五指毛桃与黄芪提取物对免疫抑制小鼠细胞免疫的影响

张志超 刘江红 潘远安

深圳市龙华新区中心医院药剂科，广东 深圳 518000

五指毛桃与黄芪提取物对免疫抑制小鼠细胞免疫的影响

张志超 刘江红 潘远安

深圳市龙华新区中心医院药剂科，广东 深圳 518000

目的：探讨五指毛桃与黄芪提取物对免疫抑制小鼠细胞免疫的影响。方法：取100只小鼠进行研究，随机分为正常对照组、阳性对照组(20mg/kg左旋咪唑)、五指毛桃提取物组、黄芪提取物组、环磷酰胺模型组，每组20只，经腹部注射环磷酰胺制备免疫功能低下小鼠模型，经连续灌胃给药2周后，对各组小鼠的T淋巴细胞亚群变化、脾脏指数、胸腺指数、IL-1及INF-y进行观察。结果：黄芪提取物组与五指毛桃组的胸腺指数及脾脏指数明显高于环磷酰胺组，差异有统计学意义(P<0.05)；黄芪提取物组与五指毛桃组的T细胞亚群数量及IL-1与INF-y含量显著较环磷酰胺组高，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：五指毛桃与黄其提取物均能提高免疫抑制小鼠细胞免疫功能。

黄芪；五指毛桃；细胞免疫；免疫抑制

黄芪为常用补气药物，具有悠久的应用历史。黄芪单体具有抗炎、免疫调节等药理作用[1]。五指毛桃被称为南芪，其为常用的黄芪替代药物。有学者认为[2]，五指毛桃的补气扶正作用与黄芪相近，适合南方人体质。但是对于五指毛桃的免疫调节机制尚无确切定论。本研究对免疫抑制小鼠分别应用黄芪提取物与五指毛桃提取物，观察其免疫指标变化。

1 仪器与材料

1.1 试验动物 选择健康昆明种小鼠100只，雌雄各半，体质量为18～22g。中山大学实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(粤)2013-0001。

1.2 材料 黄芪与五指毛桃干燥药材(深圳市龙华新区中心医院药剂科提供)；环磷酰胺(国药准字H44020383，广州白云山光华制药股份有限公司)；盐酸左旋咪唑片(国药准字H44020759，广东华南药业集团有限公司)；小鼠白细胞介素1β(IL-1)、Hyclone改良型RPMI-1640培养基、FT-TC-抗小鼠CD3、PE/Cy5-小鼠CD4、PE-抗小鼠CD8、II型干扰素(INF-y)ELISA试剂等试剂均购自深圳达科为生物技术有限公司。

1.3 仪器 AF2-0502-U超纯水机(艾科浦公司)；Epics XL流式细胞仪(美国贝克曼COULTER公司)；CO2细胞培养箱(日本SANYO公司)。

2 方法

2.1 药物的制备 取黄芪与五指毛桃干燥药材300g，以10倍量蒸馏水浸泡1.5h，加热煮沸1.5h，滤取药液；再加8倍量水，煮沸1h，第三次煮沸0.5h。合并三次滤物，将药物浓缩为4g生药/mL。

2.2 模型的制备与分组 100只小鼠随机分为正常对照组、阳性对照组、环磷酰胺组、五指毛桃提取物组与黄芪提取物组，每组20只。除对照组外，每组均于腹部注射环磷酰胺，40～60mg/kg，连续1周，制备免疫抑制小鼠。五指毛桃组与黄芪组均给予中等且相同剂量，以4.4g/kg给小鼠灌胃，阳性对照组给予20mg/kg左旋咪唑，正常对照组给予生理盐水，1次/d，连续用药2周。

2.3 评价指标

2.3.1 脾脏指数与胸腺指数 第14天给药24h后，将所有小鼠摘眼球放血脱颈椎处死，称量体重。取出脾脏与胸腺，采取4℃生理盐水冲洗，滤纸吸干后称重，胸腺或脾脏质量与小鼠体重之比作为胸腺指数或脾脏指数。

2.3.2 T淋巴细胞亚群比例测定 制备脾细胞悬液，细胞浓度1×107个/mL，100μL细胞混悬液+FTTC-抗小鼠CD3 1μL+PE/Cy5-小鼠CD4 1.25μL+PE-抗小鼠CD8 1.25μL。洗涤后离心，取沉淀细胞，加入500μLPBS，以流式细胞仪进行T细胞亚群数量检测。

2.3.3 血清IL-1与INF-y含量测定 取各组小鼠眼眶静脉血，静置3h，使血清析出，以1500r/离心10min，取血清。根据试剂盒说明书对IL-1与INF-y含量进行检测。

2.4 统计学分析 数据采用SPSS20.0软件进行统计分析，用均数±标准差表示，计量资料以t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 脾脏指数与胸腺指数 黄芪提取物组与五指毛桃组的胸腺指数及脾脏指数明显高于环磷酰胺组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

3.2 T细胞亚群比较 黄芪提取物组与五指毛桃组的T细胞亚群数量显著较环磷酰胺组高，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

3.3 IL-1与INF-y含量比较 五指毛桃提取物组与黄芪提取物组的IL-1与INF-y含量均高于环磷酰胺组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表1 各组小鼠脾脏指数与胸腺指数比较±s)

注：与环磷酰胺组比较，*P<0.05。

表2 各组小鼠的T细胞亚群比较 ±s)

