痛风清消颗粒急性毒性实验研究※

李华南 陈 浩* 顾 兵 王 力 涂 宏 邓运明

（1江西中医药大学附属医院骨伤三科，南昌330006；2江西科技师范大学生命科学学院，南昌330013）

痛风清消颗粒急性毒性实验研究※

李华南1陈 浩1*顾 兵2王 力1涂 宏1邓运明1

（1江西中医药大学附属医院骨伤三科，南昌330006；2江西科技师范大学生命科学学院，南昌330013）

目的观察痛风清消颗粒的急性毒性反应，评价其临床用药的安全性。方法采用清洁级昆明种小鼠40只，随机分为2组，分别给予痛风清消颗粒混悬液和生理盐水0.78 ml/次灌胃，24小时内3次，连续观察小鼠的体重、饮食、毒性反应和死亡情况14天。结果2组小鼠在第1天、第7天和第14天的体重无显著性差异（P＞0.05），小鼠一次性口服痛风清消颗粒的最大耐受量为86.88 g durg·kg-1，为成人每日临床常用量的253倍。结论痛风清消颗粒口服临床常用剂量安全。

痛风清消颗粒；急性毒性实验；最大耐受量；中成药疗法；痹证

痛风清消汤[1]是全国第四、五批名老中医药专家学术思想继承工作指导老师、江西中医药大学附属医院邓运明教授、主任中医师治疗急性痛风性关节炎的经验方，具有健脾益气、清热化湿的功效[2-5]。该方性味平和，无毒副作用，经长期临床验证提示疗效确切，患者依从性良好，接受度高，适宜长期口服，可避免西药带来的胃肠道反应及肝肾功能损害。汤剂在使用过程中存在临时煎煮、携带不便、服用体积大、口感不好、不能久置等缺点，而颗粒剂吸收快、显效迅速、加入矫味剂，掩盖了药物的苦味，便于服用、便于携带、易贮存保管。颗粒制备工艺简单，有效成分损失少，既能保持中医药传统用药特色，又能最大限度提取和保留处方中的有效成分，发挥有效成分的综合治疗作用，确保临床疗效。故2011年起，我院在固定处方的基础上通过剂型改革，将汤剂改进为颗粒剂型[6]，建立稳定、可控的质量标准，研制开发院内制剂服务临床患者。为保证临床用药的安全性，并为临床提供实验依据，本实验通过采用最大用药量实验，考查小鼠灌服痛风清消颗粒的急性毒性实验，评估其制剂改造后的临床应用风险，现将结果报道如下：

1 材料与方法

1.1 实验动物采用SPF级昆明种健康小鼠，体重18～22（20±2）g，雌雄各半，由江西中医药大学实验动物科技中心提供，动物生产许可证号：SCXK（赣）2005-0001。

1.2 药品制备痛风清消颗粒均采用道地药材制备，由江西中医药大学附属医院药剂科采购并由制剂室按规定流程生产提供，生产批号20110706，用乳钵磨细后蒸馏水溶化，配成浓度为0.417 g·ml-1、颗粒密度为4.73 g·ml-1(16.30 g·kg-1，相当生药量86.88 g durg·kg-1)的混悬液。

1.3 实验方法

1.3.1 预实验取SPF级健康昆明种小鼠10只，每笼5只小鼠封闭饲养，雌雄分笼，给药前禁食24 h，痛风清消颗粒混悬液0.78 ml/次灌胃，24小时内3次，观察小鼠的外观、精神状态、行为、饮食、呼吸、排泄物、分泌物、体重等情况，连续纪录72 h内的动物死亡数及毒性反应。药后观察小鼠一般情况，结果见小鼠外观、精神状态、行为、饮食、呼吸、排泄物、分泌物、体重均无明显异常，72 h内10只小鼠无一死亡，也无明显中毒反应，提示本品无法测出LD50，故采用最大耐受量实验[7]。

