羽叶丁香茎皮中1个新木脂素成分

白睿峰　苏国柱　冯晓　张瑞飞　尹旭　叶云云　陈苏依勒　屠鹏飞　柴兴云

[摘要] 通过色谱方法从羽叶丁香的茎皮中分到11个化学成分，经质谱、核磁共振谱及与文献数据相比鉴定其结构。其中化合物1为新木脂素，命名为反式羽叶丁香素A （Zpinnatifolin A），10個已知物分别鉴定为pinnatifolin A （2）， 乙基松柏苷ethylconiferin（3），甲基松柏苷（4），丁香素（5），β， 3， 4trihydroxyphenethyl alcohol（6）， （S）（+）2（3， 4dihydroxyphenyl）2ethoxyleth anol（7）， 3， 4dihydroxyβmethoxyphenethyl alcohol（8）， 3， 4， 5三羟基苯乙醇（9）， 红景天苷（10）， 羟基酪醇（11）， 其中3，4，8～11为丁香属内首次报道，5～7为该种首次报道。化合物1对神经小胶质细胞BV2的NO生成显示一定的抑制活性。该研究为表征山沉香抗心肌缺血的药效物质提供了一定的参考。

[关键词] 羽叶丁香； 蒙药； 反式羽叶丁香素A

A new lignan from stem bark of Syringa pinnatifolia

BAI Ruifeng1， SU Guozhu1， FENG Xiao1， ZHANG Ruifei1， YIN Xu1，

YE Yunyun1，2， CHEN Suyile3， TU Pengfei1， CHAI Xingyun1*

（1. Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine， School of Chinese Materia Medica，

Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China；

2. Pharmacy College， Ningxia Medical University， Yinchuan 750004， China；

3. Alashan League Mongolian Medicine Hospital， Alashan League 750300， China）

[Abstract] One new lignan， named Zpinnatifolin A， along with ten known analogues， were isolated from the stem bark of Syringa pinnatifolia by various chromatographic methods. Their structures were extensively determined on basis of MS and NMR spectroscopic data analyses， and comparison with those in literature. Among them， compounds 3，4， and 811 were isolated from this genus for the first time， and 57 were isolated from the specie for the first time. Compound 1 showed a moderate inhibition on NO production in BV2 cells. The present study provides a preliminary data for clarification of bioactive ingredients of S.pinnatifolia with antimyocardial ischemic effect.

[Key words] Syringa pinnatifolia； Mongolian folk medicine； Zpinnatifolin A

羽叶丁香Syringa pinnatifolia Hemsl.是我国丁香属特有品种，有限集中分布于内蒙古和宁夏交界的贺兰山地区。羽叶丁香去皮的根、根茎及粗枝，是一种特色蒙药材——山沉香，具有抑赫依、清热、止痛等功效，蒙医用其治疗胸闷气短、心肌缺血等心肺疾病，疗效显著 [12]。

此前本课题组报道了山沉香乙醇提取物的抗心肌缺血作用[3]及茎皮中的木脂素类和环烯醚萜类成分[47]。作为系统研究的一部分，本文进一步报道从茎皮中分离得到的11个化学成分，其中1个新木脂素类命名为反式羽叶丁香素A （Zpinnatifolin A），10个已知物分别鉴定为pinnatifolin A（2），乙基松柏苷ethylconiferin（3），甲基松柏苷（4），丁香素（5），β，3，4trihydroxyphenethyl alcohol（6），（S）（+）2（3，4dihydroxyphenyl）2ethoxylethanol（7），3，4dihydroxyβmethoxyphen ethyl alcohol （8），3，4，5三羟基苯乙醇（9），红景天苷（10），羟基酪醇（11）。化合物3，4，8～11为丁香属内首次报道，5～7为本种内首次报道。本研究为阐明山沉香抗心肌缺血的药效物质提供了一定的参考。

1 材料

1.1 药材 羽叶丁香于2013年7月采自内蒙古阿拉善贺兰山地区，经阿拉善盟蒙医医院陈苏依勒鉴定为S. pinnatifolia，异名贺兰山丁香S.pinnatifolia var. alashanensis Y.C. Ma & S.Q. Zhou[2]，剥取茎木部分的皮层，阴凉处干燥，药材标本存放于北京中医药大学中药现代研究中心（SP201307B）。

