保存期末红细胞冰冻保存效果体外评估

黄辉，邹丽敏，杨南，杜忻

(南昌市血站，江西南昌330025)

保存期末红细胞冰冻保存效果体外评估

黄辉，邹丽敏，杨南，杜忻

(南昌市血站，江西南昌330025)

目的探讨应用冰冻技术将离体后较长时间的红细胞的保存期延长至数年，确保解冻后红细胞的质量，提高输血的应急能力。方法收集血站2015年10月至2016年2月CPD保存液保存了34d的红细胞（2u/袋）30袋，利用全自动细胞处理系统(Haemonetics ACP215)对红细胞进行冰冻及解冻复苏操作，比较产品与《全血与成分血质量要求》的差异性。结果利用全自动细胞处理系统(Haemonetics ACP215)对红细胞进行冰冻及解冻操作，终产品在外观、容量、血红蛋白含量、游离Hb、甘油残留量、白细胞残留量和细菌培养结果等方面与标准无显著差异。结论无论从延长红细胞保存时间，还是提高输血应急能力，冰冻红细胞都起到了实效。

全自动细胞处理系统;保存期末；冰冻保存;解冻复苏；质量评价

正常红细胞的保存期在35d以内，应用冰冻技术可以将红细胞的保存期延长到数个月甚至数年[1]。但目前该技术仅限于稀有血型的保存，且要求在离体后6d内的血液进行冰冻。我们研究利用全自动细胞处理系统(Haemonetics ACP215)对保存期末的普通血型红细胞进行冰冻保存，检测红细胞解冻后的质量指标，从而保证在延长红细胞保存时间的情况下制备出符合国家质量要求的冰冻及解冻去甘油红细胞，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 血液来源滤白悬浮红细胞30袋(2u/袋)，来自于南昌地区无偿献血中健康的Rh阳性献血员30人，按献血规范要求完成血液的检测与入库。将采集到的红细胞用CPD保存液悬浮至34d时制成冰冻红细胞，保存360d以内，解冻进行质量评估。

1.2 主要材料57%甘油(160ml，北京博德桑特输血器材公司)、9%NaCl(80ml，山东威高集团医用高分子制品股份有限公司)，0.9%NaCl(1000ml，山东威高集团医用高分子制品股份有限公司)，转移袋(1000ml，四川南格尔生物医学股份有限公司)，全自动血细胞处理系统配套的甘油化耗材(REF 225)和去甘油化耗材(REF 236)(美国血液技术公司)。所有材料均在有效期内使用。

1.3 主要设备全自动细胞处理系统(Haemonetics ACP215)(美国血液技术公司)，-80℃三洋冰箱M DF-2136(日本三洋公司)，CRYOFUGE6000i离心机(德国赛黙飞世尔科技公司)，HTR-Ⅱ冰冻血浆融化箱(潍坊汉唐生物工程有限公司)，CompoDock无菌接口机(费森尤斯卡比)，COULTER Ac.T 5diff血液分析仪（美国），BD BACTEC 9120全自动血液培养仪（美国），752紫外可见分光光度计（上海）。

1.4 实验步骤

1.4.1 冰冻红细胞制备将保存期末的滤白悬浮红细胞的血袋与1000ml转移袋用无菌接管机相连接，然后将血液转移至空袋中。将滤白悬浮红细胞袋与ACP-215配套的REF 225（甘油化耗材）用无菌接管机相连接。耗材REF 225另一端与复方甘油袋穿刺连接。按照ACP-215设备要求安装。以先慢后快的速度滴入320ml甘油保存液入2U滤白悬浮红细胞，同时水平匀速振荡，滴完全部的甘油保存液后，水平静置血袋30min。2450r/min 4℃离心10min，去上清，甘油化细胞完成。加贴标签，登记入库，放置-80℃以下冰箱保存。

1.4.2 低温保存保存于-80℃冰箱中，冰箱设有温度监控器，24h实时监控保证温度在-80℃以下。

1.4.3 解冻复苏甘油化细胞从冰箱取出后，直接放入37～40℃循环水浴中融化。称解冻红细胞重量(净重)。将甘油化细胞与去甘油化耗材(REF 236)连接。安装到ACP-215机器上。滴加9%NaCl 160ml（2U），50ml/min，同时摇匀，水平静置1min，再加0.9%NaCl 1600ml，洗涤7次。让红细胞逆流入输血管内，热合三段血辫做交叉配血标本。血袋贴上标签，登记入库，放置4℃冰箱保存好24h内供临床输用。

1.4.4 质量检测按COULTER Ac.T 5diff血液分析仪说明书要求记录红细胞Hb和白细胞残留量；按752紫外可见分光光度计说明书要求检测甘油残余量。

2 结果

冰冻解冻去甘油红细胞30袋(2u/袋)检测结果见表1。

3 讨论

正常采集的红细胞用CPD保养液悬浮仅仅保存35d[2，3]。采用冰冻红细胞保存技术后，血液的保存期限大幅延长[4]。可以将平时采集到的富余血液冰冻保存下来；遇到患者需要紧急用血时，将适合的血液解冻提供给临床，缓解了旺季采血过多造成血液过期报废、淡季缺血影响临床输血治疗的问题，保障临床血液供应。冰冻红细胞在解冻洗涤过程中去除了白细胞的数量，因而大大减少了因输同种异体血引起的免疫反应及白细胞相关性病毒传播的发生率，并且也减少了输血免疫抑制的发生。在条件允许的情况下，可在红细胞冰冻保存6个月后对献血者进行输血传播疾病的复检以规避经血传播疾病的发生。

同时，去甘油洗涤也去除了细胞代谢产物及抗凝剂，大量输注亦不会出现酸中毒及高钾血症，同时洗涤减少了引起患者产生免疫调节效应的生物活性物质，因此减少了输血不良反应[5，6]。

使用ACP215全自动细胞处理系统制备的冰冻红细胞，在保存期限360d以内解冻复苏，结果显示，复苏后每袋成品血的红细胞回收率，游离血红蛋白浓度，溶血率，甘油残余量，细菌培养试验等质控指标[7-10]均符合《全血及成分血质量要求》[11]，没有出现极值不符合《全血及成分血质量要求》的情况。

与国内外多家血液机构用ACP 215全自动细胞处理系统进行冰冻及解冻去甘油红细胞的制备效果相比，结果一致。ACP 215全自动细胞处理系统可以实现除更换液体外的冰冻红细胞的全自动制备[12，13]，最大程度减少人为差错事故的发生，保证了产品质量；减少了劳动强度，可做到一人多机同时操作。克服了手工洗涤操作步骤多、时间长、效率低、人为因素干扰大等诸多问题。

结果表明，相比于正常保存的滤白悬浮红细胞，冰冻解冻去甘油红细胞在各项指标上均与之相似，能起到相似的临床作用。但因去甘油过程会损失部分红细胞，一般认为每提升Hb10g/L需要输注2或3个单位冰冻解冻去甘油红细胞[14，15]。

本次冰冻红细胞保存效果的体外评估效果良好，所有解冻红细胞质量评估均符合全血及成分血质量要求。下一步我们将与临床合作，向医院临床提供冰冻解冻去甘油红细胞，根据临床反馈评估冰冻解冻去甘油红细胞的临床效果，进一步推动冰冻解冻去甘油红细胞的临床应用。

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R457.1+2

A

1674-1129(2017)03-0449-03

2017-04-01；

2017-05-11)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.055