高效液相色谱法测定蓼子七中没食子酸含量

刘红莉，贾文江，曹望弟

（陕西省商洛市药品检验所，陕西 商洛 726000）

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高效液相色谱法测定蓼子七中没食子酸含量

刘红莉，贾文江，曹望弟

（陕西省商洛市药品检验所，陕西 商洛 726000）

目的建立测定蓼子七中没食子酸含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱采用InertSusTain C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为甲醇－水－磷酸（15∶85∶0.085），流速为1.0 mL／min，检测波长为270 nm，柱温为35℃。结果蓼子七中没食子酸质量浓度在0.141 5～0.830 5 g／mL范围内与峰面积线性关系良好（R2＝0.999 9），平均回收率为98.35%，RSD为0.60%（n＝6）。结论 该方法简便、快速，稳定性好，可用于蓼子七中没食子酸含量的测定。

高效液相色谱法；蓼子七；没食子酸；含量测定

蓼子七为蓼科植物金线草 Antenoron filiforme (Thunb.)Roberty et Vautier的根茎，始载于《本草拾遗》，别名猪蓼七、铁棱角三七、金线草、铁拳头、土三七、毛蓼，属民间草药[1－6]。其药性平、淡，具有祛风除湿、止血、凉血、舒筋接骨、止痛等功效，可用于治疗咳血、止血、便血、风湿脾症、跌打损伤、骨折等病症[7－8]。文献记载，在同属的短毛金线草的乙醇提取物中分离鉴定了11个化合物，其中有没食子酸（gallic acid）、左旋儿茶精（catechin）、左旋表儿茶精（epicatechin）、左旋表儿茶精－3－O－没食子酸酯（epicatechin－3－O－gallate）、原矢车菊素B2（procyanidin B2）、原矢车菊素B2－3－O－没食子酸酯（procyanidin B2－3－O－gallate）等化合物[9]，曾采用显微鉴别法、薄层色谱（TLC）法对蓼子七中没食子酸进行定性鉴别[6]。目前尚未见蓼子七中没食子酸的含量测定报道，本研究中采用高效液相色谱(HPLC)法测定蓼子七中没食子酸含量，为蓼子七的开发和利用提供质量控制依据。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

U－3000型高效液相色谱仪，包括紫外检测器，四元泵（美国赛默飞世尔科技公司）；BT－125D型电子天平（日本岛津公司）；FW－200D型高速万能粉碎机（天津鑫博得仪器有限公司）；HH－S8型水浴锅（北京科伟永兴仪器有限公司）；AS7240A型超声波清洗机（天津奥特赛恩仪器有限公司）。

1.2 试药

蓼子七采于商洛市柞水县，经陕西省食品药品检验所主任药师郭耀武鉴定为蓼科植物金线草 Antenoron filiforme(Thunb.)Roberty et Vautier；没食子酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110831－201204，含量为89.9%）。甲醇（色谱纯，西格玛奥德里奇公司）；磷酸（分析纯，天津耀华化学试剂有限责任公司）；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验[7]

色谱柱：InertSusTain C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－水－磷酸(15∶85∶0.085)；检测波长：270 nm；柱温：35℃；流速：1.0 mL／min；进样量：10 μL。理论板数以没食子酸峰计应不小于5 000，保留时间约为7.1 min，没食子酸峰与相邻峰的分离度大于1.5。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

对照品溶液：称取没食子酸对照品（批号为110831－201204）12 mg，精密称定，置 100 mL容量瓶中，加甲醇适量，使其溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀；再精密量取1 mL，置200 mL容量瓶中，用甲醇定容并稀释成每1 mL含0.6 μg的溶液，即得。

供试品溶液：将药材粉碎并，四号筛，取药材细粉0.5 g，精密称定，置250 mL具塞锥形瓶中，加入精密量取的4 mol／L盐酸溶液50 mL，密塞，称定质量；水浴加热2.5 h后，放冷，再称定质量，并用4 mol／L的盐酸溶液补足减失的质量，滤过，取续滤液1 mL置100 mL容量瓶中，用50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 方法学考察

