核桃青皮不同溶剂提取物对烟青虫的防治效果研究

何念武++刘晓阳++李堆淑++任道远++黄金辉

摘要 采用水、乙醇、氯仿、乙酸乙酯及乙醚5种不同极性的溶剂，利用超声波辅助提取法从核桃青皮中提取有效成分，继而研究其对烟青虫的毒杀和拒食活性。结果表明：5种提取物均对烟青虫具有毒杀作用，且呈现良好的剂量效应关系，不同提取物、不同浓度都会影响烟青虫的毒杀活性和拒食活性。5种提取物对烟青虫的杀虫活性顺序依次为乙酸乙酯提取物>氯仿提取物>乙醚提取物>乙醇提取物>水提取物。由此可见，核桃青皮不同溶剂提取物对烟青虫具有一定的毒杀作用，具有开发成生物农药的潜力。

关键词 核桃青皮；提取物；烟青虫；毒杀活性；拒食活性

中图分类号 S433；S481+.9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）22-0109-02

Abstract Using water，ethanol，chloroform，ethyl acetate and ethyl ether five different polar solvents，effective components from walnut peel were extracted by ultrasonic extraction，and then the tobacco budworm poison and antifeedant activity were studied.The results showed that five kinds of extracts had toxic effect on tobacco budworm，and showed a good dose-response relationship，different extracts of different concentrations would affect the tobacco budworm toxicity and antifeedant activity.The order of insecticidal activity of five kinds of extracts to the tobacco budworm was ethyl acetate extract > chloroform extract > ethyl ether extract > ethanol extract.Thus，different solvent extracts from walnut green husk has certain toxic effect on tobacco budworm，has potentiality in biological pesticide development.

Key words walnut green husk；extract；tobacco budworm；cytotoxicity；antifeedant activity

核桃青皮，又名青龙衣（Juglans regia L.），是核桃最外层的一层厚厚的绿色果皮，其具有苦、涩、辛、平等特点，随着核桃逐渐成熟青果皮会变成黑色直至自然脱落。有研究表明，核桃树叶、枝及青核桃皮和核桃树皮都有较高的药用价值，具有杀菌、解毒、利尿等诸多功效[1-3]。同时，核桃青皮和叶的浸出液可防治农作物病虫害，是植物源新型农药开发的主要原料[1-3]。我国作为一个核桃生产大国，而且核桃的产量还在逐年增加，这样每年都有大量的核桃青皮被倒入山野、河流或者田地，不仅浪费了资源，也带来了很大的环境问题[4]。基于此，本研究拟采用不同的有机溶剂从核桃青皮中提取主要的化学成分，进一步开展其对烟青虫的毒杀和拒食活性研究，旨在开拓其更高的药用价值，以期为开发以核桃青皮为原料的新型植物源农药提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 材料及试剂。核桃青皮为2015年8—9月采自陕西省商洛市洛南县古城镇中山村（地理位置为北纬34°01′29″；东经110°33′03″，海拔高度809～1 215 m）。自然晾干后，在60 ℃的烘箱中烘干，粉碎后过10目筛（孔径2 000 μm）得到干粉，密封于塑料袋中，放在阴凉干燥处备用。吡虫啉（100 g/袋，江苏克胜集团股份有限公司生产），其他试剂均为分析纯。

1.1.2 供试昆虫。烟青虫、健康烟苗（于2015年6月源于洛南县永丰烟叶试验基地），选择体形健壮、大小一致的烟青虫作为供试虫。

1.2 试验方法

1.2.1 核桃青皮不同溶剂提取物制备。准确称取核桃青皮粉末80 g，放入1 000 mL锥形瓶中，分别选用5种极性不同的溶剂（水、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、乙醚）于室温下浸泡数小时，而后采用超声波辅助回流提取，每次30 min，连续浸提3次，过滤，合并3次滤液，用旋转蒸发仪减压浓缩至膏状，备用。

1.2.2 生物活性测定。一是烟青虫的毒杀活性测定。采用喷雾法[5-7]，取30个清洗干净的的培养皿（？准 9 cm），每个培养皿底部铺上中性滤纸，将个体大小一致、体色相近的烟青虫放到新鲜的烟草的叶片上，放入培养皿中，将不同浓度的核桃青皮提取液（1.0、5.0、10.0、15.0、20.0 mg/mL）均勻地喷洒在烟叶的表面，以每片20头进行分段处理。盖好培养皿盖，以防烟青虫逃逸，贴好标签，用农药吡虫啉（10 mg/mL）处理作阳性对照，以相应溶剂为正常对照组。置于适宜的温度下培养48 h后，观察死亡情况，分别检查死亡的烟青虫数目，存活的烟青虫数目，计算死亡率及校正死亡率。

