牛胚胎的解冻、鉴定与移植

彭晓宇

（ 山东省荣成市崂山畜牧兽医站，山东 荣成 264300）

牛胚胎的解冻、鉴定与移植

彭晓宇

（ 山东省荣成市崂山畜牧兽医站，山东 荣成 264300）

1 受体牛的选择与处理

牛胚胎移植的妊娠率与受体的选择密切相关。建议选择3~8岁、健康无病、体格较大、膘度适中的受体牛。健康的身体、无菌的子宫环境是进行胚胎移植的基础。繁殖性能正常，至少要有两次以上且自然发情记录。泌乳良好，无流产、难产史，杜绝使用两次人工受精未孕的牛。这是胚胎能否在子宫附植的关键。受体牛要精心饲养，合理饲喂，草料和饮水要新鲜干净，补充必要的食盐和添加剂。圈舍清洁干净，防止过度拥挤，适当运动，细心观察。在移植前后防止各种应激反应。良好的饲养环境和体况是保证胚胎移植后胎儿发育的基础。

受体牛的同期发情处理。使用新西兰产品CIDR阴道栓，同时每头牛肌注VA、VD、VE各1 0 mL，9 d后注射氯前列烯醇0.6 mL，同时再注射VA、VD、VE各10 mL·头-1，第12天后抽栓，1~2 d后观察牛的发情情况，2~3 d后受体牛几乎全部发情。对发情牛需做直肠检查，以确认卵泡，若在发情后1.5 d以后排卵的不能用作受体牛。

2 冷冻胚胎的解冻

三步平衡法冻胚的解冻。将10%、6%和3%甘油的PBS（培养液）保存液，滤器灭菌，分装在小培养皿内，第1杯为含10%甘油的PBS保存液，第2杯为含6%甘油的PBS保存液，第3杯为含3%甘油的PBS保存液，第4杯为不含甘油的PBS保存液。胚胎从液氮中取出在3 s内投入38℃水浴浸10 s。 用棉球粘70%酒精对塑料吸管和剪刀刃进行消毒，剪去棉塞端，与带有空气的1 mL注射器连接上。再剪去吸管的另一端，在室温下将胚胎推入10%甘油和0.3 mol·L-1蔗糖PBS保存液中，放置5 min，以后陆续移入6%和3%甘油蔗糖的PBS保存液中，各放置5 min，最后移至不含甘油的PBS保存液中镜检待用。

3 复苏后胚胎的鉴定

胚胎质量与胚胎复苏正相关。在100~200倍实体解剖显微镜下观察受精卵的形态、色调、分裂球的大小、均匀度、细胞的密度、与透明带的间隙以及变性情况等。凡卵子的卵黄未形成分裂球及细胞团的，均列为未受精卵。通常受精后6~8 d非手术回收的正常受精卵（桑椹胚、致密桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩大囊胚、孵育胚）发育情况要进行仔细鉴定。凡在发情后6~8 d回收的16细胞以下的受精卵均应列为非正常发育卵，不能用于移植。

4 胚胎移植

胚胎可在回收后立即移植给受体，也可冷冻保存，以后再移植。IETS的资料表明，回收的胚胎约有一半是以鲜胚移植，另一半则冷冻保存，但冷冻保存的胚胎大多数未解冻移植，可能是因为与随后的后代相比，这些胚胎的遗传价值降低，因此没有必要再进行移植。

一直到20世纪70年代中期，胚胎多通过腹中线切口，或后来通过腹胁部切口，通过手术法移植到受体子宫角尖端。这些方法，尤其是腹中部切口法，比较麻烦，而且动物也得承受较大的手术风险。此后，几乎所有的牛胚胎都是采用非手术法，经子宫颈进行移植，其妊娠率与手术法移植后的相似，为50%~60%。

根据IETS胚胎移植操作手册，胚胎在移植前，应先洗涤10次，之后将每个胚胎装入0.25 mL的无菌人工授精细管（IMV）中，再将装有胚胎的细管置入普通的人工授精枪（卡苏枪）或专为胚胎移植设计的由普通输精导管改制的导管中。

受体的发情周期必须要与供体的同步化，进行胚胎移植之前应确保受体的发情发生在供体发情时间的±24 h之内，并且存在有功能性黄体。与发情的同步化相比，受体与胚胎发育阶段的同步化是一个更为可靠的参数。例如，桑葚胚应该在受体发情周期的第6天移植，而囊胚则应在第7天移植给受体。

受体可采用硬膜外麻醉，而且与供体一样，应当仔细清洗干净其会阴部。在牛，为了阻止溶黄体机制的发生，胚胎常被移植在有黄体发育一侧的子宫角。操作人员先把带有薄塑料鞘套的胚胎移植导管，采用直肠把握法经阴道小心插入子宫角中部，然后把胚胎置于此。采用该技术移植胚胎时，应轻轻地将导管推入子宫腔，并轻轻将子宫角牵拉向导管。应避免引起子宫内膜损伤出血。就妊娠率而言（平均50%~70%），不同的操作人员、不同的养殖场之间差异很大，特别是胚胎质量影响更大，优质和良好的胚胎移植后的妊娠率最高（70%~80%）。

胚胎移植后超过妊娠45 d的妊娠失败率大约为5%，这与人工授精的结果非常接近，劣质胚胎及冷冻胚胎的妊娠失败率更高。

S823

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1001-0084（2017）11-0049-01

2017-10-17

彭晓宇（1989-）女，山东荣成人，初级畜牧师，主要从事畜牧工作。