蜂胶手工皂的制作工艺研究

林晓云　公维洁　李结超　陈秋好

【摘 要】以芦丁为标准对照品，使用超声波处理提取法提取蜂胶手工皂中的黄酮，再用紫外分光光度法测定黄酮含量。结果表明，芦丁浓度与吸光度回归方程为 Y=0.0989X-0.0094，相关系数 R2= 0.9992，具有良好线性关系。通过精密度实验，计算RSD得值为0.3016%，说明仪器稳定性良好。通过重复性实验，计算得到1g、2g、3g、4g、5g不同含量的蜂胶手工皂的RSD分别为5.502%、1.861%、1.407%、0.8491%、0.4425%，说明数据准确性良好。最佳计算结果显示当蜂胶的添加量为3g，黄酮含量为108.6081mg/g，蜂胶手工皂达到最佳效果。

【关键词】蜂胶手工皂；紫外分光光度法；黄酮含量

手工皂是采用传统工艺纯手工制作的肥皂，它可以代替化学制成品用于清洁护理。手工皂在制作过程中，通常使用的是天然植物性油脂，不放任何化学添加剂，可以说是100%天然材料制成。在皂化过程中还会产生天然甘油，使其在皮肤上形成一层天然保护膜，对皮肤产生超凡的保湿效果。更为可贵的是，可在制作过程中添加各种活性成分如：各类精油、草本植物精华，以提高手工皂的功效，低温冷制工艺，能够保留这些天然材料中的营养成分，从而赋予手工皂更丰富的内涵[1-4]。此外，更重要的一点是手工皂是环保产品，使用后生成的脂肪酸钠易降解，不会对环境造成污染[5]。

蜂胶，拥有“紫色黄金”的美誉，营养成分丰富，被广泛用于日用化工产品中。具有抗菌、抗病毒、抗氧化和清除自由基、增强免疫力、抗肿瘤、降血糖与降血脂、抗辐射、止痒、排毒、遮光、护肤、促进组织再生和增强SOD活性等药理作用，蜂胶的化工产品可以改善皮肤的质量，使皮肤变得细腻光滑富有弹性[6]。在手工皂中添加蜂胶制成蜂胶手工皂，其目的是在使用过程中，具有去污效果的同时，还能达到蜂胶药理的功效。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

1.1.1 主要仪器

DHG-9245A型电热温鼓风干燥箱、HWS-26型超级恒温水浴槽、ES.1200-4型分析天平、TU-1901型双光束紫外可见分光光度计、X85-2S型恒温磁力搅拌器、Ju-6224型调节型超声波发生器。

1.1.2 主要试剂

橄榄油、椰子油、棕榈油、康富丽牌蜂胶软胶囊、氢氧化钠、无水乙醇、芦丁、硝酸铝、结晶氯化铝、亚硝酸钠。

1.2 实验步骤

1.2.1 手工皂的制作

本实验制作的手工皂为50克，油脂的比例为：橄榄油20%，椰子油20%，棕榈油60%。配方如表1所示：

称取氢氧化钠7.4g，加入17.4g蒸馏水，搅拌溶解。称取橄榄油10g、椰子油10g、棕榈油30g，放入恒温水浴槽中加热并搅拌，温度设定为42℃。待氢氧化钠溶液降到42℃时，缓慢加入到油脂中。搅拌至粘稠状，加入蜂胶1g，混匀后，将皂液倒入模具，用保鲜膜封好，放进保温箱，皂化36个小时，待手工皂变硬后，脱模。

