粪大肠菌群及多管发酵法检测探析

古丽茹合萨热·艾海提

摘 要：随着人们环保意识的增强，加强环境中各种细菌的检验、掌握环境污染状况，受到越来越多人的关注。粪大肠菌群检测是水质监测的主要内容之一，有助于环境评定及卫生监督工作的顺利开展。该文对粪大肠菌群及多管发酵法检测进行探讨，以供参考。

关键词：粪大肠菌群 多管发酵法 检测 探析

中图分类号：X832 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2017）01（b）-0093-02

粪大肠菌群是评定水体受粪便污染程度的重要指标，注重对其检测在卫生学上具有重要意义。多管发酵是检测粪大肠菌群的方法之一，对其进行研究，有助于提高检测结果精度，为其更好地推广应用奠定基础。

1 粪大肠菌群检测价值

粪大肠菌群指在44.5 ℃温度条件培养下，24 h能发酵产生乳糖产酸产气需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。其主要生存在人与温血动物肠道中，与粪便一起排出体外，其数量直接反映水体受粪便污染程度。我国于1992年将粪大肠菌群检测纳入生活饮用水检测指标，同时，于2014年6月对食品安全国家标准进行修订，将粪大肠菌群列为微生物检测的强制检测内容。粪大肠菌群检测价值体现在诸多方面，不仅为水体的评定提供参考，而且在卫生监督工作中发挥重要作用，有助于人们加强对粪便的管理，改善环境卫生条件，为人们的生命健康提供保障。

2 多管发酵法检测研究

2.1 培养基及试剂制备

检测中使用的单倍乳糖蛋白胨培养液制备方法为：分别取氯化钠、乳糖、牛肉浸膏、蛋白胨各5 g、5 g、3 g、10 g加热溶解在1 000 mL的蒸馏水中，将溶液的pH值调节为7.2～7.4，而后向其中加入1 mL 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装在试管中使用高压灭菌器在115 ℃温度条件下灭菌20 min，在冷暗处储存，以备后用。配置3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的方法，与配置单倍乳糖蛋白胨培养液的方法相似，区别在于除蒸馏水外，将各组分的用量增加3倍。

EC培养液的配置方法为：使用5 g氯化钠、1.5 g磷酸二氢钾、4 g磷酸氢二钾、1.5 g胆盐三号、5 g乳糖、20 g胰胨，1 000 mL蒸馏水加热溶解，分装在含油玻璃导管的试管中。放置于高压蒸汽灭菌器中将温度调制115 ℃进行20 min的灭菌处理，灭菌后将pH调为6.9。

为保证检测结果存放培养基时应注意：处于密封瓶中的脱水培养基成品应在温度低于30 ℃、湿度低的暗处存放，尤其防止阳光直射。同时，还应防止液体蒸发及杂菌侵入，当发现培养液体积明显改变，或颜色改变时应禁止使用。

2.2 检测步骤

（1）水样接种量的确定。

充分混匀水样，结合水样污染程度，明确水样接种量，尤其应保证各样品使用至少3个不同水样量接种，保证同一接种水样量有5管。未受污染水样接种量取0.1 mL、1 mL、10 mL。依据污染程度受污染水样接种量取0.01 mL、0.1 mL、1 mL。另外应注意，当接种体积为10 mL时，应在试管中装3倍浓度5 mL乳糖蛋白胨培养液，当接种量≤1 mL时可使用10 mL普通浓度的乳糖蛋白胨培养液进行接种。

（2）初发酵实验。

在盛有乳糖蛋白胨培养液发酵管中接种水样，在（37±0.5）℃温度条件下，培养（24±2）h。操作中应注意，水样加入前使用酒精灯消毒培养管管口，加入水样后消毒封口。发酵24 h后观察培养管，阳性判别的标准为培养管既产气又产酸，即有气泡产生且颜色由紫色变为黄色为阳性。当导管气泡不够明显时，可用手轻拍，看是否有气泡产生。

