.邢台地区致鸡卵黄腹膜炎大肠杆菌血清型鉴定、毒力基因检测及耐性分析[J].中国预防兽医学报，2017，39（3）：191-195.