1.2 细胞 BV2小胶质细胞系由中国医学科学院细胞中心提供。

1.3 仪器和试剂 Varian Inova500型核磁共振仪；日本岛津高效液相离子阱飞行时间质谱仪；美国鲁道夫Autopol IV旋光儀；Sephadex LH20（瑞典Amershan Biosciences）；Waters 2535制备液相（美国Waters）；半制备色谱柱Shimpack PREPODS （H） C18 （20 mm×250 mm，5 μm）。ODS（40～63 μm，德国Merck）；柱色谱用硅胶（200～300目）及薄层色谱用GF254硅胶预制板，均为青岛海洋化工厂生产；提取和分离中所用化学试剂均为分析纯（北京化工厂）；SANYO MCO18AIC细胞培养箱；Motic AE2000倒置荧光显微镜；ESCO OptiMair超净工作台；瑞士TECAN M1000型多功能酶标仪；DMEM培养基（Hyclone，美国）；胎牛血清（Gibco，美国）；NO化学法试剂盒（南京建成生物公司）；阳性对照为槲皮素和姜黄素（Sigma，美国）。

2 提取与分离

羽叶丁香茎皮（1.3 kg），依次用95%，80%的乙醇回流提取2次，每次2.5 L，提取1.5 h。提取液减压浓缩得浸膏325 g。采用正相硅胶柱色谱，依次用氯仿甲醇（20∶1～0∶1）洗脱得到9个流分（A～I）。流分C（31.2 g）经正相硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷乙酸乙酯（3∶1～0∶1），甲醇洗脱得到10个流分（C1～C10）。C3 （330 mg）经Sephadex LH20 （二氯甲烷甲醇，1∶1）洗脱得3个流分（C3a～C3c）。流分C3c （80 mg）经制备薄层色谱得到化合物7 （20.5 mg）。C4 （980 mg）采用Sephadex LH20 （二氯甲烷甲醇，1∶1） 洗脱得到3个流分（C4a～C4c）。C4b （72 mg） 经制备HPLC （甲醇水，50∶50，7.0 mL·min-1） 纯化得到化合物11（tR=9.8 min，4.2 mg），其余部分经制备HPLC（甲醇水，40∶60，7.0 mL·min-1）纯化得到化合物2（tR=29.5 min，9.4 mg）和1（tR=43.2 min，8.0 mg）。

流分E（10.6 g）和F （8.2 g）合并，经正相硅胶柱色谱，依次用乙酸乙酯甲醇（10∶1～0∶1），洗脱得到8个流分（EF1～EF8）和结晶化合物5 （2.5 g）。EF1 （1.2 g）采用ODS柱色谱，依次用甲醇水（1∶2～1∶0）洗脱得到8个流分（EF11～EF18）和结晶10 （30.5 mg）。EF15 （310 mg） 经制备HPLC （乙腈水，18∶82，7.0 mL·min-1）纯化得到化合物4（tR=26.0 min，7.5 mg）。EF18 （162 mg）经制备HPLC （乙腈水，20∶80，7.0 mL·min-1）纯化得到化合物3（tR=35.0 min，7.5 mg）。EF7 （1.6 g）经Sephadex LH20 （甲醇）洗脱得到7个流分（EF7a～7f），其中EF7ce合并为EFX（1.1 g），经正相硅胶柱色谱，依次用乙酸乙酯甲醇（20∶1～0∶1），洗脱得到9个流分（EFX1～X9）。EFX8 （120 mg）经制备HPLC （甲醇水 20∶80，7.0 mL·min-1）纯化得到化合物6（tR=9.8 min，10.5 mg），9（tR=18.7 min，6.3 mg）和8（tR=21.8 min，3.5 mg）。

