养殖条件下叶尔羌高原鳅摄食及主要消化酶活性的昼夜节律

王帅+宋勇+任道全

摘要：旨在探讨人工养殖环境下叶尔羌高原鳅摄食量和主要消化酶的昼夜节律。在水温恒定（20±0.5） ℃ 条件下，观察叶尔羌高原鳅在08：00、11：00、14：00、17：00、20：00、23：00、02：00和05：00时的摄食情况，并计算其摄食量；测定昼夜演替下叶尔羌高原鳅消化器官和消化道中蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性。结果表明，叶尔羌高原鳅在20：00至次日02：00区间内摄食较多，其中摄食峰值出现在23：00；昼夜变化对叶尔羌高原鳅消化器官和消化道中消化酶活性均有影响，胃蛋白酶活性的最高值出现在23：00，脂肪酶、胰蛋白酶和淀粉酶活性的最高值出现在02：00；4种消化酶活性最低值均为14：00。叶尔羌高原鳅摄食属于日伏夜食型，夜间设置定时投喂，可促进叶尔羌高原鳅快速生长。

关键词：叶尔羌高原鳅；摄食；消化酶；昼夜节律

中图分类号： S966.4 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2016）11-0264-03

叶尔羌高原鳅[Triplophysa （Hedinichthys） yarkandensis （Day）]广泛分布于新疆塔里木河流域，为杂食偏动物性底栖鱼类，是塔河土著鱼类中个体较大、生长较快的品种[1]；具有蛋白质含量高、氨基酸组成全面等优点，而且其氨基酸总量也高于草鱼、鲤等常见养殖鱼类[2]，是当地人喜食的佳肴，具有一定的经济价值和养殖前景。对叶尔羌高原鳅的研究主要集中在其形态特征、生态适应、繁殖生物学、食性选择、系统分类、演化规律等方面，也有少量关于叶尔羌高原鳅食用价值、观赏价值和药用价值等方面的研究报道[3]。目前，由于生态环境变迁和人类生产活动的影响，塔里木河流域葉尔羌高原鳅数量下降明显，导致了其价格上升；叶尔羌高原鳅的人工养殖目前仍处于起步阶段，因此，对叶尔羌高原鳅营养需求及消化的研究具有一定的现实意义[4]。鱼类的消化活动受到诸多内在和外源因素的影响，其中光照强度对鱼类的摄食有明显影响；另外通过研究鱼类消化酶活力的昼夜节律，还可为养殖过程中正确掌握食物的投喂时间和投喂量提供参考。然而，叶尔羌高原鳅摄食及消化的昼夜节律未见报道[5]。本试验就叶尔羌高原鳅摄食及主要消化酶的昼夜节律进行探讨，通过测定叶尔羌高原鳅24 h中不同时间段的摄食量，以及蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的变化规律，为其人工养殖及推广等提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物、试剂与仪器

供试叶尔羌高原鳅捕捞自塔里木河沙雅段，捕捞时间为2014年8月，体质量（42.5±3.8）g，体长（16.3±1.7）cm。试验鱼置于长、宽、高规格为0.8 m×0.4 m×0.5 m的玻璃水族箱（具有控温、水体过滤、杀菌、充氧等装置）中，养殖水温（20±0.5） ℃，每天换水1次，所换水经曝气处理，试验水温保持在约20 ℃，pH值约7.0，溶解氧浓度大于5.0 mg/L。

胰蛋白酶、胃蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶检测试剂盒，购自南京建成生物工程研究所；其余试剂均为国产分析纯。

Carry 100型紫外-可见分光光度计，美国瓦里安；5427型台式冷冻高速离心机，德国艾本德；Elix5型超纯水仪，美国密理博；PRO250型组织匀浆仪，美国PRO；QUINTIX224-1CN型分析天平，德国赛多利斯。

1.2 试验设计

预试验5 d，期间正常投饲；正式试验为5 d（试验周期120 h），将160条试验鱼和40条后备鱼置于不同的水族箱中，日投饲量为2 g。试验期间每隔3 h投喂1 次，均为随机取样后再投喂，每次投喂量0.25 g；投喂时观察其摄食情况，采食结束后立即取样测定摄食量及消化酶活性，摄食量取叶尔羌高原鳅整个消化道内的饲料质量称体质量并计算平均值，消化酶活性测定按试剂盒说明书进行，每次取 4 尾幼鱼，采样8次/d。

1.3 粗酶液的制备及消化酶活性的测定

将活鱼使用重器敲击头部处死后立即解剖，迅速取出肝胰脏、胃、胃幽门部和全肠，使用预冷的去离子水冲洗消化道，再使用脱脂棉球擦干并精确称量，然后加9倍质量的预冷至pH值为7.5 PBS液，冰浴条件下匀浆[6]；12 000 r/min离心15 min，取其上清液即为粗酶提取液。酶活性测定需在12 h内完成，均采用检测试剂盒。其中胃蛋白酶的测定使用福林-酚法，胰蛋白酶的测定使用精氨酸乙酯法，淀粉酶的测定使用碘-淀粉比色法，脂肪酶的测定使用微乳液法。胃蛋白酶取叶尔羌高原鳅胃与胃幽门部测定，胰蛋白酶取肝胰脏和肠道部分测定，脂肪酶和淀粉酶取全部组织测定。

1.4 数据分析

数据分析使用SPSS 16.0中One-Way ANOVA进行单因素方差分析及Duncans多重比较，检验误差为5%和1%。

2 结果与分析

2.1 昼夜变化对叶尔羌高原鳅摄食的影响

叶尔羌高原鳅摄食主要集中在夜间20：00以后，其中23：00时其摄食量最高；然后随时间的延长呈下降趋势，14：00 时摄食量最低（表1）。叶尔羌高原鳅在11：00—17：00时的摄食量均极显著低于23：00时的摄食量（P<0.01），显著低于02：00、05：00、08：00、20：00时的摄食量（P<0.05）。试验结果表明叶尔羌高原鳅的摄食集中在20：0至次日 02：00 间，摄食高峰约在23：00。

2.2 叶尔羌高原鳅蛋白酶的昼夜变化

由表2可知，整个试验期内叶尔羌高原鳅胃蛋白酶（胃、幽门）和胰蛋白酶（肝胰脏、肠）的活性均为先降低后升高 （02：00—23：00）。其中胃蛋白酶的活性峰值出现在23：00，胰蛋白酶的活性峰值出现在02：00，胃蛋白酶和胰蛋白酶的活性最低值均出现在14：00。其中叶尔羌高原鳅08：00—14：00时 的胃蛋白酶活性均极显著低于23：00时的胃蛋白酶活性（P<0.01），08：00—17：00时的胰蛋白酶活性均极显著低于02：00时的胰蛋白酶活性（P<0.01）。试验中叶尔羌高原鳅蛋白酶的昼夜变化规律与摄食规律相近，表明叶尔羌高原鳅蛋白酶的昼夜变化规律与摄食活动有关。