格雷夫斯病患者血浆β-内啡肽、降钙素基因相关肽和神经肽Y水平变化及其与甲状腺激素的相关性研究*

王攀，刘松，王霞，蔡小佳，王聚，蒋智钢

（1.遵义医学院附属医院 核医学科，贵州 遵义 563003；2.遵义医学院公共卫生学院，贵州 遵义 563003）

格雷夫斯病患者血浆β-内啡肽、降钙素基因相关肽和神经肽Y水平变化及其与甲状腺激素的相关性研究*

王攀1，刘松1，王霞1，蔡小佳1，王聚1，蒋智钢2

（1.遵义医学院附属医院 核医学科，贵州 遵义 563003；2.遵义医学院公共卫生学院，贵州 遵义 563003）

目的 探讨格雷夫斯病（GD）患者血浆中β-内啡肽（β-EP）、降钙素基因相关肽（CGRP）和神经肽Y（NPY）水平变化的临床价值以及与甲状腺激素[游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺激素（FT4）、促甲状腺激素（TSH）]之间的关系，为GD病寻找新的诊疗标志物。方法 收集GD病患者90例，采用放射免疫分析法分别检测其治疗前、治疗后以及治愈后β-EP、CGRP、NPY和甲状腺相关激素水平，比较治疗前、后β-EP、CGRP及NPY水平的变化情况；采用回归方法分析三者与甲状腺激素之间的关系。结果 治疗前、后的β-EP、CGRP及NPY水平变化明显，将治疗前、后与治愈后的数据之间进行两两比较，数据差异有统计学意义（P＜0.05）。随着病程由治疗前、治疗后向治愈的转归，β-EP对FT3的关系表现为先增强后减弱，对FT4、TSH为先减弱后增强；CGRP对于FT3、FT4的相互关系表现为先增强后减弱，对TSH为先减弱后增强，NPY对于FT3、FT4的相互关系表现为先增强后减弱，对TSH表现为先减弱后增强的变化趋势；在病程中CGRP、TSH与GD病严重程度呈现负相关（r=-0.933和-0.944，P＜0.05），而β-EP、NPY、FT3及FT4则与GD病严重程度表现为正相关（r=0.926，0.943及0.930，P＜0.05）。结论 β-EP、CGRP及NPY与GD疾病发展及其转归密切相关，有望成为新的诊断、疗效观察及预判治疗停药的参考指标。

格雷夫斯病；β-内啡肽；降钙素基因相关肽；神经肽Y；相关性

格雷夫斯病（Graves disease，GD）是弥漫性甲状腺肿大伴甲状腺激素分泌过多引发的器官特异性自身免疫性疾病[1]。甲状腺的功能主要受到下丘脑-垂体-甲状腺轴的调节[2]。然而，早在1992年AHREN[3]报道甲状腺滤泡细胞周围有肽能神经系统存在，但有关肽能神经是否调节甲状腺功能，与GD病的甲状腺相关激素之间关系的报道甚少。通过检测GD患者血浆中β-内啡肽（β-endorphin，β-EP）、降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）及神经肽Y（neuropeptide Y，NPY）水平，探讨三者与GD病及其与游离三碘甲状腺原氨酸（free three iodine thyroid gland，FT3）、游离甲状腺激素（free thyroid hormone，FT4）和促甲状腺激素（thyroid stimulating hormone，TSH）之间存在的关系，为GD病寻找疗效观察及预判停药的指标。

1 材料与方法

1.1 标本来源

选取2012年1月-2013年12月本院收治的GD病患者共90例。其中，男性29例，女性61例；平均（36.5±14.3）岁。将90例GD患者在未接受任何治疗前为治疗前组；将患者采用抗甲状腺药物甲硫咪唑治疗9个月后，高基础代谢明显下降，FT3、FT4恢复正常，TSH值水平异常为治疗后组；持续治疗1.5年后，所有甲亢临床体征消失，FT3、FT4及TSH恢复正常为治愈组。