2 结构鉴定

化合物1 白色粉末；HRESIMS给出准分子离子峰359.151 3 [M-H]-，（计算值C20H23O6，359.150 0）； [α]25D-34.0° （c 0.1，MeOH）； UV （MeOH）λmax （logε） 264 （3.74），208 （4.14） nm； IR （KBr） vmax 3 432，2 922，1 637，1 515，1 273，1 032 cm-1，显示有羟基和苯环等吸收峰。ECD （MeOH） λmax （Δε） 219 （+1.26），227 （-0.66），251 （-0.52），261 （+0.82），281 （-0.82），290 （-0.73）。1H和13CNMR 见表1，数据显示2组ABX偶合系统[δH 6.84 （1H，d，J=1.5 Hz，H2），6.70 （2H，overlapped，H5，H5′），6.68 （1H，overlapped，H6）]，[δH 6.77 （1H，d，J=1.5 Hz，H2′），6.70 （H5′），6.64 （1H，dd，J=1.5，8.0 Hz，H6′）]，1个烯氢单峰δH 6.32 （H7），2个连氧亚甲基δH 4.01，4.21/δC 60.6 （C9）和δH 3.66，3.72/δC 65.8 （C9′），1个亚甲基（C7′）和1个次甲基（C8′）。以上信息并结合HMBC分析可知，1与已知的pinnatifolin A相似，不同之处在H8′ （δH 2.76/3.37）和C8′ （δC 51.3/45.2）[8]数据，见图1。

NOESY数据显示1的H7与H7′及H8′有关，说明1的Δ7，8双键为Z构型。通过计算ECD发现，化合物1构象多且计算过程复杂，有待后续更多证据确定其绝对构型，鉴定为Z4，4，9，9四羟基7烯木脂素，为1个新结构，命名为反式羽叶丁香素A （Zpinnatifolin A）。

化合物1 1HNMR （CD3OD， 500 MHz）： δ：6.84（1H， d，J=1.5 Hz， H2）， 6.70 （2H， overlapped， H5， 5′）， 6.68（1H， overlapped，H6）， 6.32 （1H， s， H7）， 4.21 （1H， d，J=11.5 Hz， H9a）， 4.01 （1H， d，J=11.5 Hz， H9b）， 6.77 （1H， d，J=1.5 Hz， H2′）， 6.64 （1H， dd，J=1.5， 8.0 Hz， H6′）， 2.70 （1H， m， H7′a）， 2.86 （1H， m， H7′b）， 2.76 （1H， m， H8′）， 3.72 （1H， m， H9′a）， 3.66 （1H， m， H9′b）， 3.78 （3H， s， OMe3）， 3.82 （3H， s， OMe3′）。13CNMR见表1。

化合物2 白色粉末；[α]25D-14.5° （c 0.01 MeOH）； ESIMS m/z 359[M-H]-； 1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ： 6.46 （2H，overlapped，H2，6），6.70 （2H，d，J=8.0 Hz，H5，5′），2.75 （1H，dd，J=6.0，14.0 Hz，H7a），2.59 （1H，dd，J=6.0，14.0 Hz，H7b），3.37 （1H，m，H8），3.71 （1H，m，H9a），3.65 （1H，m，H9b），6.55 （3H，overlapped，H2′，6′，7′），4.11 （1H，d，J=13.0 Hz，H9′a），4.28 （1H，d，J=13.0 Hz，H9′b），3.74 （3H，s，OMe3），3.62 （3H，s，OMe3′）。13CNMR数据，见表1；NOESY相关数据显示H7与H7′及H8′无法观察到，说明化合物2为E构型，以上NMR数据与文献[8]对照，鉴定为pinnatifolin A。

化合物3 白色粉末状；ESIMS m/z 371[M-H]-； 1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：7.07 （1H，d，J=2.0 Hz，H2），7.10 （1H，d，J=8.5 Hz，H5），6.94 （1H，dd，J=2.0，8.5 Hz，H6），6.71 （1H，d，J=16.0 Hz，H7），6.23 （1H，dt，J=4.5，16.0 Hz，H8），4.11 （2H，dd，J=1.0，6.0 Hz，H9），3.86 （3H，s，3OMe），3.60 （2H，m，H1″），1.21 （3H，br t，J=7.0 Hz，H2″），4.89 （1H，J=7.0 Hz，H1′），3.20～3.80 （6H，overlapped，H2′～6′）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：133.2 （C1），111.4 （C2），150.9 （C3），147.7 （C4），117.9 （C5），120.8 （C6），133.4 （C7），126.0 （C8），72.3 （C9），56.7 （3OMe），66.6 （C1″），15.9 （C2″），102.7 （C1′），74.9 （C2′），77.9 （C3′），71.3 （C4′），78.2 （C5′），62.5 （C6′）。以上數据与文献[9]对照，鉴定为乙基松柏苷（ethylconiferin）。

