石榴皮中黄酮类化合物提取工艺优化及含量测定

牛俊乐+黄斌+黄秋月

摘 要：该试验以胭脂红石榴果皮为原料，采用乙醇提取法，借助于正交试验结果分析对其果皮黄酮类化合物提取工艺进行优化方案分析，并用最优提取工艺测定其黄酮类化合物的含量。结果表明：黄酮类化合物最适提取工艺条件为乙醇体积分数70%，提取时间40min，料液比1∶40，此时提取的石榴皮黄酮类化合物的含量为148.09mg/g。

关键词：石榴皮；黄酮类化合物；提取工艺；优化

中图分类号 TS201 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）04-0074-02

石榴（Punica granatum L.），又称为安甘石榴、安石榴[1]等，石榴果肉中具有很高的营养价值和医用保健价值，含有大量的糖类物质、氨基酸、必需微量元素及各种维生素等[1]；石榴皮含有苹果酸、枸椽酸以及大量的黄酮类化合物[2]。而黄酮类化合物既有保健功能，又有药理价值，无论是在清除自由基方面，还是在抗癌、防癌方面都有着到不容小觑的作用。

随着科研技术的发展，黄酮类化合物的提取测定方法也多种多样，其中可以单独使用的方法有超声提取法、微波法、有机溶剂浸提法及超临界提取等[3-6]。目前，紫外分光光度法、高效液相色谱法及颜色判别法是黄酮分离及鉴定的重要途径[7]。经过科学研究证明，超声波乙醇法提取黄酮的得率最佳[8-9]，本试验即采用超声波乙醇法并结合分光光度来测定黄酮含量。本试验对石榴皮的黄酮类化合物进行提取测定和工艺优化，为今后石榴皮中黄酮类化合物的提取提供一定的理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器 试验材料为新鲜采摘的普通胭脂红石榴。挑选无病虫害的洗干净进行人工去皮，去隔瓤后切成小片，置于烘箱中70～80℃下3～5h烘干、碾碎，再用过滤网过滤，最后密封保存于干燥避光处待用。试验仪器：FAI204B电子分析天平、KQ-200KDB型高功率数控超声波清洗器、电热恒温鼓风干燥箱、16s紫外可见分光光度计、石英比色皿、具塞比色管、容量瓶、研钵、漏斗、具塞三角瓶等。

1.2 试验方法

1.2.1 黄酮类化合物的提取 采用超声波乙醇提取法。芦丁标准曲线的制备：精密吸取0.032mg/mL的芦丁标准溶液0、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分别放至6个10mL的具塞刻度试管中（带标签），用60%乙醇定容至10mL，轻轻震荡使其均匀。用标准管在紫外分光光度计进行吸收光谱扫描（扫描波长范围为190～400nm），测出芦丁的最大吸收波长为258nm，因此本实验在258nm下直接测定吸光值。数据记录见图1。

1.2.2 石榴果皮黄酮类化合物的测定方法

1.2.2.1 石榴皮中黄酮类化合物提取的单因素试验 精确称取1.000 0g石榴皮粉末，对乙醇体积分数、提取时间、料液比3个因素设计不同水平进行单因素试验，在258nm下测定吸光值，考察各因素对总黄酮含量影响。各因素水平如表1所示。

1.2.2.2 石榴皮中黄酮类化合物提取的正交试验 在单因素试验的基础上，选择合适的乙醇体积分数、料液比、提取时间，设计3因素3水平，进行L9（33）正交试验并进行方差分析；选取最优方案进行验证试验，通过计算则可得出石榴皮在最佳条件下的黄酮类化合物含量。

1.3 数据处理 采用SPSS进行试验数据分析。

2 结果与分析

2.1 正交试验结果分析 由表2可知：以测得其吸光值为参考指标时，影响石榴皮中黄酮类化合物提取因素的主次顺序为：乙醇体积分数>提取时间>料液比。而在提取时间40min、料液比1∶40、乙醇体积分数70%时，提取的石榴皮的黄酮类化合物含量最高。由表3方差分析结果可以看出，在山胭脂红石榴黄酮类化合物提取过程中，A提取时间对黄酮类化合物提取影响显著；C乙醇体积分数对黄酮类化合物提取有极显著影响；而B料液比则无显著影响。这与表2极差分析结果一致。

2.2 验证试验 以最适工艺A3B3C2，即提取时间40min、料液比1∶40、乙醇体积分数70%，进行石榴皮中黄酮类化合物提取优化工艺验证试验。由表4可知：石榴皮中黄酮类化合物的提取在最优工艺下均高于正交试验中任何一组试验，说明通过正交试验优化的提取工艺参数比较稳定，重现性好，适用于石榴皮中黄酮类化合物的提取。用紫外分光光度计测定得出其平均吸光值为0.601，黄酮类化合物的含量为148.09mg/g。

3 结论与讨论

本试验以胭脂红石榴果皮为原料，采用乙醇超声提取法，借助于正交试验对其黄酮类化合物提取工艺进行优化，并用最优提取工艺测定其黄酮类化合物含量。研究结果表明：最优提取工艺条件为：乙醇体积分数70%，提取时间40min，料液比1∶40，测得黄酮类化合物的含量为148.09mg/g。

关于黄酮类化合物的测定方法有多种，本试验采用的是乙醇超声提取法。许宗运[10]等研究发现石榴皮中平均总黄酮含量为66.5mg/g；刘素果[11]等采用了优化条件提取石榴皮中的黄酮类物质，研究发现石榴皮黄酮含量为131.74mg/g。与许宗运等的研究相比，本试验石榴皮黄酮类化合物含量偏高，可能是由于石榴品种、产地、成熟期、试验条件、仪器及人为因素误差等不同的影响所导致的。本试验测得的数据则对今后石榴皮黄酮的提取研究测定提供了一定的理论依据。

参考文献

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[8]朱远平，牟利辉.紫外分光光度法測定金柚柚皮中总黄酮的含量[J].嘉应学院报，2006，3（6）：51-54.

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[10]许宗运，蒋慧，吴静，等.石榴皮和石榴渣总黄酮含量的测定[J].中国农学通报，2003，19（3）：73-75.

[11]刘素果.石榴果皮总黄酮的提取工艺[D].合肥：安徽农业大学，2010.