微波法产地加工延胡索饮片的质量标准研究

宋艺君+苏健+郭涛+王昌利

[摘要] 目的 建立微波法产地加工延胡索饮片的质量标准。方法 对微波法产地加工的延胡索饮片进行性状、薄层鉴别，并对灰分、水分、浸出物进行测定，采用HPLC法对原阿片碱、延胡索乙素进行含量测定，采用分光光度法对总生物碱进行含量测定。结果 经微波加工的延胡索饮片水分<15%，灰分<4%，浸出物>13%，符合《中国药典》要求。薄层斑点清晰，分离度较好。延胡索乙素、原阿片碱、总生物碱含测结果准确、重现性好。结论 所建立的质量标准可为微波法产地加工延胡索饮片提供依据。

[关键词] 延胡索；质量标准；延胡索乙素；原阿片碱；总生物碱

[中图分类号] R000 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）03（b）-0029-04

Study on quality standard of origin processing Corydalis yanhusuo by microwave method

SONG Yijun1 SU Jian1 GUO Tao2 WANG Changli1

1.School of Pharmacy， Shaanxi University of Chinese medicine， Xianyang 712046， China； 2. 451st Hospital of PLA， Xi'an 710054， China

[Abstract] Objective To establish the quality standard for origin processing Corydalis yanhusuo by microwave method. Methods The traits， TLC identification carried out， ash， moisture， extract measured， tetrahydropalmatine， protopine and total alkaloidswere measured by HPLC and UV spectrophotometry method respectively. Results The moisture of Corydalis decoction by microwave method is less than 15%， the ash is less than 4%， the extract is more than 13%， meeting the requirements of pharmacopoeia. The TLC spots were clear， good resolution. The determination method is accurate， reproducible. Conclusion Quality standards established could provide the basis for origin processing of Corydalis yanhusuo by the microwave method.

[Key words] Corydalis yanhusuo； quality standard； tetrahydropalmatine； protopine； total alkaloids

延胡索为罂粟科紫堇属植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的干燥块茎，属于“浙八味”之一。具有活血止痛、利气的功能，临床上常用于胸胁、脘腹作痛，经闭痛经，胸痹心痛，跌扑肿痛等症[1]。延胡索含有的化学成分以生物碱为主，包括延胡索甲素、乙素、丙素（原阿片碱）[2-3]。由于延胡索药材质地坚实，采收后，直接晾晒导致干燥时间较长，易霉变，因此药材在采收后应对加工方法进行改进，前期的研究比较了不同产地加工方法的差异，优选出微波法产地加工。为了控制产地微波加工法的饮片质量，本文进行了质量标准的研究，以此为微波法加工延胡索饮片的质量控制提供借鉴。

1 仪器与试药

U3000高效液相分析仪（赛默飞世尔科技公司）；UV-2550紫外可见分光光度仪（岛津公司）；WFH-201B紫外投射反射仪（上海精科实业股份公司）；G80D23CSL-G1格兰仕微波炉（佛山市顺德区格兰仕微波炉电器有限公司）

延胡索乙素对照品（批号：110726-201516）、原阿片碱对照品（批号：110853-201404）、延胡索对照药材（批号：120928-201208）购于中国食品药品检定研究院；高效液相用甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯净水，其余试剂均为分析纯。

延胡索鲜药材采自陕西省城固县，经陕西中医药大学胡本祥教授鉴定为罂粟科植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的新鲜块茎，除去泥沙杂质、须根，洗净后摊开沥干水分。

微波法产地加工延胡索饮片：取10批次大小分开的延胡索（直径范围1.0～1.2 cm）各 500 g，依次采用功率60%的火力微波加熱10 min，取出，放冷，切片，干燥至水分低于15%。

2 方法与结果

2.1 性状

呈不规则圆形厚片。外表皮黄色或黄褐色，有不规则细皱纹。切面黄色，角质样，具蜡样光泽。气微，味苦。

2.2 水分、灰分和浸出物

按照《中国药典》2015年版四部水分测定法[4]（通则0832第二法）、灰分测定法（通则2302）、 水溶性浸出物、醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（通则2201） 对10批次的延胡索饮片样品进行测定。结果见表1。