线性关系考察：取对照品溶液（质量浓度为0.594 μg／mL），分别进样2，4，6，8，10，12 μL，以进样量（X，μL）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标绘制标准曲线。得回归方程Y＝0.068 9 X＋0.003 7，R2＝0.999 9(n＝6)。结果表明,没食子酸质量浓度在0.141 5～0.830 5 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。结果见图2。

精密度试验：精密吸取对照品溶液10 μL，按拟订色谱条件连续进样6次，测定和记录没食子酸的峰面积。结果没食子酸峰面积 RSD 为0.28%（n＝6），表明仪器精密度良高。

图2 没食子酸线性关系图

稳定性试验：取0.45 μm微孔滤膜过滤后的同一供试品溶液适量，分别于0，2，4，6，8，10，12 h时进样10 μL，按拟订色谱条件进行测定。结果没食子酸峰面积的 RSD为0.55%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验：称取蓼子七样品细粉6份，每份约0.5 g，精密称定，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果平均含量为0.258 4%，RSD为1.3% （n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的蓼子七供试品6份，精密称定，每份约0.5 g，加入质量浓度为1.4 g／L的没食子酸对照品溶液适量，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取供试品约0.5 g，精密称定，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录没食子酸的峰面积（A），按外标法计算含量。结果见表2。

表1 没食子酸加样回收试验结果（n＝6）

表2 蓼子七中没食子酸含量（n＝4）

3 讨论

3.1 测定方法选择

蓼子七为民间常用中药材，收载于2015年版《陕西省中药材标准》。其中仅规定了性状、鉴别及检查项，含量测定未作要求，且尚未见HPLC法测定蓼子七中没食子酸含量的报道。研究表明，没食子酸具有收敛、止血、止泻、杀菌、抗病毒作用[10－11]，抗菌、抗病毒、抗肿瘤的作用[12－13]，以及抗炎、抗突变、抗氧化等生物活性[14－15]。本研究中建立了测定蓼子七中没食子酸含量的HPLC法，目的是为更好地开发和利用蓼子七提供依据。

3.2 超声处理时间选择

曾选择 4 moL／L盐酸溶液水浴加热 2.5 h，加50%甲醇溶液回流30 min，加水超声30 min，水浸1 h，回流2 h，乙酸乙酯等提取方法[6－8]。结果显示，水浴加热2.5 h＞水浸1 h，回流2 h＞加水超声30 min＞加热回流30 min，以加4 moL／L盐酸溶液水浴加热2.5 h的含量提取最高（0.26%），超声30 min的含量提取最低（0.06%）。故选择了加4 moL／L盐酸溶液水浴加热2.5 h。

3.3 检测波长选择

曾选用270，290，330 nm检测波长进行测试，结果显示于270 nm波长处出峰快，分离度效果好，理论板数高。故选择270 nm为检测波长。

综上所述，以没食子酸为标准品，HPLC法测定蓼子七中没食子酸含量，简单易行，稳定可靠，可作为测定蓼子七中没食子酸成分含量的可行性方法，可作为蓼子七开发利用和质量控制的依据，可为其标准的制订提供参考依据。

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Content Determination of Gallic Acid in Antenoron Filiforme(Thunb.)by HPLC

Liu Hongli,Jia Wenjiang,Cao Wangdi
(Shangluo Institute for Food and Drug Control,Shangluo,Shaanxi,China 726000)

Objective To establish an HPLC method for the content determination of gallic acid in Antenoron Filiforme(Thunb.).M ethods The chromatographic column was InertSusTain C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm),the mobile phase was methanolwater－phosphoric(15∶85∶0.085)with a flow rate was 1.0 mL／min,the detection wavelength was 270 nm and the column temperature was 35℃.Results The linear ranges of gallic acid in Polygonum seven was 0.141 5－0.830 5 μg／mL(R2＝0.999 9).The average recovery was 98.35% and RSD was 0.60%.Conclusion The method is simple,rapid,has good stability,and can be used for the content determination of gallic acid in Antenoron Filiforme(Thunb.).

HPLC;Antenoron Filiforme(Thunb.);gallic acid;content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)05－0032－03

2016－11－05；

2016－12－04)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.05.008

刘红莉（1964－），女，主管药师，研究方向药品检验及管理，（电话）0914－2396710（电子信箱）1445213517＠qq.com。