按照以上步骤，分别制得0g、1g、2g、3g、4g、5g不同蜂胶含量的蜂胶手工皂。

1.2.2 对照品溶液制备

准确称取干燥恒重的芦丁对照品10mg，用无水乙醇溶解并定容至50mL，得到0.2mg/mL对照品溶液，冷藏备用。

1.2.3 硝酸铝-亚硝酸钠-氢氧化钠显色剂溶液的配制

1）10%Al（NO3）3溶液：称取10.0062g硝酸铝，取90mL去离子水，搅拌溶解，备用；

2）5%NaNO2溶液：称取5.0051g亚硝酸钠，取95mL去离子水，搅拌溶解，备用；

3）10%NaOH溶液：称取10.0038g氢氧化钠，取90mL去离子水，搅拌溶解，备用。

1.2.4 原材料处理

分別准确称取蜂胶手工皂2克，加入30mL无水乙醇溶液，进行超声波处理。处理后的液体放入冰水冷却后进行挤压渣滓，过滤，除去残余皂基，保留乙醇相。余渣另加10mL无水乙醇，再次进行超声波处理、挤压渣滓、过滤，反复2～3次，直至滤渣皂基基本发白，合并滤液，用无水乙醇定容至50mL，此为蜂胶手工皂样品待测试液。

1.2.5 最大吸收波长的研究

准确吸取1mL 0.2mg/mL的芦丁标准溶液于25mL容量瓶中，加入5%NaNO2溶液1mL，摇匀，静置6min，然后加入10% Al（NO3）3溶液1mL，摇匀，静置6min，再加入10%NaOH溶液10mL，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15min。以不加芦丁标准液的空白试剂为参比，在400-700nm波长范围进行波长扫描，得最大吸收波长。

1.2.6 蜂胶手工皂中黄酮含量的测定实验

1）芦丁标准曲线

准确吸取芦丁标准溶液0.00mL，1.00mL，2.00mL，3.00mL，4.00mL，5.00mL，6.00mL，分别置于25mL容量瓶中，分别加5%NaNO2溶液1mL，摇匀，静置6min，然后加入10%Al（NO3）3溶液1mL，摇匀，静置6min，再加入10%NaOH溶液10mL，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15min。以不加芦丁标准液的空白试剂为参比，在508nm波长处测定吸光度。

以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程。

2）蜂胶手工皂皂基干扰实验

分别准确移取不同含量的手工皂样品溶液10mL各1份，分别置于50mL容量瓶中，分别加5%NaNO2溶液1mL，摇匀，静置6min，然后加入10%Al（NO3）3溶液1mL，摇匀，静置6min ，再加入10%NaOH溶液10mL，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15min。以不加芦丁标准液的空白试剂为参比，在508nm波长处测定吸光度。

3）蜂胶手工皂中黄酮含量的测定

分别准确移取不同含量的蜂胶手工皂样品溶液10mL各1份，分别置于50mL容量瓶中，分别加5%NaNO2溶液1mL，放置6min，然后加入10%Al（NO3）3溶液1mL，放置6min，再加入10%NaOH溶液10mL，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15min。以什么试剂都不加，只加样品溶液为参比，在508nm波长处测定吸光度。代入回归方程求出对应芦丁含量的浓度，计算出黄酮含量。

4）精密度试验

准确移取2mL 0.2mg/mL芦丁供试品溶液置于25mL容量瓶中，加5%NaNO2溶液1mL，摇匀，静置6min，然后加入10%Al（NO3）3溶液1mL，摇匀，静置6min ，再加入10%NaOH溶液10mL，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15min。以空白试液为参比，在波长508nm处测定吸光度，平行测定5次。

5）重复性实验

准确称取蜂胶加入量为1g的蜂胶手工皂2g，平行称取5次，并标号1、2、3、4、5，按照1.2.4原材料的处理方法进行处理，得到处理后的样品溶液，然后分别准确移取1号至5号的样品液10mL，置于50mL容量瓶中，分别加5%NaNO2溶液1mL，摇匀，静置6min，然后加入10%Al（NO3）3溶液1mL，摇匀，静置6min，再加入10%NaOH溶液10mL，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15min。以什么试剂都不加，只加样品溶液为参比，在508nm波长处测定吸光度。