化合物4 白色粉末状；ESIMS m/z 379[M+Na]+； 1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：6.74 （1H，d，J=1.5 Hz，H2），7.11 （1H，d，J=8.0 Hz，H5），6.95 （1H，dd，J=1.5，8.0 Hz，H6），6.58 （1H，d，J=16.0 Hz，H7），6.23 （1H，dt，J=4.5，16.0 Hz，H8），4.07 （2H，dd，J=1.0，6.0 Hz，H9），3.88 （3H，s，3OMe），3.87 （3H，9OMe），4.89 （1H，J=7.0 Hz，H1′），3.20～3.80 （6H，overlapped，H2′～6′）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：133.3 （C1），111.4 （C2），150.9 （C3），147.8 （C4），117.9 （C5），120.9 （C6），133.6 （C7），125.6 （C8），74.2 （C9），56.7 （3OMe），58.1 （9OMe），102.7 （C1′），74.9 （C2′），77.9 （C3′），71.3 （C4′），78.2 （C5′），62.5 （C6′）。以上数据与文献[10]对照，鉴定为甲基松柏苷（methylconiferin）。

化合物5 白色粉末状；ESIMS m/z 371[M-H]-；1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：6.74 （2H，s，H2，6），6，53 （1H，d，J=16.0 Hz，H7），6.32 （1H，dt，J=4.5，16.0 Hz，H8），4.21 （2H，d，J=5.5 Hz，H9），3.85 （6H，s，OMe×2），4.85 （1H，overlapped，H1′），3.20～3.80 （6H，overlapped，H2′～6′）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：135.3 （C1），105.4 （C2，6），135.9（C4），154.3 （C3，5），130.0 （C7），131.2 （C8），63.6 （C9），57.0 （OMe×2），105.3 （C1′），75.7 （C2′），77.8 （C3′），71.3 （C4′），78.3 （C5′），62.6 （C6′）。以上数据与文献[11]对照，鉴定为紫丁香素（syringin）。

化合物6 褐色粉末状；ESIMS m/z 169[M-H]-； 1HNMR （CD3OD，500 MHz）δ：6.80 （1H，br s，H2），6.71 （1H，d，J=8.0 Hz，H5），6.66 （1H，dd，J=1.5，8.0 Hz，H6），3.55 （2H，d，J=6.0 Hz，Hα），4.51 （1H，br t，J=7.0 Hz，Hβ）。13CNMR （CD3OD，125 MHz）δ：134.8 （C1），114.6 （C2），146.2 （C3），145.8 （C4），116.1 （C5），118.9 （C6），68.8 （Cα），75.8 （Cβ）。以上数据与文献[12]报道一致，鉴定为β，3，4 trihydroxyphenethyl alcohol。

化合物7 白色粉末状；ESIMS m/z 197[M-H]-； 1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：6.74 （2H，overlapped，H2，6），6.61 （1H，d，J=8.0 Hz，H5），3.58 （1H，m，Hαa），3.46 （1H，overlapped，Hαb），4.20 （1H，d，J=5.0 Hz，Hβ），3.37 （2H，overlapped，H1′），1.15 （3H，br t，J=6.5 Hz，H2′）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：132.3 （C1），114.9 （C2），146.3 （C3），146.0 （C4），116.2 （C5），119.6 （C6），67.9 （Cα），84.1 （Cβ），65.1 （C1′），15.5 （C2′）。以上数据与文献[13]对照，鉴定为（S）（+）2（3，4dihydroxyphenyl）2ethoxylethanol。