2.3 薄层鉴别

2.3.1 延胡索乙素 取延胡索粉末1 g，用50 mL甲醇溶解，超声处理20 min，滤过，蒸干，残渣用10 mL水溶解，调至碱性（浓氨试液），以10 mL乙醚萃取2次，萃取液合并，挥干，残渣用1 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。取对照药材延胡索1 g，以相同的方法制成对照药材溶液。取对照品延胡索乙素适量，加甲醇制成0.48 mg/mL的对照品溶液。按照薄层色谱法试验，分别吸取上述三种溶液10 μL，依次点于同一个用氢氧化钠溶液（1%）制备的硅胶G板上，以丙酮-甲苯（2∶9）为展开剂进行展开，取出，晾干，于碘缸中显色，在紫外光灯365 nm下检视[1]139。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1（封四）。

2.3.2 原阿片碱 取本品粉末4 g，置磨口锥形瓶，加三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（5∶1∶0.8）混合溶液20 mL，超声处理30 min，滤过，蒸干，残渣加1 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。取对照品原阿片碱适量，用三氯甲烷溶解，制成2 mg/mL的对照品溶液。按照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液10 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二乙胺-乙酸乙酯（16∶1∶3）为展开剂，预饱和30 min后展开，取出，晾干后喷以稀碘化铋钾溶液[1]279。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点。见图2。

2.4延胡索乙素含量测定

2.4.1 色谱条件及系统适用性试验 Hypurity C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH值至6.0）（55∶45），流速：1.0 mL/min，检测波长：280 nm，柱温：30℃，进样量：10 μL[1]140。色谱图见图3所示。

2.4.2对照品溶液制备 取经105℃干燥至恒重的对照品延胡索乙素适量，以甲醇溶解，制成123.6 μg/mL的对照品溶液。

2.4.3供试品溶液制备 取本品粉末0.5 g，精密称定，加入浓氨试液-甲醇（1︰20）混合溶液50 mL，称定，放置1 h后回流1 h，放冷，再称定，对减失部分予以补足，摇匀，滤过。取续滤液25 mL，蒸干，加甲醇溶解定容至5 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4.4线性关系考察 取“2.4.2”项下对照品溶液，依次进样2、4、6、8、10、20 μL，以峰面积（Y）对进样量（X，μg）进行线性回归，得回归方程Y=7.3352X+0.4544， r=0.9999（n=6），结果表明，延胡索乙素在进样量0.2472～2.4720 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4.5精密度试验 取同一个供试品溶液，连续6次进样，依法测定，结果延胡索乙素峰面积的RSD为1.86%，表明本方法精密度良好。

2.4.6重复性试验 取同一批样品，按“2.4.3”制成供试品溶液，连续进样6次，依法测定，计算延胡索乙素含量，结果平均含量为3.35 mg/g，RSD为2.05%，表明本方法重复性良好。

2.4.7稳定性试验 取同一份供试品溶液，每隔2 h进样一次，连续进样6次，依法测定，结果峰面积RSD为2.21%，表明12 h内基本稳定。

2.4.8加样回收率试验 取6份3.35 mg/g的样品，依次加入定量对照品延胡索乙素，制备供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果平均回收率為99.47%，RSD=2.03%，表明本方法回收率较好。见表2。

2.5原阿片碱含量测定

2.5.1 色谱条件及系统适用性试验 Hypurity C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：乙腈-三乙胺醋酸溶液（每1000 mL 水中加入冰醋酸 30 mL，三乙胺 8 mL）（18∶82），流速：1.0 mL/min，检测波长：289 nm，柱温：30℃，进样量：10 μL[1]279-280。色谱图见图4所示。

2.5.2对照品溶液制备 取经105℃干燥至恒重的对照品原阿片碱适量，以甲醇溶解，得到219.2 μg/mL的对照品溶液。

2.5.3供试品溶液制备 按照“2.4.3”项下方法制备。

2.5.4线性关系考察 取“2.5.2”项下对照品溶液1 mL，置10 mL的容量瓶中，加甲醇稀释至10 mL，同法再稀释10倍，得到对照品溶液浓度为2.19 μg/mL，分别进样10、20、30、40、50 μL，以峰面积（Y）对进样量（X，μg）进行线性回归，得回归方程Y =230.39X +0.0096， r=0.9994（n=5），结果表明，原阿片碱在进样量0.0219～0.1095 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5.5精密度试验 取浓度为219.2 μg/mL的对照品溶液，连续6次进样，测定，结果峰面积的RSD为1.46%，表明本方法精密度良好。

2.5.6重复性试验 取同一批样品，按“2.5.3”制成供试品溶液，连续进样6次，依法测定，计算原阿片碱含量，结果平均含量为0.86 mg/g，RSD为2.10%，表明本方法重复性良好。