（3）复发酵实验。

取判定为阳性的发酵管轻微振荡，使用灭菌棒或3 mm接种环将培养物转移到CE培养液中。在（44.5±0.5）℃温度条件下培养（24±2）h。接种操作完成后在30 min内将发酵管放进水浴中。培养后及时进行观察，当发酵管产气则可判定为粪大肠菌群阳性。

（4）结果计算。

根据不同接种量发酵管阳性结果数目，查阅相关表格得出每升水样含有的粪大肠菌群。

3 多管发酵法质量控制

使用多管发酵法检测粪大肠菌群时，所受的影响因素较多，稍有不慎容易导致检测结果的不准确，因此，为保证检测结果的准确性应注重从人员技能、计量器、培养条件、培养基、样品均匀性等方面采取相关措施，做好质量控制。

3.1 提高检测人员水平

检测中检测人员不规范操作往往给检测结果产生直接影响，因此，为避免检测结果受检测人员水平的影响，一方面，检测作业前应组织检测人员加强检测规范的学习，使其明确各检测步骤及相关检测参数。另一方面，做好检测培训工作，讲解检测的方法与技巧，使参与检测的人员明确检测中的重点，尤其防止违规行为的出现。

3.2 保证实验设备质量

实验所用设备性能同样会给检测结果产生影响，因此，开展检测工作时应加强所用设备质量的控制，尤其应注意：首先，每天对恒温培养箱进行检查，认真记录培养架使用区稳定，确保其稳定、准确，温度变化应在±0.5 ℃内；高压蒸汽灭菌器应能提供121 ℃的高压灭菌温度，使用运行变色滤纸条对其灭菌结果进行检测，确保其处于最佳性能；另外，为保证所用仪器精度满足检测要求，仪器管理人员做好所用仪器的管理与维护，尤其要定期送到相關部门进行校准。

3.3 严格控制培养条件

复发酵时应注重将粪大肠菌群与自然环境大肠菌群加以区分，即接种后30 min内应将发酵管进行水浴。否则适宜在44.5 ℃温度生长的粪大肠菌群会发酵产气、产酸给检测结果带来干扰。同时，接种好的样品应在生化培养箱中的温度达到（44.5±0.5）℃时才能放入。使用恒温水浴箱时，应保证水面高于接种物面。

3.4 确保培养基质量

使用多管发酵法检测粪大肠菌群时，为保证培养基质量，应注意以下内容：为保证培养基的有效性，应注重使用阴阳性菌株进行检验。同时，培养基进行灭菌、溶解操作后应注重检测其pH值，为细菌创造良好的生长条件；为防止细菌的迅速繁殖破坏培养基的营养成分，培养基配置完成后应及时分装到试管中进行灭菌处理；使用高压灭菌器对培养基进行灭菌后，气压降至0后，及时将培养基从灭菌器中取出，冷却；考虑到内置导管中可能存有气泡，影响检测结果，因此，使用前应认真检测试管，禁止使用存有气泡的培养基；配置完成的培养基存放时间不能太久，而且详细注明配置的具体时间，针对已灭菌的培养基在4 ℃～10 ℃条件下可培养一周。另外，接种样品前应进行充分摇匀，确保菌落处于分散状态。

4 结语

随着人们环保意识的增强，加强环境中各种细菌的检验、掌握环境污染状况，受到越来越多人的关注。粪大肠菌群是大肠菌群的一种，存于人与牲畜的粪便中，时常给水体造成污染，因此，加强对粪大肠菌群的检验，不仅有助于了解水体受粪便的污染程度，而且对水体的治理具有重要参考。该文通过研究得出以下结论。

（1）粪大肠菌群检验具有重要价值，尤其当前水体污染严重的背景下，加强对其的检验有助于改善水体环境，给人类的生产生活创造良好的环境，因此，国家不仅强调粪大肠菌群的检验，而且制定相关检验标准，指导粪大肠菌群检测工作。

（2）多管发酵法是粪大肠菌群检测的常用方法，为保证检验结果的准确性，要求严格依据规范标准进行检测试剂的配置，尤其应分析影响检测结果的因素，明确相关检测环节注意事项，通过开展检测前的培训工作，提高检测人员的专业技术水平，确保其严格遵守相关规范要求开展检测工作。

参考文献

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