化合物8 白色膠状物；ESIMS m/z 183[M-H]-；1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：6.72 （2H，overlapped，H2，6），6.61 （1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H5），3.58 （1H，dd，J=3.5，13.5 Hz，Hαa），3.48 （1H，dd，J=3.5，13.5 Hz，Hαb），4.08 （1H，dd，J=4.0，8.5 Hz，Hβ），3.22 （3H，s，αOMe）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：131.6 （C1），114.9 （C2），146.5 （C3），146.2 （C4），116.2 （C5），119.8 （C6），67.9 （Cα），86.1 （Cβ），56.8 （αOMe）。以上数据与文献[14]对照，鉴定为3，4dihydroxyβmethoxyphenethyl alcohol。

化合物9 褐色粉末状；ESIMS m/z 169[M-H]-；1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：6.70 （1H，br s，H2），6.50 （1H，br s，H6），3.48 （2H，m，Hα），2.47 （2H，m，Hβ）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：134.1 （C1），117.4 （C2），145.3 （C3），129.1 （C4），144.1 （C5），118.5 （C6），64.0 （Cα），37.0 （Cβ）。以上数据通过分析，鉴定为3，4，5三羟基苯乙醇（3，4，5trihydroxyphenethyl alcohol）。

化合物10 白色晶体；ESIMS m/z 323[M+Na]+； 1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：6.70 （2H，d，J=8.5 Hz，H2，6），7.06 （2H，d，J=8.5 Hz，H3，5），4.04 （1H，dd，J=7.0，13.0 Hz，Hαa），3.69 （1H，overlapped，Hαb），2.83 （2H，m，Hβ），4.30 （1H，d，J=8.0 Hz，H1′），3.20～3.80 （6H，overlapped，H2′～6′）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：130.7 （C1），130.9 （C2，6），116.1 （C3，5），156.7 （C4），72.0 （Cα），36.3 （Cβ），104.3 （C1′），75.0 （C2′），77.8 （C3′），71.5 （C4′），78.0 （C5′），62.7 （C6′）。以上数据与文献[15]对照，鉴定为红景天苷（salidroside）。

化合物11 褐色粉末状；ESIMS m/z 153 [M-H]-； 1HNMR （CD3OD，500 MHz）δ：6.64 （1H，d，J=1.0 Hz，H2），6.67 （1H，d，J=8.0 Hz，H5），6.51 （1H，dd，J=1.0，8.0 Hz，H6），3.66 （2H，br t，J=7.0 Hz，Hα），2.65 （2H，br t，J=7.0 Hz，Hβ）。13CNMR （CD3OD，125 MHz）δ：131.8 （C1），116.3 （C2），146.1 （C3），144.6 （C4），117.1 （C5），121.2 （C6），64.6 （Cα），39.6 （Cβ）。以上数据与文献[16]对照，鉴定为羟基酪醇（hydroxytyrosol）。

4 体外抗炎活性

本研究采用此前报道的相同方法[16]筛选了化合物1和2对BV2细胞的体外抗炎活性。结果显示，二者对BV2细胞中NO生成有一定的抑制作用，IC50分别为46.4，50.7 μmol·L-1，阳性对照槲皮素的IC50为15.3 μmol·L-1。

5 结果与讨论

羽叶丁香去皮的根、根茎及粗枝即为特色蒙药山沉香，但茎皮并不入药。本课题组为首次对羽叶丁香茎皮进行化学成分研究，一方面能为羽叶丁香的植物学分类提供化学证据，而羽叶丁香所在属以下的层级分类一直存在很大的争议[1]，同时茎皮成分研究也有助于后续利用HPLCMS等手段化学表征山沉香药效部位，因为山沉香和茎皮的成分有一定相似性，主要区别在倍半萜和环烯醚萜类成分[2，7]，前者主要来自于去皮茎木，而后者多在皮中，其他如本文所报道的木脂素、苯丙素和苯乙醇等在本植物2个部位中皆有。多酚类具有潜在的抗氧化和神经细胞保护作用[2]，与山沉香抗心肌缺血作用有一定的关联，但类似单体化合物的体外活性和总提取物的体内药效之间，还需要更多的证据使之相关联。

上述结构一个显著特点是部分化合物有甲氧基或乙氧基取代，尤其是乙氧基的存在，很容易与药材在乙醇提取时的人工产物相关。乙氧基人为引入或天然存在这两种情况此前都有过报道 [1819]，在没有明确的验证前，暂不排除化合物4，7，8为人工产物。

[参考文献]

[1] 苏国柱，陈洁，曹愿，等. 蒙药山沉香的化学成分和药理活性研究进展 [J]. 中国中药杂志，2015，40（20）： 4333.