1.2 仪器与方法

所有患者静脉空腹抽血2 ml，注入含有10%乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）和抑肽酶40μl的试管中混匀。4℃ 4 000 r/min离心10 min，分离血浆放置-60℃冰箱保存待检。采用放射免疫分析方法（radioimmunoassay，RIA）检测血浆β-EP、CGRP和NPY水平，试剂由北京尚柏生物医学技术有限公司提供，检测仪器为中国医科大中佳公司提供的GC-2010型放射免疫计数仪；采用全自动化学发光免疫分析法（chemiluminscence immunoassay，CLIA）检测FT3、FT4及TSH水平，仪器为ADVIA Centaur XP，试剂和仪器均由德国西门子公司配套提供；所有操作严格按照说明书进行。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 17.0统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，对3组数据做单因素方差分析，若存在差异则进一步用LSD法进行两两比较，P＜0.05为差异有统计学意义。各检测指标间进行线性回归分析，检测指标与疾病严重程度的关系做Spearman相关分析。

2 结果

2.1 3组的β-EP、CGRP和NPY水平变化

①β-EP。治愈组与治疗后比较，差异有统计学意义（t=24.314，P=0.000），指标降低，治愈组较治疗前组降低，差异有统计学意义（t=26.275，P=0.001），治疗后同样低于治疗前，两者差异有统计学意义（t= 18.236，P=0.000）；②CGRP。治愈组高于治疗后，差异有统计学意义（t=20.333，P=0.001），治愈组高于治疗前，差异有统计学意义（t=22.286，P=0.000），治疗后较治疗前升高，差异有统计学意义（t=17.384，P= 0.001）；③NPY。治愈组低于治疗后，差异有统计学意义（t=16.333，P=0.000），治愈组低于治疗前，差异有统计学意义（t=21.245，P=0.000），治疗后较治疗前下降，差异有统计学意义（t=16.884，P=0.001）。见表1。

2.2 β-EP、CGRP及NPY水平与 FT3、FT4和TSH之间的相关性

将治疗前、治疗后及治愈组中的β-EP、CGRP、NPY分别与各组间中的FT3、FT4、TSH进行线性回归分析，对其回归系数（b）进行比较发现，β-EP、CGRP在治疗前、治疗后以及痊愈组3个不同阶段中均与甲状腺激素存在一定的相关性（见表2）。从表中可以看出，β-EP与FT3、FT4的关系较为密切；CGRP仅与FT4关系紧密。

表1 3组CGRP、NPY水平的变化情况 （±s）

表1 3组CGRP、NPY水平的变化情况 （±s）

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表2 3组中β-EP、CGRP及NPY与FT3、FT4和TSH间回归分析结果

3 讨论

GD病是常见的内分泌疾病[4]，发病原因尚不完全清楚[5]。有研究报道[6]，甲状腺组织分布有多种肽能神经，β-EP、CGRP及NPY均属于肽能神经递质类[7-8]。目前，国内外研究神经肽能神经主要集中在神经系统和心血管系统[9-10]，有关甲状腺疾病方面，尤其在GD疾病中的作用研究甚少[11]。β-EP是促脂素氨基酸残端的61～91片段，主要存在垂体，在机体应激时分泌增加[12]；1983年ROSENFELD等[13]应用分子生物技术就发现一种感觉神经来源CGRP样物质，主要包括α-CGRP、β-CGRP和胰淀素亚单位，在人甲状腺、垂体中均含有丰富的表达。有报道[14]，CGRP对甲状腺髓样癌诊断有很好的敏感性和特异性；NPY是含有36个氨基酸的神经活性肽，参与多系统调节作用，主要由交感神经末梢释放，起着神经递质、神经调节及神经内分泌的作用[15]。

研究结果显示，治疗前和治疗后中的β-EP、NPY水平显著增高，CGRP水平显著降低与文献[16]报道一致。治疗后甲状腺相关激素恢复至正常水平时β-EP、CGRP及NPY依旧处于异常水平，其恢复速度慢于甲状腺相关激素，推测这可能是由于GD疾病对身体造成的伤害范围广泛性所致。因此，当FT3、和FT4恢复正常、临床症状基本消失时，β-EP、CGRP及NPY等指标仍处于异常水平。从临床实验观察来看，尽管可能存在许多因素可能影响这3个指标对GD疾病诊断的准确性，但是能较好地观察疾病治疗疗效和痊愈的判定，因此，应将β-EP、CGRP和NPY三者恢复至正常水平作为GD疾病痊愈判定、疗效观察的判定指标，尤其在指导停药方面更具参考价值。

