CD173在急性白血病中的表达及临床意义

饶若，姚红霞，符生苗，林丽娥，王谷云，王述文，吴莉芳，黄莉(海南省人民医院血液病研究室，海南 海口 570133)

CD173在急性白血病中的表达及临床意义

饶若，姚红霞，符生苗，林丽娥，王谷云，王述文，吴莉芳，黄莉(海南省人民医院血液病研究室，海南 海口 570133)

目的 探讨CD173在急性白血病中表达及其临床意义。方法应用直接荧光标记法，经流式细胞术对我院血液内科2016年6～11月收治的42例急性白血病和15例对照组(非白血病患者)骨髓细胞进行CD173和CD34的检测。结果对照组患者的骨髓单个核细胞均未见CD173阳性表达，42例急性白血病患者中阳性率为4.8%，但差异无统计学意义（P>0.05）；CD173在对照组有核红细胞中的阳性率为53.3%，阳性细胞表达水平为（23.0±16.4）%，而急性白血病组有核红细胞的阳性率为50.0%，阳性细胞表达水平(21.3±13.0)%，差异均无统计学意义（P>0.05）；对照组患者的骨髓单个核细胞未见CD34阳性表达，急性白血病组患者阳性率为61.9%，差异有显著统计学意义（P<0.01）；26例CD34+急性白血病患者中2例表达CD173阳性，16例CD34-急性白血病患者中未见CD173阳性表达，差异无统计学意义（P>0.05）。结论CD173在急性白血病和非白血病中的表达无差异。

CD173；急性白血病；流式细胞术

糖链是继核酸、蛋白质后的重要的生命大分子链。大多数糖链位于细胞核分泌的大分子的外周表面，它们处在调控和介导多种细胞-细胞和细胞-基质相互作用的位置，参与细胞识别、分化、信号转导、免疫应答等重要活动[1]。已知的肿瘤干细胞标志物大多为蛋白分子，近来研究发现一些糖链分子也可作为肿瘤干细胞的特异性标志物[2-3]。细胞表面糖分子CD173(H2，Fucal-2Gal-β1-4GlcNAcβ1-)为末端岩藻化的糖分子。国外有文献报道CD173在恶性肿瘤中异常表达，还特意表达于CD34+的正常造血干细胞和CD34+的白血病细胞系。国内还未见相关研究报道。本研究旨在探讨CD173在急性白血病(AL)中表达及其临床意义，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 AL患者42例(急性白血病组)，年龄18～83岁，男性18例，女性24例。其中急性髓细胞白血病(AML)29例，急性淋巴细胞白血病(ALL)13例。对照组15例，为血小板减少、骨髓无明显异常的非白血病患者。均为本院血液内科2016年6～11月住院患者，所有患者的诊断标准均根据张之南主编的《血液病诊断及疗效标准》[4]进行。

1.2 试剂和仪器 鼠抗人CD173 AF488单克隆抗体(克隆号BRIC231，IgG1)及其同型对照均购自Novus公司，鼠抗人CD34(克隆号8G12，IgG1)及其同型对照购自BD公司，检测仪器为BD AriaⅡ流式细胞仪。

1.3 方法 治疗前采集患者经EDTA抗凝的骨髓1～2 mL，调整细胞浓度为1×106/mL。骨髓标记抗体后室温下避光反应15 min，溶血后用流式细胞术(FCM)检测。上机前均使用质控荧光微球校准仪器，用CD45/SSC设门，根据CD45表达程度和SSC颗粒度大小将细胞分为粒细胞群、单核细胞群、淋巴细胞群、有核红细胞群及原始幼稚细胞群，通过二维表型图谱，分析各群细胞CD173和CD34抗原表达情况。根据AL免疫学特征欧洲协作组标准，≥20%细胞表达为阳性，<20%为阴性。

1.4 统计学方法 应用SPSS16.0统计软件进行数据分析，计数资料组间比较采用χ2检验，计量资料以均数±标准差表示，两组间均数比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的CD173表达比较 对照组骨髓单个核细胞均未见CD173阳性表达，AL中有2例阳性表达，阳性率为4.8%，差异无统计学意义(χ2= 0.740，P>0.05)，见图1。

图1 AL中CD173阳性表达

2.2 两组患者骨髓中有核红细胞CD173的表达比较 CD173在急性白血病有核红细胞中的表达阳性率为50.0%，阳性细胞表达水平为(21.3±13.0)%，对照组有核红细胞中的表达阳性率为53.3%，阳性细胞表达水平为(23.0±16.40)%，差异均无统计学意义(χ2= 0.049，t=0.397，P>0.05)。

2.3 两组患者的CD34表达比较 15例对照组骨髓单个核细胞均未见CD34阳性表达，42例AL中有26例阳性表达，阳性率为61.9%，差异有统计学意义(χ2=17.074，P<0.01)，见图2。