按照以上方法，分别测定蜂胶加入量为2g、3g、4g、5g的蜂胶手工皂的吸光度值。

1.2.7 黄酮含量的对比

根据所得实验数据，以蜂胶添加量为横坐标，黄酮含量为纵坐标，绘制图形。

2 结果与分析

2.1 蜂胶手工皂的制备

产品外形光滑整齐， 色泽均匀，恒重数据见表2。

2.2 最大吸收波长的确定

如图1所示，在508nm处有最大吸光度，所以选择波长在508nm测定。

2.3 芦丁标准曲线的绘制

由所测实验数据，得到回归方程Y=0.0989X-0.0094，r2=0.9992。实验表明，芦丁含量在0.0～1.2mg/mL与吸光度呈现良好的线性关系。

2.4 皂基干扰实验

由表3可知：没有加蜂胶的样品液也有吸光度，主要是受皂基的影响，显现出皂基的颜色。所以本实验用的参比溶液选择什么试剂都不加，只加样品溶液。

2.5 蜂胶手工皂中黄酮含量的测定

将实验所测吸光度带入标准曲线回归方程Y=0.0989X-0.0094，求出对应芦丁含量的浓度，再代入公式：

得出不同含量的蜂胶手工皂中总黄酮的含量如表4所示：

2.6 精密度实验

由表5中实验测数据可见， RSD值为0.3016%，说明仪器的稳定性良好。

2.7 重复性实验

由表6可知，1g、2g、3g、4g、5g不同含量的蜂胶手工皂的RSD分别为5.502%、1.861%、1.407%、0.8491%、0.4425%，说明数据的准确性良好。

2.8 黄酮含量的对比

根据所得实验数据，以蜂胶添加量为横坐标，黄酮含量为纵坐标，绘制图形。系列1表示手工皂中黄酮含量随蜂胶添加量的变化曲线，系列2表示理论黄酮含量随蜂胶添加量的变化曲线。如图所示，黄酮含量随着蜂胶添加量的增加呈比例上升，表现出相应的线性关系。将所测值和理论值进行比较，实验数据相差不大。说明在手工皂制作过程中，蜂胶有效成分的损失较小。

2.9 最佳含量的确定

在使用蜂胶手工皂过程中，若想体现蜂胶的最大功效，必须找出一个蜂胶手工皂中黄酮含量的最佳值。由文献知化工产品中加入1-5%的蜂胶，才能达到保护皮肤、清除体表污垢、预防外在感染以及其它医疗保健功效[7]。根据所测得的数据，当蜂胶的添加量为3g，黄酮含量为108.6081mg/g时，蜂胶手工皂的效果达到最佳，结果见表7：

3 结论

本文采用紫外分光光度法，以芦丁标准试液为对照品，以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为缓冲溶液的显色体系，分别于508nm处分别测定蜂胶手工皂中的黄酮含量，建立了黄酮浓度吸光度关系的回归方程Y=0.0989X-0.0094（R2=0.9992）。

测得1g至5g不同含量的蜂膠手工皂中黄酮含量分别为31.1719mg/g、68.3090mg/g、108.6081mg/g、147.2818mg/g、186.5615mg/g；与理论值40mg/g、80mg/g、120mg/g、160mg/g、200mg/g对比相差不大，其原因在于进行超声波处理后，过滤时有少量的黄酮存在皂基中，没有过滤出来。精密度实验的RSD为0.3016%，1g-5g不同含量的蜂胶手工皂的重复性实验的RSD分别为5.502%、1.861%、1.407%、0.8491%、0.4425%，实验数据表明精密度及重复性的效果良好。结合文献及实验结果得出：蜂胶的添加量为3g，黄酮含量为108.6081mg/g时，蜂胶手工皂的效果达到最佳。本文对蜂胶手工皂的制作及工艺进行研究，数据可靠，为以后蜂胶手工皂的开发和评价提供科学的参考依据。

【参考文献】

[1]张晓蓉，陈功锡，徐定华，等.新型黄花蒿保健香皂工艺研制及品质评价[J].天然产物研究与开发， 2013，25： 1550-1554.

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[6]刁青云，闫继红，吴杰.蜂胶的研究进展[J].蜂胶科技，2003（6）：19-22.

[责任编辑：朱丽娜]