二是不同提取物对烟青虫的拒食活性测定方法。将提取物稀释成浓度为1.0、5.0、10.0、15.0、20.0 mg/mL的溶液，并用农药吡虫啉（10 mg/mL）作为阳性对照，相应溶剂作空白（正常）对照。将烟叶剪成2.5 cm×2.5 cm的小叶片分别在处理溶液和对照溶液（包括空白对照和阳性对照）中分别浸蘸5 s，取出，然后在其叶背上放5头烟青虫，将烟叶放入培养皿中，叶背朝下，并用湿棉球缚叶柄保湿培育。48 h后检查各处理叶片上烟青虫的栖息数，每种处理重复6次，计算拒食率[7]。

拒食率（%）=（对照叶片虫数-处理叶片虫数）/对照叶片虫数×100

1.3 数据分析方法

试验数据用SPSS 19.0数据处理软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 不同溶剂提取物对烟青虫的毒杀作用

核桃青皮5种不同溶剂核桃青皮提取物对烟青虫的毒杀作用如表1所示，可以看出，不同溶剂提取物在不同浓度处理下都会影响烟青虫存活情况。在相同溶剂、不同浓度下对烟青虫的触杀活性总体上随着提取物浓度的增加，烟青虫的死亡率在升高。其中，乙酸乙酯对烟青虫的触杀效果最好。当浓度为20 mg/mL，样品处理48 h后烟青虫的死亡率和校正死亡率分别为60.15%和59.51%。在相同质量浓度下不同溶剂提取物的杀虫活性大小不一，其杀虫活性依次为乙酸乙酯提取物>氯仿提取物>乙醚提取物>乙醇提取物>水提取物。由此可见，核桃青皮的杀虫成分主要集中在脂溶性的有机溶剂当中，其主要杀虫活性物质尚待后续进一步研究。在10 mg/mL的条件下，和同浓度的阳性对照相比，各样品的作用要弱一些，这可能是样品的纯度不够所致，需要进一步的纯化和更深入研究。

2.2 核桃青皮不同溶剂提取物对烟青虫的拒食作用

从表2可以看出，5种不同溶剂提取物对烟青虫均具有一定的拒食活性，拒食活性依次为乙酸乙酯提取物>氯仿提取物>乙醚提取物>乙醇提取物>水提取物。在相同溶剂下烟青虫的拒食活性总体上是随着提取物浓度的增加而升高，且拒食率明显高于正常对照组（提取溶剂），略低于阳性对照组农药吡虫啉。

当质量浓度为20 mg/mL时，核桃青皮乙酸乙酯提取物对烟青虫的拒食活性最高，处理48 h后拒食率为63.77%，阳性对照组农药吡虫啉的拒食率为67.53%，非常接近阳性对照（图1）。

3 结论与讨论

商洛核桃青皮提取物对烟青虫具有一定的防治作用，其拒食率和死亡率均呈现良好的量效关系，5种不同溶剂提取物对烟青虫的触杀和拒食活性不尽相同。在相同浓度条件下，其杀虫活性和拒食活性依次为乙酸乙酯提取物>水提取物>乙醚提取物>乙醇提取物>氯仿提取物；在相同溶剂条件下，提取物对烟青虫的毒杀活性和拒食活性总体上随提取物浓度的增加而升高，并且呈现良好的剂量效应关系。当浓度为20 mg/mL，烟青虫处理48 h后的死亡率和校正死亡率分别为60.15%和59.51%，且触杀率和拒食率均高于正常对照组（提取溶剂），与此同时，烟青虫的触杀率均高于阳性对照组农药吡虫啉，拒食率略低于阳性药物吡虫啉[5-6]。

本试验选取5种极性不同的溶剂（水、乙醇、乙酸、氯仿、乙酸乙酯），采用超声波方法提取核桃青皮的有效成分，从而得出核桃青皮5种不同溶剂提取物对烟青虫的毒杀活性和拒食活性。试验结果表明，核桃青皮乙酸乙酯提取物对烟青虫的毒杀活性和拒食活性最强，为进一步研究核桃青皮中的杀虫活性物质奠定了基础。试验过程设计溶剂对照组和阳性对照组来比较触杀率和拒食率，充分说明了烟青虫5种不同溶剂提取物对烟青虫的毒杀作用，但本试验只观察了处理48 h后的活性，没有把时间因素考虑进去，可能会对试验结果产生相应的误差，这是对活性测定的一个重要因素。而且由于植物次生物质种类多，结构复杂，所得的乙酸乙酯提取物仍是一类混合物，还必须进一步分离纯化得到杀虫活性单体物质[8-10]。研究发现，核桃青皮不同溶剂提取物均对烟青虫具有明显的毒杀作用，将其作为植物源杀虫剂与杀菌剂来开发利用，变废为宝，意义重大[11]，并可为以后的研究提供更广阔的空间。但关于其在防治农业害虫方面的研究却刚刚起步，若能从核桃青皮中提取出具有药用价值的活性成分，不仅能缓解大量核桃青皮堆积带来的环境问题，还能增加果农收入，农业的发展前景将更加广阔。

4 参考文献

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