1.3.2 最大耐受量（MTD）测定将40只SPF级昆明种小鼠随机分为药物组和对照组。每笼5只小鼠封闭饲养，雌雄分笼，自由饮水，投喂颗粒饲料，自由摄食，实验前适应性喂养3天，室温20～25℃，相对湿度40%～50%。将小鼠禁食24 h后，次日给予痛风清消颗粒混悬液或生理盐水0.78 ml/次灌胃，24小时内3次，观察小鼠的外观、精神状态、行为、饮食、呼吸、排泄物、分泌物、体重等情况，连续纪录14天内的动物死亡数及毒性反应。试验结束处死解剖动物，肉眼进行观察小鼠主要内脏变化[7]。

1.4 统计学方法计量资料均以（x±s）表示，组间比较采用成组t检验，所有数据均采用SPSS18.0进行统计分析

2 结果

2.1 一般情况药物组灌胃后，小鼠活动减少，约1小时左右逐渐好转，第二天排出深褐色、稀薄粪便，污染肛门周围。自第三日起，粪便包括形状、颜色等性状均恢复正常，鼻、眼、口腔无异常分泌物，直至实验结束。14天内20只小鼠无死亡及明显中毒反应，大体解剖肉眼观察小鼠无异常变化。

对照组灌胃后，第1、7、14天小鼠外观、精神状态、行为、饮食、呼吸、排泄物、分泌物无异常变化，直至实验结束。14天内20只小鼠无死亡及中毒反应，大体解剖肉眼观察小鼠无异常变化。

2.2 体重变化两组小鼠体重变化情况见下表。

表1 痛风清消颗粒最大给药量对小鼠体重的影响（x±s）

▲在第1、7、14天两组小鼠间体重经统计学检验无显著性差异（P＞0.05）。

2.3 小鼠大体解剖情况14天后，40只小鼠无一出现无明显中毒反应或死亡。与对照组相比，药物组小鼠主要脏器色泽形态未见异常，胸、腹腔未见积液，胃肠黏膜颜色正常，无出血点或溃疡。

3 计算方法

按动物表面积比率换算等效剂量换算（20 g小鼠∶70 Kg成人=387.9∶1），常温下配制的痛风清消颗粒最高浓度为0.417 g·ml-1(16.30 g durg·kg-1，相当生药量86.88 g durg·kg-1)，颗粒密度4.73 g·ml-1，20 g小鼠最大灌胃容量0.78 ml计算小鼠最大给药剂量：4.73×0.78×0.02-1=207.87 g durg·kg-1。按动物表面积比率换算等效剂量换算，折算70kg成人最大给药量为207.87×0.02×387.9=1612.66g·70kg-1，相当生药剂量7579.5 g×70 Kg-1。以成人每日口服痛风清消颗粒生药剂量30 g×70 kg-1计算，小鼠一次口服痛风颗粒为成人每日临床常用量的253倍：7579.5·30-1=253倍。

4 结论

痛风是因机体嘌呤代谢障碍而引起的血液内尿酸水平升高导致尿酸盐结晶析出沉积于关节的一种代谢性疾病。急性痛风性关节炎发病部位多以第一跖趾及踇趾关节多见[8]。目前临床治疗用药有NASIDs、秋水仙碱、糖皮质激素和人抗白介素-1β单克隆抗体等[9-11]。长期应用此类药物有可胃肠刺激、过敏性药疹和骨髓抑制等副作用，故临床接受度有限，患者依从性低，常常转而求助中医。《素问·痹论》曰：“风寒湿三气杂至，合而为痹也……其热者，阳气多，阴气少，病气胜，阳遭阴，故为痹热”[12]。元代朱丹溪首创“痛风”病名[13]，历代医家多将急性痛风性关节炎归于“痹证”范畴，临床主要表现为“湿热痹症”。邓运明教授认为痛风性关节炎的病因病机为脾失健运，湿热痹阻，经脉瘀滞，治疗宜补气健脾、清热利湿、通络止痛。四妙散原载于清代·张秉成《成方便读》，由元代朱丹溪所设二妙丸（苍术、黄柏）加薏苡仁、牛膝组成，具有清热利湿的作用。邓运明教授遵“四妙散”意，总结近40年临床经验，立方“痛风清消汤”用于治疗急性痛风性关节炎，经多年临床检验，其疗效好、安全性高。全方药用：苍术、白术、黄柏、薏苡仁、川牛膝、金钱草、车前草、青风藤、山慈菇、蒲公英、白豆蔻、徐长卿、土茯苓、重楼、萆薢等。方中白苍二术补气健脾、燥湿利水共为君，黄柏清热燥湿、泻火解毒；薏苡仁健脾渗湿、清热排毒、除痹止泻；白豆蔻化湿行气、温中散寒；川牛膝补肝益肾、强筋健骨、活血化瘀、利尿通淋、引药下行，上四药共为臣，助二术健脾渗湿。金钱草利水通淋、清热消肿；车前草清热利水；重楼、蒲公英清热解毒、消肿止痛、利尿通淋；土茯苓祛风胜湿；萆薢泌清别浊、祛风胜湿；徐长卿活血祛风；山慈菇、青风藤清热利湿，共奏有健脾益气，清热化湿之功效。本实验按照现代药理毒理实验的要求，探索了痛风清消颗粒对小鼠的急性毒性作用。结果表明小鼠一次性灌服痛风清消颗粒，未测出LD50，最大耐受量为86.88 g durg·kg-1，为成人每日临床常用量的253倍，表明该药对小鼠无明显急性毒性反应，安全可靠，口服痛风清消颗粒临床常用剂量是安全的。根据统计学Wright法则，有99.99%以上的把握证明，昆明种小鼠口服给药的LD50大于86.889 durg·kg-1，证明痛风清消颗粒以常用剂量口服，符合药品急性毒性要求。本药乃口服制剂，不作注射给药，故未作其它途径给药的LD50测定。至于痛风清消颗粒的口服蓄积毒性及长期毒性，有待进一步研究。