注：与环磷酰胺组比较，*P<0.05。

表3 各组小鼠的IL-1与INF-y水平比较

注：与环磷酰胺组比较，*P<0.05。

4 讨论

免疫系统是机体内外环境变化的适应及反应系统，与机体老化过程呈密切相关性。研究发现[3]，免疫功能下降会加速机体衰老，衰老过程中，免疫功能会逐渐衰退，以细胞免疫功能下降最为明显。因此，提高机体免疫功能，延缓人体衰老，成为许多学者研究的主要方向。

研究表明[4]免疫老化核心与淋巴细胞数量减少、分泌功能下降、淋巴细胞凋亡异常等相关。而免疫细胞的细胞及分子水平具有可调控性，因此，调节淋巴细胞活性、增强细胞免疫功能，重建衰老过程的淋巴细胞免疫稳态，可能成为延缓衰老的有效方法[5]。中药具有多靶点、多途径、多器官调控免疫机制效果，将其作为免疫调节剂具有一定优势。黄芪是最常用的扶正补益中药，经药理研究证实[6]，黄芪具有抗衰老、免疫调节等作用。五指毛桃是华南地区常用药物，其作用与黄芪相近。研究发现[7]，五指毛桃可通过提高机体抗氧化能力而产生抗衰老效果，也具有免疫调节作用。

本研究通过对小鼠注射环磷酰胺制备免疫抑制小鼠，环磷酰胺是细胞毒性烷化剂，可抑制DNA合成，本研究除对照组外所有小鼠经注射环磷酰胺后均造模成功。脾脏与胸腺为外周免疫器官，机体免疫分化与增值，均会对脾脏及胸腺质量造成一定影响，通过胸腺与脾脏指数可判断机体免疫状态[8]。研究显示，五指毛桃提取物组与黄芪提取物组小鼠脾脏指数及胸腺指数明显较环磷酰胺组高(P<0.05)，提示，五指毛桃与黄芪均有免疫增强作用，可保护免疫器官。

巨噬细胞可分泌IL-1，而IL-1以自分泌或旁分泌形式作用于巨噬细胞，参与固有免疫应答过程[9]。对血清IL-1含量进行检测，可有效反映机体免疫功能状态。研究发现，五指毛桃提取物组与黄芪提取物组的IL-1水平明显较环磷酰胺组高(P<0.05)，可见，五指毛桃与黄芪提取物能对巨噬细胞分泌功能产生影响，也能增强机体固有免疫应答能力。

T淋巴细胞亚群细胞包括CD4+与CD8+，其中CD4+可通过激活自身分泌趋化因子及细胞因子，从而增强机体免疫功能；CD8+可直接杀伤靶抗原，作用于肿瘤细胞与感染细胞，是机体早期免疫反应细胞之一[10]。INF-y为Th1淋巴细胞亚群的细胞，可促进CD8+T淋巴细胞增殖与分化，提高机体免疫功能。研究显示，五指毛桃与黄芪提取物组的INF-y与CD8+、CD4+、CD4+/CD8+均高于环磷酰胺组(P<0.05)，表明五指毛桃与黄芪提取物可增强小鼠T淋巴细胞亚群数量，从而恢复机体免疫平衡。

综合上述，黄芪与五指毛桃提取物均可明显提高小鼠免疫功能，但是对于五指毛桃是否在免疫调节方面能替代黄芪，尚需要更多研究进一步探讨。

[1]张文君,程卫东,李纬，等.红芪替换玉屏风散中黄芪对SAMP8小鼠抗免疫老化作用的比较[J].中成药,2016,38(4):920-924.

[2] 杨杰,卫东锋,王文潇，等.五指毛桃药物血清对老龄小鼠脾淋巴细胞氧化损伤的影响[J].中国中医药信息杂志,2016,23(1):52-55.

[3] 赵晓峰,何海根,章建萍，等.黄芪对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响[J].浙江中医药大学学报,2012,36(6):749-751.

[4] 吴骁,王光,李彦，等.黄芪注射液对D-半乳糖所致衰老小鼠的免疫、衰老和血脂指标的影响[J].实验动物科学,2011,28(6):7-9.

[5] 张李峰,程卫东,桂曼曼，等.红芪替换玉屏风口服液中的黄芪后对免疫抑制小鼠细胞免疫作用的比较研究[J].中药材,2012,35(2):269-273.

[6] 王墅塾,王梓楠,赵自明，等.黄芪注射液对免疫功能低下小鼠脾淋巴细胞的影响[J].动物医学进展,2014,35(4):63-66.

[7] 刘文啟,严华,李韦，等.五指毛桃生药学研究[J].中草药,2014,45(7):1011-1015.

[8] 周建辉,张耀锋.研究五指毛桃药理作用并与黄芪的益气作用相对比[J].中医临床研究,2015,7(33):145-147.

[9] 郑蓉蓉,轧霁,王文婧，等.五指毛桃的化学成分研究[J].中国中药杂志,2013,38(21):3696-3701.

[10] 冯劲立,李想.五指毛桃对阿尔茨海默病小鼠学习记忆功能及过氧化损伤的影响[J].湖南中医药大学学报,2015,35(9):31-32,69.

龙华新区科技计划项目(NO：20160523A1030149)。

张志超(1980-)，男，汉族，本科，主管药师，研究方向为药学。 E-mail:390605928@qq.com

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1007-8517(2017)05-0058-02

2016-12-22 编辑：程鹏飞)