曼陀罗总生物碱抑菌活性的初步研究

尚天翠



曼陀罗总生物碱抑菌活性的初步研究

尚天翠

（伊犁师范学院生物与地理科学学院，新疆 伊宁 835000）

采用MIC和纸片法考查了曼陀罗提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌的抑菌性能。结果表明，曼陀罗对4种受试菌株都有抑菌活性；100 ℃时，水提物对大肠杆菌的抑菌效果最好, 最大抑菌圈为14.72 mm; pH值为8时，曼陀罗水提取对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌的抑菌性最好，最大抑菌圈分别为15.46、13.47、12.26和11.22 mm。曼陀罗水提取对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌的最小抑菌浓度( MIC) 分别为8、8、4、6 mg/mL。

曼陀罗；生物碱；抑菌活性

曼陀罗()为茄科曼陀罗属植物，野生药用植物，现广泛分布于全国各地。曼陀罗生物碱是曼陀罗的主要药理活性部分，对胃肠痉挛、哮喘、关节痛、神经性偏头痛、跌打损伤等症状具有良好的治疗作用[1-5]。关于曼陀罗生物碱的化学成分研究已有报道[6-7], 但关于曼陀罗生物碱抑菌活性方面的研究鲜见报道。因此本实验通过对曼陀罗生物碱抑菌作用的研究，为曼陀罗在医疗等方面的药理研究提供重要的理论依据和奠定基础。

1 实验部分

1.1 材料

曼陀罗种子在2011年3月采集于伊犁河周边地区，经100 ℃烘干，粉碎后过60目筛，装入烧杯中封口，置于低温条件下保存备用。金黄色葡萄球菌（）、大肠杆菌()、枯草芽孢杆菌()、酵母菌（）由本院微生物实验室提供。

1.2 方 法

1.2.1 曼陀罗种子生物碱提取液的制备

将曼陀罗种子干粉称取5 g，再加入蒸馏水10 mL，在28 ℃浸泡24 h，按照比例配制成0.5、1、2、4、6、8、10 mg/mL处理液置4 ℃冰箱备用。

1.2.2 4种菌液的制备

将活化好的菌种挑起少许，在无菌条件下，接入装有30 mL液体LB培养基的锥形瓶中，在37 ℃、150 r/min震荡培养18 h，使各种菌达到对数生长期，最终使菌悬液中细菌数为1×107个/mL、酵母菌数为1×106个/mL，待用。

1.2.3 曼陀罗种子生物总碱的抑菌作用

抑菌圈的大小采用纸片法测定[8]。先将不同浓度的总生物碱提取物20 µL加入到经灭菌的标准滤纸片(直径为6 mm)表面，自然晾干后再重复2次，并按“品”字形贴于含菌的平板表面，恒温培养箱中培养24 h后观察并测量抑菌圈的大小。不同浓度提取液对4种受试菌株分别测定3次，结果取其平均值。

1.2.4 曼陀罗种子生物碱的最低抑菌浓度(MIC)的测定[9]

将曼陀罗种子生物总碱液分别稀释成0.5、1、2、4、6、8、10 mg/mL 7个浓度梯度，按照滤纸片法测定抑菌圈大小，比较各浓度下的抑菌大小，并确定最小抑菌浓度。

1.2.5 pH对曼陀罗种子生物碱提取物抑菌活性的影响

取曼陀罗生物碱水溶液若干份，然后用0.1 mol/mL HCl或NaOH溶液分别调制pH值为4、5、6、7、8、9、10，按照上述滤纸片法操作，以比较不同的pH对曼陀罗种子生物碱抑菌活性的影响。

1.2.6 温度对曼陀罗种子生物碱抑菌活性的影响

取曼陀罗生物碱水溶液若干份，分别置于40、60、80、100 ℃的水浴中加热，以大肠杆菌为代表菌，用滤纸片测定抑菌圈大小，重复3次，取平均值。

1.2.7 pH对曼陀罗种子生物碱提取物抑菌活性的影响

将曼陀罗种子生物碱溶液分别与枯草芽孢杆菌和大肠杆菌悬液混合，制成固体平板，作用时间设为 1、3、6、9、12 h时，移取0.2 mL混合菌悬液，以不加曼陀罗种子生物碱溶液的枯草芽孢杆菌和大肠杆菌平板作为对照，在37 ℃恒温培养箱内培养24 h，计菌落数，重复2次，并按下列公式计算抑菌率。

抑菌率,％＝对照皿菌落数-

实验皿菌落数/对照皿菌落数×100％

2 结果与分析

2.1 曼陀罗种子生物碱的抑菌作用

表1的结果表明，曼陀罗种子生物碱提取物对各受试菌的抑菌圈直径都在10 mm以上，表明曼陀罗种子生物碱提取物对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌和酵母菌都有抑菌作用。但相对而言，曼陀罗种子生物碱提取物对受试细菌的抑菌活性明显要大于酵母，其中对大肠杆菌的抑菌圈最明显，抑菌圈达到了16.2 mm。因此，曼陀罗种子生物碱提取物对细菌的抑菌活性比较强。

