正交试验法优选化湿润女胶囊的提取工艺*

李佰成，刘军峰，杜稳侠，陈久霞

1.陕西省中医医院(西安710003)，2.西安交通大学第二附属医院(西安710004)

·方药纵横·

正交试验法优选化湿润女胶囊的提取工艺*

李佰成1，刘军峰1，杜稳侠2，陈久霞2△

1.陕西省中医医院(西安710003)，2.西安交通大学第二附属医院(西安710004)

目的：优选化湿润女胶囊的提取工艺。方法：根据水提部分主要药材所含化学成分，选择连翘中的咖啡酸作为指标性成分，再结合干浸膏得率，以煎煮次数，加水量，煎煮时间为考察因素，通过正交试验法确定最佳提取工艺。结果：最佳提取工艺为：药材加水煎煮3次，每次10倍量，煎煮1.5 h。结论：经验证实验证明最佳提取工艺为药材加水煎煮3次，每次10倍量，煎煮1.5 h，所得干浸膏得率和咖啡酸含量均较高。

化湿润女胶囊由清半夏、白花蛇舌草、连翘等中药组成,具有健脾利湿，理气化浊等功效[1-2],用于妇女不孕症，属脾失健运，湿浊壅塞经络、胞宫所致不孕者[3]。处方连翘和半夏中均含有咖啡酸，且咖啡酸水溶性较好因此，以咖啡酸含量和有效部位提取量为考察指标，对其水煎煮工艺进行优选。试验方法采用正交试验法，咖啡酸含量测定方法采用高效液相色谱法。

材料与方法

1 材 料

1.1 实验仪器:高效液相色谱仪(日本,Shimadzu LC-2010A)；电子分析天平(北京,赛多利斯,型号：BS210S ,d=0.1 mg)；电子分析天平(北京,赛多利斯,型号：BT25S,d=0.01 mg)； 离心机(南京,型号：LXJ-Ⅱ)；水浴锅(天津,泰斯特,型号：DK-98-ⅡA)；超声提取仪(南京，熊猫集团，型号：UP3200H型)。

1.2 药材:处方中所用川楝子、白芥子、白花蛇舌草、连翘等药材采购于西安市万寿路药材市场；咖啡酸标准品为供含量测定用对照品，由中国食品药品检定研究院提供；甲醇购自美国Fisher公司，为色谱纯试剂；其它试剂购自天津市化学试剂厂，均为分析纯；蒸馏水自制。

2 实验方法

2.1 正交试验设计: 按处方量比例，称取川楝子、 白芥子、皂角刺、白花蛇舌草各12 g，清半夏、蜂房各10 g，莪术9 g，连翘6 g，共计83 g，平行9份，随机取样编为1～9个试验号。按正交表L9(34)中每个试验号要求进行试验，合并提取液，滤过，精密量取离心(3000转/min)滤过后的滤液100，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，对药材水提取效率影响较大的因素有：溶剂用量、提取次数，提取时间，因此本实验采用L9(34)正交试验法对这三个因素进行考察。实验因素水平表见表1。

表1 试验因素水平表

2.2 咖啡酸的HPLC测定方法

2.1.1 样品制备：按L9(34)正交试验表进行试验，取各样品离心后的滤液适量，置于100℃水浴蒸干，残渣加70%甲醇转移至25 ml量瓶中，超声提取30 min，放凉，加70%甲醇至刻度，摇匀，备用。

2.1.2 对照品溶液的制备:精密称取咖啡酸标准品4.45 mg，加70%甲醇配制为每1 ml含咖啡酸0.0356 mg的溶液，作为咖啡酸标准品溶液。

2.1.3 HPLC测定方法: DIKMA HPLC色谱柱(5u 250×4.6 mm)；流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液(pH值3.8～4.0)(21:79)；检测波长：323 nm；流速：1.0 ml/min。理论塔板数应不低于3000(按咖啡酸峰计算)。进样量：10 μl。

2.3 提取物测定方法：取各样品离心后的滤液100 ml，置于100℃水浴蒸干，105℃干燥3 h，置干燥器中，放凉至室温，迅速称定重量，计算干浸膏得率。

结 果

1 正交试验结果 化湿润女胶囊L9(34)正交试验结果，见表2。

2 方差分析 从实验结果(表3)可见，以提取物得率为考察指标时，提取效率最高的工艺组为A3B2C3；方差分析显示，三个因素中提取次数对提取率影响最大，提取时间和加水量对提取率影响较小。以咖啡酸提取量为考察指标时，结果与上述试验结果一致，提取效率最高的工艺组为A3B2C3；方差分析同样显示，三个因素中提取次数对提取率影响最大，提取时间和加水量对提取率影响较小。因此，综合以上实验结果，确定最优提取工艺为A2B2C3。

3 验证试验 正交实验得出的最佳提取工艺不在正交试验的9个实验中，因此需对其进行验证，按处方量比例，称取川楝子、 白芥子、皂角刺、白花蛇舌草各12 g，清半夏、蜂房各10 g，莪术9 g，连翘6 g，共计83 g，平行三份，按照A2B2C3实验条件进行试验，测定咖啡酸提取量和提取物得率。实验结果显示，正交实验得出的最佳提取工艺其咖啡酸提取量和提取物得率均较高，且重复性良好，因此确定A2B2C3为最优提取工艺，即药材加水煎煮3次，每次10倍量，每次煎煮时间为1.5 h，见表4。

表2 化湿润女胶囊L9(34)正交试验结果

表3 干浸膏得率及咖啡酸得量方差分析

F0.1(2.2)=9.00 F0.05(2.2)=19.00 F0.01(2.2)=99.00

表4 验证试验结果

讨 论

复方制剂提取工艺的优化对制剂的质量控制和临床疗效至关重要，本实验采用处方中主要有效成分咖啡酸和提取物得量为考察指标筛选最佳提取工艺。实验建立的咖啡酸HPLC测定法分离度良好，稳定性和重现性均较好，可准确测定样品中咖啡酸含量，保证实验结果准确性。实验结果发现，采用A2B2C3工艺条件，即加水煎煮3次，每次10倍量，煎煮1.5 h，咖啡酸含量和有效部位提取量最高，且重复性良好，因此确定为最佳提取工艺。

[1] 张海燕.连翘化学成分及药理活性的研究进展[J].中药材，2001, 23(10): 657-660.

[2] 国家药典委员会.《中华人民共和国药典》2010年版一部[M].北京：中国医药科技出版社.

[3] 黄 砚, 杨俊卿, 谢灵瑶. 咖啡酸对大鼠海马神经元铝盐损伤的保护作用 [J]. 中国药理学通报, 2009, 25(12):1605.

(收稿：2016-10-15)

* 陕西省社会发展科技攻关基金资助项目(2016SF-370)

色谱法，高压液相 @化湿润女胶囊 正交试验 提取工艺

R96

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.04.057

△通讯作者