高效液相测定注射用环磷腺苷葡胺中环磷腺苷含量

刘云娜+李岩

摘 要：目的：建立环磷腺苷葡胺葡萄糖注射液中环磷腺苷含量的HPLC检测方法。方法：采用Agilent 1200高效液相色谱仪，Agilent ZORBAX SB-C18柱（150x4.6mm，5μm），流动相为乙腈：pH2.5磷酸缓冲液（95：5），流速为1 ml/min，检测波长为259 nm，柱温为30℃进行测定。结果：环磷腺苷浓度在0.01082～0.2104 mg/ml范围内时，浓度与峰面积线性关系良好，方程相关系数r=0.9999，平均回收率99.7 %，RSD=1.22%。结论：用该方法检测注射用环磷腺苷葡胺中环磷腺苷含量准确，简便，高效。

关键词：HPLC；环磷腺苷葡胺注射液；环磷腺苷

环磷腺苷葡胺注射液非洋地黄类强心剂，具有正性肌力作用，能增强心肌收缩力，改善心肌泵血功能，有扩张血管作用，可降低心肌耗氧量；改善心肌细胞代谢，保护缺血、缺氧的心肌；能够改善窦房屋结P细胞功能等作用[1]。环磷腺苷葡胺由环磷腺苷和葡甲胺两种成分组成[2]。环磷腺苷葡胺注射液的含量测定在现行质量标准中为纸色谱法[3]，但由于纸色谱法耗时长，操作过程复杂，人为因素过多，精确度差，灵敏性低。高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC） 有“三高、一广、一快”的特点：高压、高效、高灵敏度；应用范围广；分析速度快、载液流速快；本文采用高效液相的方法对注射用环磷腺苷葡胺中环磷腺苷的含量进行测定。

1.仪器与试剂

1.1仪器

电子天平（BSA224S赛多利斯）；高效液相色谱仪（1200美国安捷伦公司）；ZORBAX SB-C18 柱（150 x 4.6 mm， 5 μm 美国安捷伦公司）；紫外分光光度计TU—1901（北京普析通用仪器有限责任公司生产）；pH计（PHS-3C上海雷磁仪器厂）。

1.2试剂

环磷腺苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号140709-201404，纯度为99.9%）；环磷腺苷葡胺注射液（亚宝药业集团股份有限公司，规格2 ml：30 mg，批号20151012）；磷酸（分析纯）；乙腈（色谱纯）；水（注射水）。

2.方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent ZORBAX SB-C18 柱 （长度×直径：150 x 4.6 mm，粒径：5μm）；以乙腈：pH2.5磷酸缓冲液（95：5）为流动相；检测波长为259 nm；柱温：30℃；流速：1 ml/min；进样量：10 μl。

2.2 样品配置

对照品溶液的配置：精密称取适量的环磷腺苷对照品，加流动相稀释制成浓度为0.1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的配置：精密量取适量的本品，加流动相稀释制成环磷腺苷浓度为0.15mg的溶液，作为供试品溶液。

2.3 线性关系考察

精密称取适量的环磷腺苷对照品，加流动相稀释制成浓度为0.1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；然后精密量取0.5，1，2，4，6，8 ml至10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。再各取上述溶液10 μl注入液相色谱仪中，最后以药物峰面积A对浓度C（mg/ml）进行线性回归。得到的回归方程：A=1650C+862，r=0.9999，结果表明环磷腺苷照品浓度在0.01082～0.2104 mg/ml范围内，浓度与药物峰面线性关系良好。

2.4 精密度考察

精密吸取对照品溶液10 μl，按照设定色谱条件重复进样8次，记录峰面积结果见表1，计算的RSD=0.58%。

2.5 重复性实验

精密量取2.2项中供试品溶液， 按照设定色谱条件重复进样6次，对照品溶液，进样1次，每次进样10 μl，记录峰面积，计算的结果（见表2）平均含量为100.37%，RSD=0.35%。结果表明此方法具有良好的重复性。

表2、重复性实验结果

2.6稳定性实验

精密量取2.2项中供试品溶液1份，分别在0、1、2、4、8、12 h进样品10 μl，记录峰面积结果见表3，计算的RSD=0.87%。结果表明样品至少在12 h内是稳定的。

2.7回收率实验

按环磷腺苷葡胺注射液处方工艺80%、100%、120%的含量模拟制成样品各3 份： 精密称取称取环磷腺苷对照品与相应比例混合辅料混匀，加水溶解定量稀释至50 mL，每个浓度平行制备3 份；另外精密称取环磷腺苷对照品10 mg，加流动相稀释制成浓度为0.1 mg/ml的溶液，作为对照品溶液；取供试品与对照品溶液各去10 μl注入液相色谱仪中，按照设定色谱条件测定，按外标法测定峰面积，计算回收率，结果（见表4）显示，磷腺苷葡胺注射液中的环磷腺苷含量测定加样回收率均在99%～101%之间，平均回收率为99.7%，RSD为1.22%（RSD≤2.0%）符合要求，说明此检测方法具有良好的回收率。

3 .讨论

环磷腺苷葡胺葡萄糖注射液是以临床常用和较稳定的治疗药物制成治疗型输液供临床使用，可以避免临时使用时将一些小针剂加到输液中使用带来的如热原、微粒、PH变化等诸多医疗隐患；操作更简便、安全，并可有效地避免二次交叉污染[4-5]。同时对原小水针质量标准进行了提高，含量测定由原纸色谱法改为高效液相色谱法，确保临床用药安全有效[6-8]。

本文中通过对环磷腺苷葡胺葡萄糖注射液中环磷腺苷的含量测定，对HPLC法进行方法建立及考察，结果表明该方法线性及重复性良好、精确度及回收率高，可行性强。

参考文献

[1]鲁一兵.环磷腺苷葡胺治疗心力衰竭疗效观察[J].中国实用医学研究杂志，2005，4：37-38.

[2]张义林， 宣疆英. 环磷腺苷葡胺对老年心力衰竭患者心功能及BNP水平的影响[J]. 心脑血管病防治， 2014（1）：74-76.

[3]国家食品药品监督管理局. 国家食品药品监督管理局标准（试行）[S].YBH02142005.

[4]姜 凌，柳春宇，李 杰.HPLC法测定银黄片中绿原酸的含量[J].長春中医药大学学报，2007，23（4）：32.

[5]王秋香，季宏伟，张彦彤.高效液相色谱法测定三磷酸胞苷二纳中的含量[J].长春中医药大学学报，2007，23（3）：26.

[6] 陈建平， 周际宇， 陶琼. HPLC法测定注射用环磷腺苷葡胺含量[J]. 药学研究， 2013， 32（12）：693-694.

[7] 刘磊. 对环磷腺苷葡胺注射剂含量测定方法的探讨[J]. 科学与财富， 2015（2）：367-367.

[8] 尹菁， 纪宇. HPLC法测定注射用环磷腺苷葡胺中葡甲胺含量[J]. 中国药品标准， 2015（4）：257-260.

作者简介：刘云娜，黑龙江威凯洱生物技术有限公司，职称：助理工程师，单位邮编：150028，学历：本科，1986年出生。