图2 AL中CD34阳性表达

2.4 AL患者的CD173与CD34的共表达 26例CD34+AL中2例表达CD173阳性，16例CD34-AL中无CD173阳性表达，但是差异无统计学意义(χ2= 1.292，P>0.05)。

3 讨 论

细胞表面糖分子CD173(也称组织血型H2抗原)，是由FUT1基因编码的末端岩藻酸化的糖分子，是CD174(LeY，Fucal-2Gal-β1-4[Fucal-3]GlcNAcβ1-)的前体分子，均由相同的前体糖链衍生而成。在人类，H抗原活性物质不仅仅表达在红细胞表面，还表达于血管内皮细胞等细胞和组织。

研究表明，白血病患者体内存在0.1%～1%微量的细胞群，它们无论在体外长期的细胞培养中还是动物模型体内都能引起并维持白血病，被称为白血病干细胞(LSC)。LSC通常对化疗不敏感，是导致白血病复发的根源[5]。因此对LSC特异标志物的研究可以作为白血病治疗的关键靶点。CD34是目前公认的最主要的造血干/祖细胞表面标志物[6]。Cao等[7]报道CD173特异表达于CD34+的正常造血干细胞和多种CD34+的白血病细胞系，认为CD173可能也是造血干细胞的表面标志分子。Lin等[8]研究还发现CD173表达于乳腺癌细胞，特别是导管原位癌的基底细胞，提示CD173可能也是乳腺癌干细胞标志分子。

本研究检测了42例急性白血病患者及15例对照组骨髓细胞CD173的表达，结果显示对照组骨髓单个核细胞均未见CD173阳性表达，AL中白血病细胞阳性率为4.8%，但是差异无统计学意义(P> 0.05)。CD173在急性白血病和对照组有核红细胞中均有表达，但差异也无统计学意义(P>0.05)。虽然2例CD173阳性患者均同时表达CD34，但是CD173的表达在CD34+AL组和CD34-AL组中的差异也无统计学意义(P>0.05)。因此本组研究结果尚不能表明CD173可以作为干细胞的表面标志分子。

本研究结果与国外研究报道的结果存在差异，原因可能有以下几点：(1)抗体标记方法不同。在流式检测的抗体标记方法有直接荧光标记法和间接荧光标记法。直标法操作简便，结果准确，减少了间标法中较强的非特异荧光的干扰，一般都尽量选择直标抗体。尤其在流式多荧光测定中，需要多重染色，这时必需使用直接标记法，间接标记法增加了染色之间的干扰[9]。本研究使用的直接标记法优于国外文献报道使用的间接标记法。(2)抗体克隆号不同。在抗体选择时克隆号一般不需要特别关注，同一抗体有多个克隆号的情况下，可以选择荧光标记种类最多的那个克隆。也有报道指出，不同克隆号的抗体测定的结果有差异[10-11]。(3)检测的样本不同。

目前对于CD173的研究报道还较少，对于其在急性白血病骨髓细胞中的表达、CD34+白血病细胞中的表达及作用尚不明确，还有待于进一步研究。

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[8]Lin WM,Karsten U,Goletz S,et al.Co-expression of CDl73(H2) and CDl74(Lewis Y)with CD44 suggests that fucosylated histo-bloodgroup antigens are markers of breast cancer-initiatingcells [J].Virchows Arch,2010,456(4):403-409.

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Expression of CD173 in acute leukemia and its clinical significance.

RAO Ruo,YAO Hong-xia,FU Sheng-miao,LIN Li-e,WANG Gu-yun,WANG Shu-wen,WU Li-fang,HUANG Li.Laboratory of Hematology,Hainan Provincial People's Hospital,Haikou 570133,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of CD173 in acute leukemia (AL).MethodsWe used flow cytometry(FCM)and direct immunofluorescence staining to detect CD173 and CD34 of bone marrow cells in 42 AL patients and 15 non-leukemia patients(control group)in Department of Hematology in our hospitalfrom June to November in 2016.ResultsBone marrow mononuclear cells in controlgroup showed no positive expression of CD173,and the positive expression rate of 42 AL patients was 4.8%,with no statistically significantdifference(P>0.05).The CD173 positive rate and positive cell expression levelin nucleated erythrocytosis showed no significant differences between AL patients[50.0%,(21.3±13.0)%]and controlgroup patients[53.3%,(23.0±16.4)%],P>0.05. Bone marrow mononuclear cells in control group showed no positive expression of CD34,and the positive expression rate in AL patients was 61.9%,with statistically significant difference(P<0.01).Two cases showed CD173 positive expression in 26 cases with CD34+AL patients,and CD173 positive expression was not detected in 16 patients with CD34-acute leukemia,with no statistically significant difference(P>0.05).ConclusionCD173 expression in acute leukemia and the non-leukemia group has no significantdifference.

CD173;Acute leukemia(AL);Flow cytometry(FCM)

R733.71

A

1003—6350（2017）09—1387—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.09.004

2016-12-01)

海南省卫生厅课题（编号：14A210201）

姚红霞。E-mail:yaohongxia768@163.com