AGCU-Y24-STR和YfilerTM-STR试剂盒的比较研究

马沁雅申君毅

（1 长治市公安局刑事技术支队 山西 长治 046000；2 山西省公安厅科技处 山西 太原 030000）

AGCU-Y24-STR和YfilerTM-STR试剂盒的比较研究

马沁雅1申君毅2

（1 长治市公安局刑事技术支队 山西 长治 046000；2 山西省公安厅科技处 山西 太原 030000）

比较AGCU-Y24-STR和YfilerTM-STR试剂盒的法医学应用价值。采用这两种试剂盒分别进行平行扩增，研究在遗传多态性、各种检材、亲子鉴定中的应用。AGCU-Y24-STR试剂盒基因座可单次检测24个Y-STR基因座，可大幅度提高多态性信息含量，其单倍型多样性和非父排除能力高于YfilerTM-STR试剂盒。两种试剂盒在各种检材检验中17个共有-Y-STR分型结果一致，AGCUY24-STR新增的7个基因座GD均大于0.5，适于山西汉族人群，在亲子鉴定中尤其是基因突变的样本检验有更高的应用价值。AGCU-Y24-STR大幅提高了多态性信息含量和个体识别能力，选择了在中国人群中突变率低的基因座，更适于男性家系调查及Y-STR数据库建设。

Y-STR AGCU-Y24-STR试剂盒 YfilerTM-STR试剂盒 遗传多态性

1 引 言

近年来，随着DNA数据库的建立及全国联网，大量的现场生物物证和人员样本的DNA分型入库，实现了全国范围内的资源共享，为揭露犯罪、证实犯罪、打击犯罪和重特大灾害事故处置提供了强有力的技术支撑，发挥了其他技术无法替代的特殊作用。目前，美国AB公司研发的YfilerTM-STR试剂盒因结果可靠、稳定在日常检案中被广泛应用，但检验成本高，在Y-STR家系的大量排查中受到了限制[1]。国产试剂盒的AGCU-Y24-STR是无锡中德美联生物技术有限公司研发的新一代Y-STR复合扩增试剂盒，比YfilerTM-STR试剂盒新增了DYS447、DYS392、DYS522、DYS388、DYS444、DYS527a/b共7个高多态性Y-STR基因座，更适于中国人群，提高了Y-STR数据库的兼容性，因经济、高效在日常检案中具有更为广泛的应用价值。

2 材料和方法

2.1 样本来源

1500例血样均采自于随机抽取的，籍贯为山西，汉族，无亲缘关系的志愿捐血者。

2.2 PCR扩增

AGCU-Y24-STR荧光检测试剂盒 (无锡中德美联生物技术有限公司)、YfilerTM-STR试剂盒（美国AB公司)在两台9700型扩增仪对样本进行平行直扩。PCR扩增体系及扩增条件分别参照这两种试剂盒说明书。

2.3 Y-STR分型

在96孔电泳板取中每孔分别加入1μL扩增产物，10μL甲酰胺，0.5μL内标，放入3130XL遗传分析仪收集分析Y-STR分型数据。

2.4 数据统计分析

两种试剂盒的等位基因频率采用直接计数法统计，基因多样性 (GD)按公式 GD = n (1-∑Pi2) / (n-1) (Pi为等位基因，n为样本数) 分析。

3 结果

3.1 遗传多态性应用

Y-STR检测结果显示，在1500例无关男性个体样本中，AGCU-Y24-STR和YfilerTM-STR试剂盒等位基因频率分布均在0.0084～0.7719，基因多样性值均为0.3748 (DYS391)～0.9705 (DYS385a/b) （详见下表）。在共有的17个Y-STR基因座中，DYS391、DYS437、DYS438的GD值均小于0.5，在山西汉族群体中遗传多态性较低。而AGCU-Y24-STR新增的7个Y-STR基因座DYS392、DYS388 、DYS447、DYS444、DYS527a/b 、DYS522在山西汉族群体中GD值均大于0.5，分别为0.7653、0.5022、0.8228、0.6858、0.9418、0.6863，其基因型具有更好的家系代表性，更加适合于Y-STR数据库建设。我们还发现，DYS392基因座出现稀有基因10.2，说明该基因座在山西汉族群体中有丰富的遗传多态性。且该试剂盒单次检测可同时扩增24个基因座，HD值为0.9999932，DC值为0.9980677，具有较高的单倍型多样性和非父排除能力。

表 山西汉族无关男性7个Y-STR基因座等位基因频率(n=1500)

DYS527a/b GD=0.9416等位基因 (A) 频数 频率 (F) 等位基因 (A) 频数 频率 (F) 17/20 2 0.00133 21/22 154 0.10267 17/23 1 0.00067 21/23 127 0.085499 18 1 0.00067 21/23.2 1 0.00067 18/19 12 0.00800 21/24 68 0.04610 18/20 8 0.00533 21/25 11 0.00733 18/22 1 0.00067 21/26 4 0.00267 18/23 5 0.00333 21/28 1 0.00067 18/24 4 0.00267 22 125 0.08466 18/25 1 0.00067 22/23 108 0.07292 19 14 0.00933 22/24 35 0.0235 19/20 88 0.05867 22/25 6 0.00419 19/21 30 0.02000 22/26 6 0.00419 19/22 11 0.00733 23 90 0.0614 19/23 11 0.00733 23/24 29 0.01928 19/24 5 0.00333 23/25 11 0.00754 19/25 6 0.00400 23/26 2 0.00133 19/26 1 0.00067 23/27 1 0.00067 20 40 0.02667 24 10 0.00670 20/21 57 0.03800 24/25 2 0.00133 20/22 45 0.03000 25 5 0.00335 20/23 104 0.06933 19/20/21 1 0.00067 20/24 72 0.04800 19/20/22 1 0.00067 20/25 26 0.01760 19/20/21 1 0.00067 20/26 5 0.00333 19/21/23 1 0.00067 20/27 1 0.00067 20/22/25 1 0.00067 20.1 1 0.00067 21/22/23 1 0.00067 21 136 0.09066 21/23/24 1 0.00067 DYS522 GD=0.6863等位基因 (A) 频数 频率 (F) 8 1 0.00067 9 10 0.00672 10 161 0.10915 11 566 0.37448 12 587 0.39043 13 143 0.09656 14 31 0.02099 15 1 0.00067

