肝癌患者血液中VEGF—C、VEGF—D和受体VEGFR—3的表达及意义

廖文胜+胡虞乾+何阳阳+李西融+唐澄海+杜延召+李江发

[摘要] 目的 探討肝细胞性肝癌患者血液中血管内皮生长因子-C（VEGF-C）、血管内皮生长因子-D（VEGF-D）和血管内皮生长因子受体-3（VEGFR-3）的表达及意义。 方法 以2012年8月～2014年8月经南溪山医院病理科确诊为肝细胞性肝癌的40例患者为肝癌组，以同期10例非肝癌患者为非肝癌组。应用酶联免疫吸附测定法检测患者外周静脉血VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3的表达，统计分析VEGF-C、VEGF-D和受体VEGFR-3的表达与肝癌发生的关系。 结果 VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3在肝癌组术前血液中的表达显著高于肝癌组术后和非肝癌组（P < 0.05），并且VEGFR-3的表达与VEGF-C、VEGF-D的表达呈显著正相关（r = 0.982、0.975，均P < 0.01）。 结论 VEGF-C、VEGF-D和受体VEGFR-3在肝细胞性肝癌患者血液中的表达明显增高，其可能与肝癌的发生发展有关。

[关键词] 肝细胞性肝癌；血管内皮生长因子-C；血管内皮生长因子-D；血管内皮生长因子受体-3

[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）03（b）-0099-03

Expression and significance of VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 in the blood of patients with hepatocellular carcinoma

LIAO Wensheng1 HU Yuqian1 HE Yangyang1 LI Xirong1 TANG Denghai1 DU Yanzhao1 LI Jiangfa2

1.Department of Hepatopancreat Obliliary Surgery， Nanxishan Hospital， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Guilin 541000， China； 2.Department of Hepatopancreat Obliliary Surgery， Affiliated Hospital of Guilin Medical University， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Guilin 541000， China

[Abstract] Objective To explore the expression and significance of vascular endothelial growth factor-C （VEGF-C）， vascular endothelial growth factor-D （VEGF-D） and vascular endothelial growth factor receptor-3 （VEGFR-3） in the blood of patients with hepatocellular carcinoma. Methods Forty HCC patients diagnosed at the Department of Pathology of Nanxishan Hospital from August 2012 to August 2014 were selected as hepatoma group， and 10 non-hepatoma patients at the same time were selected as non-hepatoma group. The expression of VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 in blood samples was determined by enzyme-linked immune-sorbent assay. The relationship between VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 with the occurrence of hepatocellular carcinoma was analyzed statistically. Results The expression of VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 in the blood of pre-operative hepatoma group was significantly higher than those in the blood of post-operative hepatoma group and non-hepatoma group （P < 0.05）. The expression of VEGFR-3 showed a significant positive correlation with the expression of VEGF-C， VEGF-D （r = 0.982， 0.975， all P < 0.01）. Conclusion The expression of VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 are increased in the blood of patients with hepatocellular carcinoma， which may be associated with the occurrence and development of hepatocellular carcinoma.

[Key words] Hepatocellular carcinoma； Vascular endothelial growth factor-C； Vascular endothelial growth factor-D； Vascular endothelial growth factor receptor-3

肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）在男性患者各种肿瘤的病死率中排列第2位[1]，HCC具有易转移、预后差、易复发等特点，肿瘤组织所具有的侵袭转移的特点正是肝癌预后差、易复发的病理学基础，其转移的分子机制还不明确，研究原发性HCC的机制和转移规律具有重要临床价值。目前研究发现肿瘤的发生进展：生长、浸润、转移和复发都是依靠肿瘤新生血管和淋巴管的形成，如果控制肿瘤的新生血管的出现和淋巴管生成就能够有效地控制肿瘤的生长及进展[2]。血管内皮生长因子（VEGF）通过促淋巴管及血管生长的作用，从而对肝癌的发生、发展产生影响。VEGF家族及其受体（VEGFR），通过与其受体结合发挥促淋巴管及血管生长的作用，在肿瘤中促进新生毛细血管生成，介导血管内皮细胞生成、增殖和迁移，并且诱导淋巴管生成，增加血管通透性，是肿瘤淋巴管和血管生成的重要因子[3]，与肿瘤的侵袭和转移密切相关。通过对肝癌患者及正常人群的肝脏组织中血管内皮生长因子-C（VEGF-C）、血管内皮生长因子-D（VEGF-D）和血管内皮生长因子受体-3（VEGFR-3）的表达进行研究，发现在肝癌中这些因子表达明显高于非肝癌组[4-5]，它们的高表达有可能促进了新生血管的形成和新生淋巴管的出现，进而加快了肿瘤的生长及转移，从而影响HCC患者的预后[5-10]。同时，相关研究也发现，VEGF-C参与了肝恶性肿瘤转移及淋巴转移过程[11]。研究发现在HCC中可发现VEGFR-3显著上调[12]。那么在患者血液中是否也存在这样的情况，本研究对此进行了相关研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以2012年8月～2014年8月经南溪山医院病理科确诊为HCC（诊断标准参见文献[13]）的40例患者为肝癌组，以同期10例非肝癌患者为非肝癌组。肝癌组，男30例，女10例，平均年龄（52.5±11.5）岁；非肝癌组，男8例，女2例，平均年龄（54.0±11.6）岁。两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。对所有受试者在试验前履行知情同意告知并获同意后入选本研究。肝癌组患者根据原发性肝癌TMN系统：Ⅰ期14例，Ⅱ期15例，ⅢA期11例。

1.2 方法

非肝癌组取一次外周静脉血液。肝癌组分别于术前1 d和术后1周采取外周静脉血，外周静脉血于清晨空腹采集静脉血10 mL，取5 mL注入加有10% EDTA Na2 30 μL和抑肽酶40 μL的试管中，混匀；另5 mL加入空白试管中。以上标本均在10 min内于4℃低温情况下以离心半径10 cm、3000 r/min离心10 min，取上清置于-78℃冰箱保存，待标本收集完后行VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3检测，并收集患者的一般临床资料。

用酶联免疫吸附测定（ELISA）法严格按试剂盒（人VEGF-C ELISA测定试剂盒、人VEGF-D ELISA测定试剂盒、人VEGFR-3 ELISA测定试剂盒）说明书测定血清VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3水平。

1.3 统计学方法

使用SPSS 19.0进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两样本比较使用t检验；等级资料相关分析用Spearman等级相关性分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3在肝癌组、非肝癌组血液中的表达

肝癌组术前血液中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表达显著高于肝癌组术后和非肝癌组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3相关性分析

VEGFR-3的表达与VEGF-C、VEGF-D的表达呈显著正相关（r = 0.982、0.975，均P < 0.01）。

2.3 术前VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3與肝癌患者分期的关系

术前血液中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表达与患者临床分期相关（P < 0.05）。见表2。

3 讨论

本研究发现在肝癌组术前血清中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表达显著高于非肝癌组，与其他的研究结果一致[14-16]；Meta分析发现HCC患者组织中VEGF的表达明显高于健康正常人，差异有统计学意义[17-20]；这意味着肝癌细胞分泌了大量的VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3，增进了肿瘤血管的生成，进而为肿瘤细胞生长提供所需的营养物质，并且为肿瘤转移提供了可能的条件[21-22]。张绍武等[15]研究发现肝癌患者血清VEGF水平显著高于对照组血清（P < 0.01）。

本研究发现肝癌组术后血清中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表达较术前显著下降。介入栓塞可以降低肝癌患者血清VEGF，改善患者预后[23-26]。手术切除肿瘤后，解除了肝癌对机体及血管生成的影响，使得肝癌刺激新生血管生成也减少，在一定程度上抑制了肿瘤的进展[14]。血液中这几个因子的动态监测有可能作为判断手术疗效及预后的指标。

本研究发现VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表达与患者临床分期密切相关，结果与其他研究相似，有转移与复发的患者血清VEGF水平显著高于无转移与复发的患者[15]。这提示可以通过对VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的检测对患者是否有转移进行预判。

研究发现VEGF-C、VEGF-D和受体VEGFR-3在肝癌患者血液中表达增高，表明VEGF与HCC可能存在的关系；术后表达较术前显著降低，这几个因子有可能用于判断手术疗效的监测。

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