急性脑梗死患者体内血小板CD62P和sTLT-1的表达水平

陆丽丽， 刘 丹， 庞春燕， 张 伟， 张广炜

急性脑梗死患者体内血小板CD62P和sTLT-1的表达水平

陆丽丽， 刘 丹， 庞春燕， 张 伟， 张广炜

目的 大量研究表明血小板CD62P和sTLT-1能够促进动脉粥样硬化性血栓的形成，因此我们检测急性脑梗死患者体内血小板CD62P和sTLT-1的表达水平，以作为评价动脉粥样硬化性血栓形成的功能指标。方法 选择急性脑梗死患者(发病时间≤7 d)102例作为病例组，同期选择来我科就诊的非急性脑梗死患者93例为对照组，采用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测血小板CD62P的表达水平，用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测血清中sTLT-1的表达水平。结果 急性脑梗死组的血小板CD62P和sTLT-1的表达水平均明显高于对照组(P<0.01)，CD62P和sTLT-1的表达水平与急性脑梗死患者的神经功能缺损程度及梗死灶体积呈正相关；CD62P和sTLT-1之间呈直线正相关(r=0.247，P<0.01)；多元Logistic回归分析，CD62P和sTLT-1在校正其他相关危险因素后[CD62P(%)OR值=1.102，95%CI：1.062～1.143，P<0.01；sTLT-1(pg/ml)OR值=1.004，95%CI：1.002～1.006，P<0.01]。结论 血小板CD62P和sTLT-1是脑梗死发病的危险因素，可能是急性脑梗死患者体内动脉粥样硬化性血栓形成的独立危险因素。

急性脑梗死； 动脉粥样硬化性血栓形成； 血小板； CD62P； sTLT-1

动脉粥样硬化性血栓形成是目前公认的脑梗死急性发病的主要原因，不稳定的粥样硬化斑块被侵蚀发生破裂后，富含脂质的核心和内皮下胶原等物质会激活血流中的血小板，活化的血小板通过变形、释放颗粒内容物及合成血管活性物质等作用，招募血流中的白细胞粘附于血管内皮损伤处，粘附的白细胞释放炎性介质，又可以加重内皮细胞的损伤和释放血小板活化因子。活化因子作为一种血管活性介质又可促使炎细胞聚集和血小板的活化，如此反复导致局部血栓形成，阻塞血管影响组织供血，发生缺血性疾病。当此过程发生于脑血管内，就会引起脑血管的闭塞，局部脑组织失去血液的供应而发生缺血坏死，出现相应的临床症状。

本实验涉及的指标CD62P是表达于活化血小板表面的膜结合蛋白，是经典的血小板活化指标；髓样细胞触发受体样转录因子-1(triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1，TLT-1)是储存于血小板和巨核细胞α-颗粒内的具有单一V形免疫球蛋白结构域的Ⅰ型孤儿受体，当血小板被激活时，α-颗粒会与血小板膜融合使TLT-1转移到血小板的表面，血小板表面的TLT-1会分泌一种可溶性的片段(sTLT-1)，并通过sTLT-1发挥作用。大量研究表明血小板CD62P和sTLT-1与动脉粥样硬化的发生和发展有关，因此我们欲检测急性脑梗死患者体内血小板CD62P和sTLT-1的表达水平，探讨其与急性脑梗死患者体内动脉粥样硬化性血栓形成之间的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择急性脑梗死(发病时间≤7 d)患者102例作为病例组，男性66例，女性36例，平均年龄(62.03±8.95)岁。均符合1996年全国第四届脑血管病学术会议修订的动脉粥样硬化性脑梗死的诊断标准，且经头部CT或MRI检查证实。排除标准：年龄≤30岁或≥90岁；有严重的肝肾功能损害；合并急性心肌梗死、心力衰竭；合并全身自身免疫性疾病、慢性炎症、严重感染、肿瘤或传染性疾病；有脑出血等出血史或出血倾向，血小板计数<100×109/L或>300×109/L；入院前2 w服用抗血小板聚集、抗凝药物。同期选择来我科就诊的非急性脑梗死患者93例为对照组,男48例，女45例，平均年龄(59.61±11.26)岁。

1.2 方法与分组 (1)根据头部CT或MRI病灶大小,脑梗死体积按Pullicino公式(长×宽×层数)/2计算，将其分为大梗死组17例，病灶体积>10 cm3；中梗死组15例，病灶体积(4～10 cm3)；小梗死组70例，病灶体积<4 cm3。(2)根据美国国立卫生院神经功能缺损评分(NIHSS)标准在入院第一天进行评分，分为轻度组44例(<4分)；中度组45例(4～10分)；重度组13例(>10分)。(3)所有入组患者均于入院后由护士急抽肘静脉血4 ml置于全塑枸橼酸钠抗凝管中，在常温环境中以2500 r/min离心5 min，吸取上层血浆收集于流式管内，加入1%多聚甲醛的PBS液1 ml进行固定(此过程必须控制在30 min内)，然后加入相应抗体等处理后，在24 h内用流式细胞仪检测血小板CD62P的表达水平。另4 ml置于全塑真空干管内，在常温环境中以2500 r/min离心5 min，吸取上层血清放于-80 ℃冰箱保存待测，最后用ELISA检测sTLT-1的表达水平。