3.2 在常规检案中的应用

本文采用AGCU-Y24-STR和YfilerTM-STR试剂盒对日常检案积累的血卡、口腔拭子、口香糖、泥土和色素污染的血痕、精斑等进行平行检测，在共有的17个Y-STRA基因座分型结果一致。值得注意的是，DYS527a/b基因座出现多个扩增条带，为多拷贝Y-STR基因座，共检出54种单倍型，其中有6个(19/20/21；19/20/22；19/21/23；20/22/25；21/22/23；21/23/24)三拷贝单倍型，在多个男性的混合样本判断时，应注意结合其他基因座或Y-STR检测系统综合分析判断，

3.3 在亲子鉴定中的应用

本文通过对日常检案中不排除亲缘关系的50例双亲和50例单亲检材进行RCP的比较，AGCU-Y24-STR和YfilerTM-STR试剂盒RCP≥99.999%的分别为97例、92例，占97%和92%，而RCP≤99.95%分别为6例、12例，占6%和11%。这是由于AGCU-Y24-STR试剂盒有DYS392等7个高度多态性基因座的加入，使得多态性信息含量和个体识别能力增高。

4 讨论

近年来，随着社会的不断发展变化，企业招工、农村耕地占用、城中村改造等工作中涉及到的费用补偿问题，已逐步成为治安管理部门不容忽视的社会矛盾之一，其中户籍管理过程中亲缘关系鉴定便越来越成为化解矛盾的有效手段，Y-STR检验技术不仅在认定犯罪方面发挥了其他证据手段不可替代的作用，在打拐、尸源认定、亲子鉴定、Y染色体家系排查等方面也越来越显示出其独特的功能优势[2]。应用更适合的试剂盒进行检验，可以及时准确地获取DNA分型数据，国产试剂盒AGCUY24-STR选择了更适合我国人群的高度多态性STR基因座，以其经济、高效的特点极大地节约办案经费并提升案件侦查效率，适于案件排查和家系亲缘搜索，对多人性侵案中犯罪嫌疑人数目判断具有极高的应用价值[3]。

综上，这两种试剂盒检测的1500名无关男性个体在17个共有Y-STR基因座分型结果一致，均能满足法医学实际应用需要[4]。尤其是国产化试剂盒AGCU-Y24-STR，新增的高多态性基因座DYS392、DYS388 、DYS447、DYS444、DYS527a/ b 、DYS522在山西汉族人群中GD值均大于0.5，分别为0.7653、0.5022、0.8228、0.6858、0.9418、0.6863，HD值为0.9999932，DC值为0.9980677，说明该AGCU-Y24-STR系统其单倍型具有更好的家系代表性，在亲缘关系鉴定中基因突变、近亲鉴定的疑难案例中比YfilerTM-STR试剂盒具有显著优势，尤其适于山西汉族人群的家系排查认定，适用于实际案件犯罪嫌疑人的身份排查，适用于性犯罪等男女混合斑的男性犯罪个体识别[5]。且该试剂盒单次检测可同时扩增24个基因座，包含17个YfilerTM-STR试剂盒基因座，7个新增的高度多态性基因座，为快速反应试剂盒，单次扩增可获得更充分的多态性信息，兼容现有的法医检测系统，完全符合国际标准和法庭科学DNA数据库建设，更适合Y-STR数据库建设、家系排查和父系亲缘关系鉴定，从而更好地规范亲缘关系鉴定工作，做到公正、公平、公开，为群众办实事、解难题，充分发挥DNA技术的社会效益。

[1]吴微微,郑小婷,潘立鹏,等.浙江汉族人群16个Y-STR基因座遗传多态性调查[J].刑事技术,2005(5):422-426．

[2]李斌,吕政,王澍,等.福建汉族人群17个Y-STR基因座遗传多态性调查[J].刑事技术,2008(2):246-249.

[3]焦伟,刘斐,黎海澜,等.16个Y-STR基因座在广西苗族、瑶族、侗族人群中的遗传多态性[J].法医学杂志,2012(5):355-358.

[4]Y.P. Hou,J. Zhang,Y.B. Li,et al.Allele sequences of six new Y-STR loci and haplotypes in the Chinese Han population[J]. Forensic Science International,2001(2):5-8.

[5]Myung Jin Park,Hwan Young Lee,Ji-Eun Yoo,et al.Forensic evaluation and haplotypes of 19 Y-chromosomal STR loci in Koreans[J]. Forensic Science International,2004 (2):68-70.

（责任编辑：孟凡骞）

DF795.2

A

2095-7939（2017）01-0105-03

10.14060/j.issn.2095-7939.2017.01.017

2016-11-06

马沁雅（1982-），女，山西长治人，山西省长治市公安局刑事技术支队主检法医师，主要从事法医物证研究。