表1 曼陀罗种子生物碱液对试验菌的抑菌效果

注：— 表示无抑菌圈。

2.2 曼陀罗种子生物碱的最低抑菌浓度(MIC)的测定

表2 不同曼陀罗种子生物碱溶液浓度对几种微生物的最低抑制浓度

表2的结果表明，曼陀罗种子生物碱提取物对对大肠杆菌、枯草杆菌的最低抑菌浓度(MIC)为8 mg/mL，金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)为4 mg/mL，对酵母菌的最低抑菌浓度(MIC)为6 mg/mL。

2.3 温度对曼陀罗种子生物碱抑菌的影响

表3 不同的温度对曼陀罗种子生物碱抑菌活性的影响（大肠杆菌）

由表3可以看出，随着温度的升高，曼陀罗种子生物碱对大肠杆菌的抑菌作用也在增大，在100℃的条件下，抑菌圈直径达到最大值，抑制圈大小为14.72 mm，说明温度对曼陀罗种子生物碱具有一定的影响。

2.4 pH对曼陀罗种子生物碱提取物抑菌活性的影响

由表3可以看出，在不同的pH条件下，曼陀罗种子生物碱提取物对四种菌都有不同程度的抑菌作用。当pH=6~10时，对大肠杆菌的抑菌效果较好；当当pH=5~10时，对枯草芽孢杆菌的抑菌效果较好；当pH=7~10时，对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好；当pH=8~10时，对酵母菌的抑菌效果较好，当pH=8时，对四种菌的抑菌效果都达到最大，说明，pH=8是曼陀罗种子生物碱提取物抑菌的最佳pH值。

表4 不同的pH对曼陀罗种子生物碱提取物抑菌活性的影响

2.5 曼陀罗种子生物总碱液对致病菌作用时间与抑菌率的关系

由图1、图2可知，曼陀罗种子生物碱提取液的浓度和作用时间呈正比关系，即浓度越大，作用时间越长，抑菌效果越好，曼陀罗种子生物碱提取液对两种菌作用时间与抑菌率的影响不是很明显。

图1 枯草芽孢杆菌

图2 大肠杆菌

3 结 论

曼陀罗种子生物碱是一种具有抑制活性的物质，抑菌实验结果表明：曼陀罗种子生物碱对细菌有较强的抑制作用，MIC值分别为：金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)为4 mg/mL，大肠杆菌、枯草芽胞杆菌的最低抑菌浓度(MIC)为8 mg/mL，酵母菌的最低抑菌浓度(MIC)为6 mg/mL。

曼陀罗种子生物碱的抑菌作用在不同的pH值范围内均较稳定，在弱碱性条件下（pH=8左右）能更好的发挥其抑菌作用；温度越高，曼陀罗种子的抑菌效果越显著；曼陀罗种子生物碱提取液的浓度和作用时间呈正比关系，即浓度越大，作用时间越长，抑菌效果越好。

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[3] 周志田, 王刚. 曼陀罗烫洗治疗跟骨骨刺足跟痛[J]. 中国民间疗法, 2003, 11 (1): 22.

[4] 柴军, 汪佳萍, 梁洁. HPLC测定复方曼陀罗药水中的硫酸阿托品[J]. 华西药学杂志, 2009, 24 (3): 310-311.

[5] 张红星, 祁青. 洋金花的镇痛作用及临床应用研究[J]. 湖北中医杂志, 2010, 32 (2): 29-31

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Study on the Antibacterial Activity of Total AlkaloidsFromSeeds

SHANG Tian-cui

（School of Biology and Geography Science, Yili Normal University, Xinjiang Yining 835000, China）

The bacteriostasis performance of datura extracts to Eschrichia coli,Bacillus subtilis,Staphylococcu saureus and Saccharomyces cerevisiae was investigated by MIC and scrip method. The results showed that datura extracts had bacteriostasis activity to four kinds of test strains. The bacteriostasis effect of datura H2O extracts on Eschrichia coli was best at37℃, the max bacteriostasis ringwas 14.72mm. The max antibacterial ring of H2O extracts to Eschrichia coli, Bacillus subtilis,Staphylococcu saureus and Saccharomyces cerevisiae at pH for 8 were 15.46, 13.47,12.26 and 11.22, respectively. MIC value for Eschrichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcu saureus and Saccharomyces cerevisiae were8，8，4，6mg /mL,respectively.

; alkaloid; antibacterial activities

Q 946.887

A

1004-0935（2017）09-0852-03

伊犁师范学院/自治区教育厅普通高等学校重点实验室项目，项目号：2013YSHXYB09。

2017-05-12

尚天翠（1979-），女，高级实验师，硕士，甘肃白银市人，2007年毕业于甘肃农业大学植物病理学专业，研究方向：从事植物与微生物资源开发利用。