2 结 果

2.1 两组之间一般资料和临床实验指标的比较P值来自于独立样本t检验，结果年龄、性别、血小板计数、TG、CHO、LDL的t检验组间P值>0.05，差异无统计学意义；SP、DP、空腹血糖、HDL、CD62P和sTLT-1的t检验组间P值<0.05，差异有统计学意义，结果(见表1)。

2.2 CD62P和sTLT-1的表达水平与梗死灶体积的关系 见1.2方法与分组(1)，ANOVA检验组间P<0.05，差异有统计学意义；组间两两比较示CD62P：P1和P2<0.05(P1小梗死组-中梗死组；P2小梗死组-大梗死组)；sTLT-1：P1、P2和P3<0.05(P1小梗死组-中梗死组；P2小梗死组-大梗死组；P3中梗死组-大梗死组)，差异有统计学意义，梗死灶越大，CD62P和sTLT-1的表达水平越高；其中小梗死组[70例，CD62P(%)=44.82±9.14；sTLT-1 (pg/ml)=530.60±155.88]；中梗死组[15例，CD62P(%)=49.93±9.20；sTLT-1(pg/ml)=600.75±152.90]；大梗死组[17例，CD62P(%)=54.41±8.61；sTLT-1(pg/ml)=735.95±137.65]。

2.3 CD62P和sTLT-1的表达水平与神经功能缺损程度的关系 见1.2方法与分组(2)，ANOVA检验组间P<0.05，差异有统计学意义；组间两两比较示CD62P：P1和P2<0.05(P1轻度 -中度；P2轻度-重度)；sTLT-1：P1、P2和P3<0.05(P1轻度-中度；P2轻度-重度；P3中度-重度)，差异有统计学意义，神经功能缺损程度越重，CD62P和sTLT-1的表达水平越高；其中轻度组[44例，CD62P(%)=42.31±8.54，sTLT-1(pg/ml)=522.61±151.48]；中度组[45例，CD62P(%)=49.76±9.14，sTLT-1(pg/ml)=577.84±163.71]；重度组[13例，CD62P(%)=54.68±7.30，sTLT-1(pg/ml)=743.60±141.07]。

2.4 Spearman等级相关分析 急性脑梗死患者体内CD62P和sTLT-1的表达水平与神经功能缺损程度呈正相关(CD62P：r=0.518,P<0.01；sTLT-1：r=0.407，P<0.01)；与梗死灶体积呈正相关(CD62P：r=0.429，P<0.01；sTLT-1：r=0.417，P<0.01)。

2.5 Pearson相关分析 急性脑梗死患者体内CD62P与sTLT-1的表达水平呈正相关(r=0.247，P<0.01)。

2.6 将P<0.05的各变量行多元Logistic回归分析 将单因素方差分析中P<0.05的各变量纳入多元逐步Logistic回归分析，与急性脑梗死明显相关的变量有HDL、CD62P和sTLT-1，校正其他相关危险因素后，CD62P(%)：(OR值=1.102，95%CI：1.062～1.143，P<0.01)；sTLT-1(pg/ml)：(OR值=1.004，95%CI：1.002～1.006，P<0.01)与急性脑梗死的发病明显相关，可能是急性脑梗死患者体内动脉粥样硬化性血栓形成的独立危险因素。

表1 病例组和对照组的一般资料和临床实验指标对比

病例组与对照组比较*P<0.05，**P<0.01

3 讨 论

动脉粥样硬化是一种慢性的血管病变，在动脉粥样硬化的发生发展中，尤其是在粥样硬化斑块的破裂和血栓形成中血小板的活化起着至关重要的作用。动脉粥样硬化的发生过程包括内皮细胞的损伤、大量脂质在内膜的沉积、固有免疫和适应性免疫反应的增强、血管内膜平滑肌细胞的增殖和细胞外基质的重塑、动脉粥样硬化性斑块的形成。血小板内含致密颗粒和α-颗粒，颗粒内含有能够表达在血小板表面的膜结合蛋白和分泌到细胞外的可溶性蛋白，如纤维蛋白原、CD62P、TLT-1、5-羟色胺(5-HT)、sTLT-1和ADP等物质，血小板的功能也是由这些不同的受体和介质决定的，它们共同作用促进血小板的活化、血小板-白细胞、血小板-内皮细胞以及与其他炎性细胞之间的相互作用。

