木鳖子中丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯测定*

郑 蕾，申旭霁，张 寒，张 彦，汪兴军

(西安医学院 药学院 药物研究所，陕西 西安 710021)

木鳖子为葫芦科植物木鳖Momordicacochinchinensis(Lour.)Spreng.的干燥成熟种子，具有散结消肿、攻毒疗疮之功效[1]。始载于宋《开宝本草》，是蒙医的习用药材，主要含脂肪酸类[2]、皂苷类[3]、木鳖子素[4]、α-菠菜甾醇、木鳖子酸[5]等。蒙医用于治疗食欲不振、恶心、偏头疼等症见希拉症[6]，中医多外用治疗癣[7]、痔疮[8]等，现代研究显示其具有抗肿瘤[9-10]、抗炎[11]、抗病毒等作用。木鳖子是一味毒性药材，多供外用，很少内服，内服多进行相应的炮制后再入方剂，主要有两种炮制方法，制霜[1]和去壳[12]。目前，对木鳖子炮制方法及原理的研究报道较少。丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯是木鳖子皂苷降解后的次级苷[13]，作者期望通过对木鳖子种壳和种仁中丝石竹皂苷-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯进行含量测定，并以此为基础为木鳖子药材炮制方法研究提供支持。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

木鳖子药材：购买自西安天昦中药材市场，经生药教研室张寒副教授鉴定为木鳖子；丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯：批号111956-201301，纯度为97.5%，中国食品药品检定研究院；甲醇：色谱纯，市售；其余试剂均为分析纯，市售；实验所用水为超纯水。

电子分析天平：QVINTIX-1CN，赛的利斯科学仪器有限公司；恒温水浴箱：HSY2-SP，北京市永光明医疗仪器厂；超纯水机：Micro pure standard，赛默飞世尔科技(中国)有限公司；超声清洗器：KQ-250B，昆明市超声仪器有限公司；高效液相色谱仪：Agilent 1220，安捷伦科技有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent HC-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)，流动相：甲醇-φ(甲酸)=0.2%水溶液(体积比为78∶22)，流速：1 mL/min；UV检测波长：210 nm，柱温：室温，进样量：10 μL。在该色谱条件下，丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯与木鳖子中其它成分得到较好的分离，无干扰，专属性强，结果见图1。

t/minb图1 丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯对照品(a)和木鳖子供试品(b)色谱图

1.2.2 对照品溶液配制

精密称取丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯标准品约10 mg，置于10 mL的容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，制成1 mL含1.03 mg的溶液，即得。

1.2.3 供试品溶液配制

取木鳖子仁粗粉2.0 g，精密称定于滤纸筒中，置索氏提取器中，加石油醚(60～90 ℃)-氯仿(体积比为1∶1)80 mL，回流提取1 h，滤过，弃去滤液，滤渣挥干溶剂，转移至锥形瓶中，加体积分数为60%甲醇60 mL超声提取1 h，超声温度40 ℃，滤过，滤液蒸干。残渣加水10 mL溶解并转移至具塞试管中，加浓硫酸0.6 mL，摇匀，闭塞。置沸水浴加热2 h，取出，放冷，滤过。弃去滤液，试管中沉淀加甲醇少许洗至10 mL量瓶中，滤纸上的沉淀加甲醇8 mL，洗至同-10 mL量瓶中，加硫酸一滴，调pH=2；密塞，60 ℃恒温水浴4 h，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。

2 结果与讨论

2.1 方法学考察

根据《中国药典》2015版(四部)药品质量标准分析方法验证指导原则，考察样品的线性关系、精密度、重复性、加样回收及含量测定等。

2.1.1 线性关系考察

精密量取上述对照品贮备液5 mL，定容于10 mL量瓶中，摇匀，得质量浓度为0.515 mg/mL的溶液；再吸取该溶液5 mL，定容于10 mL量瓶中，摇匀，得质量浓度为0.258 mg/mL的溶液，依次稀释制备成质量浓度分别为0.129、0.064 4 mg/mL的系列对照品溶液。将上述对照品溶液按1.2.1色谱条件进行测定，以丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯峰面积为纵坐标(Y)，丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯对照品质量浓度为横坐标(X)绘制标准曲线，见图2。得到的线性回归方程为：Y=2 769.1X+126.48，相关系数r=0.999 7。结果表明丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯在6.44×10-2～1.03 mg/mL线性关系良好。

ρ/(mg·mL-1)图2 丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的标准曲线图

2.1.2 精密度实验

精密吸取质量浓度为0.129 mg/mL的丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定峰面积，计算RSD为1.97%。

2.1.3 重复性实验

精密称取相同批次的木鳖子仁粗粉6份，按1.2.3方法平行制备供试品溶液，进行测定，计算得w(丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)分别为0.301%，0.305%，0.297%，0.305%，0.303%，0.299%，RSD为1.06%(n=6)。

2.1.4 稳定性实验

按1.2.3方法制备供试品溶液，将供试品溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室(4 ℃)中，在0、1、2、3、5、7 d分别平行测定2次w(丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)。丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯各时间点测定的质量分数均未超过0 d质量分数值±5.0%，表明供试品溶液在7 d内稳定性良好，稳定性实验结果见表1。

表1 稳定性实验结果

2.1.5 加样回收实验

分别精密称取已知质量分数为0.305%的样品6份，每份约1 g，分别精密加入丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯对照品溶液(1.53 mg/mL)1 mL，即1.53 mg，按1.2.3方法制备溶液，测定其峰面积，计算回收率。结果平均回收率为99.30%，RSD为1.02%(n=6)。表明该方法的回收率良好，详见表2。

表2 加样回收率实验结果(n=6)

2.2 丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯测定

按拟定的含量测定方法测定3批木鳖子种仁及种壳中w(丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)，结果见表3。

表3 木鳖子中w(丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)测定结果

3 结 论

研究发现丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯在木鳖子仁中含量较小，木鳖子壳中未检测到。通过前处理工艺的水解及甲醇解后木鳖子仁中w(丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)≈0.3%，而木鳖子壳中仍无法检测到。

采用本研究建立的方法，测定3批木鳖子仁、木鳖子壳中w(丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)，结果显示此方法测定结果准确，重复性好，操作简便，可作为木鳖子炮制工艺研究中质量控制的方法。

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