2.5.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液，2 h进样一次，连续进样6次，依法测定，结果峰面积RSD为2.01%，表明12 h内基本稳定。

2.5.8 加样回收率试验 取0.86 mg/g的样品6份，依次加入适量原阿片碱对照品，制成供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果平均回收率为98.07%，RSD为2.25%，表明本方法回收率较好。见表3。

2.6 总生物碱含量测定[5]

2.6.1 供试品溶液制备 取0.5 g延胡索粉末，精密称定，加水回流2次（100 mL，80 mL），每次30 min。过滤，合并滤液，离心，减压浓缩至50 mL，加氨水调至pH10以上，移入分液漏斗，用氯仿萃取2次（50 mL，50 mL）合并萃取液，加蒸馏水洗涤，弃去水层，氯仿液合并，浓缩并定容至10 mL。

2.6.2 对照品溶液制备 取适量延胡索乙素对照品，用乙醇溶解定容于50 mL容量瓶，得到48 μg/mL的对照品溶液。

2.6.3 检测波长的确定 取上述所得样品1 mL于蒸发皿中水浴蒸干，用乙醇溶解定容至10 mL。以乙醇作为空白溶液，分别把上述对照品溶液和样品溶液在紫外分光光度计进行全波长扫描，对照品溶液在280 nm处有最大吸收，样品溶液在273 nm处有最大吸收。最终选择检测波长280 nm， 并在280 nm处测量样品的吸光度。

2.6.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1.0、2.0、 3.0、4.0、5.0 mL，置于5 mL容量瓶中，加乙醇定容至刻度，从而得到浓度为9.6、19.2、28.8、38.4、48.0 μg/mL的系列对照品溶液，以乙醇作为空白对照，在280 nm波长处测定吸光度，以浓度为横坐标（C），吸光度为纵坐标（A），绘制标准曲线，得回归方程为A = 0.0199C+0.0393，r=0.9992， 表明对照品浓度在9.6～48.0 μg/mL与吸光度呈良好的线性关系。

2.6.5 精密度试验 取浓度为48 μg/mL的对照品溶液，连续6次测定，结果总生物碱吸光度的RSD为1.85%。

2.6.6 重复性试验 取同一批（批号151102）样品，按“2.6.1”制成供试品溶液，连续测定6次，计算总生物碱含量，结果总生物碱的平均含量为5.49 mg/g，RSD为1.97%。

2.6.7稳定性试验 取同一份供试品溶液，每隔2 h进样一次，连续测定6次，结果吸光度RSD为2.07%，表明12 h内基本稳定。

2.6.8加样回收率试验 取5.49 mg/g的样品6份，依次加入适量对照品，制成供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果平均回收率为98.74%，RSD为2.64%，结果见表4所示。

2.7 样品含量测定

取不同批号样品0.5 g，精密称定，分别按照“2.4.3”、“2.6.1”项下方法制成供试品溶液，依法测定延胡索乙素、原阿片碱和总生物碱的含量，结果见表5。

3 讨论

在总生物碱的含量测定预试过程中，先采用酸碱滴定法[6]，存在终点颜色变化不明显的现象，无法正确判断终点，最终选择采用分光光度法[7]测定总生物碱含量。

据文献报道[8-10]，延胡索主要成分为生物碱，包括水溶性和脂溶性，因而在微波产地加工的延胡索饮片质量标准研究中，进行了水溶性和醇溶性浸出物的测定。在鉴别和含量测定中，2015年版《中国药典》延胡索饮片只有单一薄层色谱定性及延胡索乙素定量，不能完全反映延胡索饮片的质量和功效特点，因此，本试验增加了原阿片碱的定性和定量研究，且增加了总生物碱的含量测定，这对于延胡索饮片的质量评价更为有效，可以作为内控标准用于产地加工延胡索饮片的质量控制，也为修订和完善延胡索饮片质量标准提供了依据。

[参考文献]

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[2] 王文蜀，肖巍，喻蓉，等.中药延胡索化学成分研究[J].中央民族大学学报，2007，16（1）：80.

[3] 黄康泰.常用中药成分与药理手册[M].北京：中国医药科技出版社，1994：874.

[4] 国家药典委员会.中国药典（四部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：104.

[5] 施婷婷，王建新，李希.延胡索总生物碱提取工艺的实验研究[J].中药与临床，2014，5（3）：14-16.

[6] 谢明.延胡索醋制前后总生物碱含量测定及对小鼠的镇痛作用比较[J].海峡药学，2014，26（3）：33-34.

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