CD62P又称为P-选择素，是细胞粘附分子选择素家族中的一员。正常情况下CD62P合成并储存于血小板的α-颗粒和内皮细胞的Weibel-Palade小体内，当机体发生炎症反应时，在组胺、凝血酶或补体的激活下CD62P会转移到细胞表面，通过与白细胞表面的P-选择素糖蛋白配体-1(P-selectin glycoprotein ligand-1,PSGL-1)结合，招募循环中的白细胞粘附于血管损伤处，进而促进炎症反应[1]。有研究表明[2]，CD62P在动脉粥样硬化的形成和发展中起重要作用，在脑梗死急性期的表达水平明显高于对照组[3]且与疾病的严重程度有关[4]，是脑梗死发生的独立危险因素，这与本实验的研究结果是一致的。

sTLT-1是血小板表面的TLT-1发生裂解而生成的是一种可溶性蛋白[5]，当机体发生炎症性疾病时(如败血症)，sTLT-1的表达水平会明显增高，并通过促进肌动蛋白的聚合而促使血小板粘附于内皮细胞上，因此，sTLT-1是动脉粥样硬化形成过程中的一个促进因子[6]。Omar LE[7]等研究发现，sTLT-1在急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者体内的表达水平明显增高，且与P-选择素的表达水平增加同步。这与我们的研究结果是一致的，急性脑梗死患者体内sTLT-1的表达水平明显高于对照组。sTLT-1与CD62P的表达水平呈正相关，且都是血小板的活化产物，因此我们认为sTLT-1与CD62P一样在血小板、白细胞、内皮细胞或其他细胞之间起调节作用，是急性脑梗死病情严重程度的指标，这也间接表明sTLT-1参与动脉粥样硬化性血栓的形成。

虽然有研究表明sTLT-1是通过Rac1/p38信号通路调节激动蛋白的聚合[7]，参与斑块形成和(或)动脉粥样硬化性血栓形成的病理生理过程。但是sTLT-1参与动脉粥样硬化性血栓形成的具体机制目前仍不清楚。

[1]Frenette PS,Denis CV,Weiss L,et al.P-Selectin glycoprotein ligand 1 (PSGL-1) is expressed on platelets and can mediate plateletendothelial interactions in vivo[J].Exp Med,2000,191:1413-1422.

[2]Hu SS,Zhang HG,Zhang QJ,et al.Circulating CD62P small microparticles levels are increased in hypertension[J].Int J Clin Exp Pathol,2014,7(8):5324-5326.

[3]Yip HK,Chen SS,Liu JS,et al.Serial changesin platelet activation in patients after ischemic stroke:Role of pharmacodynamic modulation[J].Stroke,2004,35(7):1683-1687.

[4]Cha JK,Jeong MH,Kim EK,et al.Surface expression of P- selectin on platelets is related with clinical worsening in acute ischemic stroke[J].J Korean Med Sci,2002,17(6):811-816.

[5]Jessica M,Karina V,Jim G,et al.Soluble TLT-1 modulates platelet-endothelial cell interactions and actin polymerization[J].Blood Coagul Fibrinolysis,2010,21(3):229-236.

[6]Morales J,Villa K,Gattis J,et al.Soluble TLT-1 modulates platelet-endothelial cell interactions and actin polymerization[J].Blood Coagul Fibrinolysis,2010,21(3):229-236.

[7]Omar LE,Robert H,Jose RR,et al.Levels of soluble TREM-like transcript 1 in patients presenting to the emergency department with chest pain[J].Clin Appl Thromb Hemost,2015,21(1):30-34.

The levels of CD62P and Soluble TREM-Like Transcript 1 in patients with acute cerebral infarction

LULili,LIUDan,PANGChunyan,etal.

(DepartmentofNeurology,theFirstAffiliatedHospitalofBaotouMedicalCollege,Baotou014010,China)

Objective Recent studies suggest that the CD62P and soluble triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1 (sTLT-1) facilitate atherothrombosis.Therefore,We evaluated CD62P and sTLT-1 as functional measures of atherothrombosis in acute cerebral infarction (ACI).Methods The case group includes 102 patients with acute cerebral infarction from department of neurology (within the first 7 days after the onset of stroke),and the control group includes 93 patients with non acute cerebral infarction.The level of CD62P was detected by flow cytometry,the level of sTLT-1 was detected by enzyme linked immunosorbent assay.Results The level of CD62P and sTLT-1 were dramaticlly higher than the control group(P<0.01).They have obviously positive correlation between degree of neurofunction impairment and volume of infarction.CD62P and sTLT-1 are positive linear correlation(r=0.247,P<0.01).Multivariate analysis showed that CD62P and sTLT-1 are independent indicators of acute cerebral infarction[CD62P(%)OR=1.102,95%CI：1.062～1.143，P<0.01；sTLT-1 (pg/ml)OR=1.004,95%CI：1.002～1.006，P<0.01].Conclusion Platelet activity markers CD62P and sTLT-1 are the risk factor of may be functional measures of acute cerebral infarction and may be independent predictors of atherothrombosis in acute cerebral infarction.

Acute cerebral infarction; Atherothrombosis; Platelets; CD62P; sTLT-1

1003-2754(2017)02-0105-03

2016-10-23；

2016-11-28

内蒙古科技大学包头医学院青苗计划项目(No.2016H0906)

(内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院神经内科，内蒙古 包头 014010)

陆丽丽，E-mail：823734635@qq.com

R743.3

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