[1]李华南.痛风清消汤[N].中国中医药报，2013-09-02，4.

[2]李华南，刘峰，涂宏，等.邓运明辨治痛风性关节炎经验[J].广州中医药大学学报，2013，30(11):922-924.

[3]李华南，刘峰，涂宏，等.邓运明教授从脾胃辨证论治痛风经验[J].南京中医药大学学报，2014，30(2):180-182.

[4]李华南，吴谋建，洪海东.邓运明教授治未病学术思想初探[J].中国中医药现代远程教育，2014，12(8)：26-28.

[5]涂宏，罗讯，李华南，等.邓运明教授养生学术思想初探[J].中国中医药现代远程教育，2015，13(1):20-22.

[6]李华南，吴谋建，刘峰，等.痛风清消颗粒治疗湿热蕴结型急性痛风性关节炎的临床观察[J].中国中医药现代远程教育，2014，12(18):11-13.

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[13]元·朱震亨.格致余论[M].上海:上海人民出版社/迪志文化有限公司，2005:24.

Experimental Study on Acute Toxicity of Tongfeng Qingxiao Granule

LI Huanan1,CHEN Hao1,GU Bing2,WANG Li1,TU Hong1,DENG Yunming1
(1.Department of Orthopedics and Traumatology,the Affiliated Hospital of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330006,China; 2.College of Life Science,Jiangxi Science＆Technology Normal University,Nanchang 330013,China)

ObjectiveTo evaluate the acute toxicity of Tongfeng Qingxiao granule.MethodsThe 40 SPF Kun-ming mice were intragastrically administrated with 0.78ml mixed suspension of Tongfeng Qingxiao granule or normal saline,respectively,three times in 24 hours,and the weight,diet,toxic reaction and death of mice for 14 days were constantly observed.ResultsThere were no significant differences between two groups in the body weight of mice in 1st,7th and 14th day(P＞0.05).The maximum tolerated dose (MTD)of Tongfeng Qingxiao granule of mice is 86.88g durg·kg-1which is 253 times of clinical adult daily dose.ConclusionTongfeng Qingxiao granule is safe in the usual clinical dose.

Tongfeng Qingxiao granule;acute toxicity;maximum tolerated dose;therapy of Chinese patent drug;bi syndrome

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.06.059

1672-2779（2017）-06-0132-02

：张文娟本文校对：万小明

2016-11-09）

国家中医药管理局全国名老中医药专家传承工作室建设项目【No：国中医药人教发2001(41)号】；江西省科技厅科技支撑计划项目【No：20142BBG70084】；江西省卫计委中医药科研项目【No：2013B039】

*通讯作者：93133967@qq.com