[2] Su G， Cao Y， Li C， et al. The genus Syringa： a phytochemical and pharmacological progress[J]. Chem Cent J， 2015， 9： 2.

[3] Su G， Zhang R， Yang X， et al. Lignans from the stem barks of Syringa pinnatifolia[J]. Fitoterapia， 2016， 114： 63.

[4] Cao Y， Wang J， Su G， et al. Antimyocardial ischemia effect of Syringa pinnatifolia Hemsl.by inhibiting expression of cyclooxygenase1 and 2 in myocardial tissues of mice[J].J Ethnopharmacol， 2016， 187： 259.

[5] Su G， Bai R， Yu X， et al. Noralashinol A， a new norlignanfrom stem barks of Syringa pinnatifolia[J]. Nat Prod Res， 2016，30（19）：2149.

[6] Zhang R， Feng X， Su G， et al. Noralashinol B， a norlignan with cytotoxicity from stem barks of Syringa pinnatifolia[J]. J Asian Nat Prod Res， 2017，19：416.

[7] 陳苏依勒， 苏国柱， 白睿峰， 等. 羽叶丁香茎皮中的环烯醚萜类成分[J]. 中国中药杂志， 2016， 41 （7）： 1246.

[8] Shao L W， Wang C H， Li G Q， et al. A new lignan from the roots of Syringa pinnatifolia[J].Nat Prod Res， 2014， 28 （21）： 1894.

[9] Yue Z G， Qin H， Li Y H， et al. Chemical constituents of the root of Jasminum giraldii[J]. Molecules， 2013， 18： 4766.

[10] Huang P， Karagianis G， Waterman P G. Phenylpropanoid glycosides from Typhonium flagelliforme（Araceace） [J]. Nat Prod Res Dev， 2004， 16 （5）： 403.

[11] 赵东保， 张卫， 李明静， 等. 顶羽菊化学成分研究 [J]. 中国中药杂志， 2006， 31 （22）： 1869.

[12] Nishibe S， Okabe K， Tsukamoto H， et al. Studies on the Chinese crude drug "Forsythiae fructus" VI. The structure and antibacterial activity of suspensaside isolated from Forsythia suspense [J]. Chem Pharm Bull， 1982， 30 （12）： 4548.

[13] Xu Q M， Liu Y L， Li X R， et al. Two new phenylglycol derivatives isolated from Syringa reticulata var.mandshurica and their antifungal activities [J].Chem Pharm Bull， 2009， 57： 863.

[14] 晏永明， 吕青， 董小萍， 等. 彝族虫类药日本琵琶甲的化学成分研究 [J]. 天然产物研究与开发， 2012， 24： 1712.

[15] Nishimura H， Sasaki H， Morota T， et al. Six glycosides from Rehmannia glutinosa var. purpurea [J]. Phytochemistry， 1990， 29 （10）： 3303.

[16] Kontogianni V G， Charisiadis P， Margianni E， et al. Olive leaf extracts are a natural source of advanced glycation end product inhibitors [J]. J Med Food， 2013， 16 （9）： 817.

[17] 张水英， 郭强， 曹愿， 等. 豆豉姜的生物碱成分研究[J]. 中国中药杂志， 2014， 39： 3964.

[18] 曾孝杰， 王国才， 吴霞. 山沉香化学成分研究 [J].中草药， 2013 （7）： 1721.

[19] Yu X， Guo Q， Su G， et al. Usnic acid derivatives with cytotoxic and antifungal activities from the lichen Usnea longissima[J]. J Nat Prod， 2016， 79 （5）： 1373.

[责任编辑 丁广治]