随着病程的发展，β-EP、CGRP和NPY从治疗前转归到痊愈组对甲状腺激素的关系分别是：①β-EP对FT3、TSH变化的关系表现为先减弱后增强，对FT4则表现为先增强后减弱，其中对TSH的影响最为明显。可能是β-EP主要受到下丘脑--垂体前叶系统的分泌调节[17]，与TSH同属垂体前叶分泌，GD状态下机体免疫功能紊乱直接刺激β-EP的分泌，从而介导刺激对机体免疫反应性影响，当β-EP增高时明显抑制心血管的功能，降低血压、减慢心率，对抗体内过多的甲状腺素造成伤害维持机体内环境的稳定[18]；②CGRP与FT3、FT4变化的关系表现为持续减弱，对TSH则表现持续增强。CGRP对TSH影响最大，作用非常明显，FT3可能只在疾病末期发挥的作用较大，而FT4在末期发挥的作用非常小。CGRP属于辣椒素敏感感觉神经的重要肽类递质[19]，参与甲状腺分泌的调控，并随着患者心率不断加快、心率失常及心衰加重而表现为进行性下降，主要是CGRP通过调节细胞内Ca2+的内流增加而发挥作用，使得甲状腺细胞CGRP的分泌减少；同时CGRP可以影响免疫功能，与T淋巴细胞上CGRP受体结，可通过增加细胞内cAMP水平而抑制自然杀伤细胞（NK细胞）的活性导致GD易感性加强[20]；③NPY与于FT3、FT4的关系均表现为先减弱后增强，对TSH则表现为持续增强的变化规律。但对FT3、FT4影响不大，与TSH的影响产生巨大的反差。在治疗后其影响程度均逐渐减弱。表明NPY参与GD病发病的调节，可能是NPY调节神经内分泌系统，直接收缩血管，加强血管平滑肌对神经刺激，调节血液循环，影响激素分泌的生物学功能引起甲状腺激素分泌的调节改变的结果[21]。

在GD状态下，垂体前叶受到刺激β-EP的分泌，对抗甲状腺激素的伤害作用。机体通过血管收缩介质NPY的增多与血管舒张素介质CGRP的减少，和控制甲状腺激素进入血液循环，这是机体在病理过程中的自稳机制之一[11]。

总之，β-EP、CGRP和NPY在GD病过程中随病程和转归密切相关，可能成为GD病的疗效观察、痊愈停药判定的指标。但与甲状腺激素间相互影响关系的机制有待进一步研究。

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Change of β-EP,CGRP and NPY in plasma and relationship with thyroid hormone in patients with Graves's disease*

Pan Wang1,Song Liu1,Xia Wang1,Xiao-jia Cai1,Ju Wang1,Zhi-gang Jiang2
(1.Department of Nuclear Medicine,Zunyi Medical College Affiliated Hospital,Zunyi, Guizhou 563003,China;2.School of Public Health,Zunyi Medical College, Zunyi,Guizhou 563003,China)

Objective To investigate the changes of β-EP,CGRP and NPY in plasma of patients with Graves's disease (GD)and their relationship with the changes of thyroid hormones during the course of GD. Methods The levels of β-EP,CGRP,NPY and related thyroid hormones in plasma in 90 GD patients were detected by radioimmunoassay before treatment,one year after treatment and healing respectively.The changes of levels of β-EP,CGRP and NPY were compared,furthermore,the relationship between them and thyroid hormones were analyzed by regression.Results There were significant differences (P＜0.05)between different time points after compared levels of β-EP,CGRP and NPY.With the development of the disease,the impact extent of β-EP to FT3increased at first and then decreased,and that to FT4,TSH were converse;the impact extent of CGRP to FT3and FT4increased at first and then decreased,but that toTSH was converse.The im－pact extent of NPY to FT3,FT4showed increased at first and then decreased,and that to TSH was converse. CPRG and TSH were negatively correlated with the severity of GD disease (rs=-0.933 and-0.944,P＜0.05),and β-EP,NPY,FT3,FT4were positively correlated with that (rs=0.940,0.926,0.943 and 0.930,P＜0.05).Conclusions β-EP,CGRP and NPY are closely related to the development and prognosis of GD.They are expected to become a new reference index for diagnosis,curative effect observation and discontinuation of GD disease.

graves disease;β-endorphin;calcitonin gene-related peptide;neuropeptide Y;correlation

R581.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.05.008

1005-8982（2017）05-0038-04

2016-05-03

贵州省科学技术厅联合基金（No：黔科合LH字【2015】7470）

蒋智钢，E-mail：zhigangjiang@zmc.edu.cn