一种用于子宫内膜病变筛查的细胞块制作方法及质量控制

邵少慰，梁少姬，李文成，罗巧明，梁储财，陈裕章，陈连红

一种用于子宫内膜病变筛查的细胞块制作方法及质量控制

邵少慰，梁少姬，李文成，罗巧明，梁储财，陈裕章，陈连红

子宫内膜癌；筛查；细胞块；石蜡切片；质量控制

当前，脱落细胞块技术是细胞学发展的方向之一，即将采集于自然管腔、器官表面或黏膜面，自然或人为脱落的细胞经离心，将细胞和微小组织块高度浓缩后用固定剂凝聚，再经脱水、石蜡包埋、染色等步骤制成切片[1-4]，进一步观察诊断。本文用子宫内膜采集器采集子宫内膜细胞样本，应用细胞块技术制成HE切片，这种切片的观察效果远比子宫内膜脱落细胞手工抹片或液基细胞学制片(endometrial cytological test, ECT)要好，其诊断价值更有优势[5]。现介绍一种简易的用于子宫内膜病变筛查的细胞块制作方法及质量控制过程。

1 材料与方法

1.1 材料 SPA-1子宫内膜采集器(北京赛普九州公司)，标本保存瓶和保存液(主要成分为10%中性福尔马林)，PBS，圆底离心管，一次性吸管，震荡器，低速离心机，自制塑料小铲，1%麝香草酚蛋清液(防腐、凝固剂，作为细胞骨架介质)，HE染色液，巴氏染色液和冰箱。

1.2 方法

1.2.1 取材 使用SPA-1子宫内膜采集器采集子宫内膜细胞样本，剪断采集器的采集环，将采集环及包含的细胞样本投入到保存瓶中保存，摇动保存瓶，使瓶内采集环上的细胞充分涮洗到保存液中，保存液呈混悬状，完成样本的采集。

1.2.2 标本处理 核对标本并编号，摇匀保存瓶，再将保存瓶内的液体倒入离心管内800～1 000 r/min离心10 min，除去上清液后加入缓冲液，摇匀，吸取离心管内约1/3的无明显悬浮物的细胞悬液，按沉降式制片法制作一张液基细胞巴氏染色涂片作对照；将离心管内余下2/3的细胞悬液进行离心，吸去大部分上清液，向离心管内滴入0.6～1 mL流质状的麝香草酚蛋清液，混匀并使样本内细胞均匀分散在蛋清液中，再沿着离心管壁加入10%中性福尔马林1～3 mL，离心管内的蛋清变成胶冻状，再次离心，除去上清液后放入冰箱冷冻约20 min，温度-4 ℃，待离心管底部样本结成冻块状，用塑料小铲推动并将冻块剔出，用滤纸包埋，常规固定、脱水后制得石蜡细胞块，切片并行HE染色。

1.3 诊断结果的评估标准 采用双盲法由两名细胞病理学诊断医师独立阅片，子宫内膜细胞块切片和ECT涂片评估均参照经典子宫内膜四级分类诊断系统[6-8]：(1)未见上皮内病变及恶性细胞(正常子宫内膜)；(2)良性增生性病变(包括子宫内膜炎症或息肉、不规则增生、单纯性增生和复杂性增生)；(3)子宫内膜非典型增生(包括子宫内膜非典型增生和上皮内病变)；(4)癌变。

1.4 质量管理标准

1.4.1 标本及制片满意的标准 (1)申请单项目填写完整，有相关临床资料；(2)标本瓶标记清晰，标本液无溢出或渗漏现象；(3)制片有足够数量的子宫内膜组织小片段(至少有5～6个内膜腺体和间质成分或腺上皮细胞群，萎缩期子宫内膜可呈片状子宫内膜间质成分为主)，并且保存完好；(5)有异常细胞的标本均判定为满意标本；(6)染色效果好。

1.4.2 标本及制片不满意的标准 (1)申请单填写缺项；(2)标本瓶无明确标记，标本瓶无拧紧，标本液溢出过半；(3)制片的细胞过度重叠，有血液、炎性细胞或污染物覆盖，影响超过75%以上的腺细胞观察；(4)保存完好的子宫内膜组织片段的腺体数﹤5个(萎缩期子宫内膜除外)；(5)细胞挤压变形明显；(6)染色效果差。对前两项应在申请单上标明原因并直接拒绝接收标本，对后4项不满意的制片均在报告单上说明原因，建议重新取材送检。

2 结果

2.1 细胞块切片HE染色观察 子宫内膜细胞块切片可见带有子宫内膜组织结构的片段，显示清晰的腺体形态，能大致判断腺体与间质的密度，背景清晰，能识别子宫内膜不同生理状态、良性病变、非典型增生及癌变。

2.2 ECT涂片巴氏染色观察 背景干净，已去除炎细胞、血液等大部分杂质，可见散在的子宫内膜腺上皮或间质细胞，或成簇状、紧密连接的蜂窝状或管状腺体，有平坦的层状或三维结构，但由于液基细胞制片采用的自然沉降法，会出现细胞单个散在分布或较多成团细胞高度聚集、堆积重叠现象，不利于观察和诊断评估，容易出现过度诊断或漏诊的情况。

3 讨论

3.1 技术特色和优势 目前，子宫内膜癌筛查主要采用子宫内膜采集器取样，多采用手工涂片或液基细胞制片，但因易出现细胞过于分散或密集、重叠成片现象，阅片时有较大难度，使看惯了组织病理切片的病理医师很难把握子宫内膜细胞学诊断的尺度，需要培训专门的细胞病理学医师来阅片，这成为子宫内膜细胞学检查广泛用于子宫内膜癌筛查的障碍之一。

本文将子宫内膜细胞样本制作成子宫内膜细胞块，其HE切片既可看到子宫内膜散在脱落的腺细胞成分，也可见到更多微小的子宫内膜组织片段，没有腺体堆积重叠现象，能直观的辨别内膜腺体的形态、类型，以及周围间质的改变，其背景更清晰，易于观察，这更符合病理医师的阅片及诊断习惯，容易正确评估子宫内膜良性病变、非典型增生及癌变。同时，制成的细胞块可长期保存，也可对有病变的样本再作连续切片观察，或进一步作免疫细胞化学染色，甚至分子病理检测来协助子宫内膜肿瘤的分类诊断。

3.2 提高质控水平 本文用子宫内膜采集器获取的微量子宫内膜成分至阅片、诊断的整个技术流程，均注重提高子宫内膜癌筛查的质控水平。首先，本实验自制的蛋清液既经济易得，其中加入了麝香草酚起到防腐作用，又可以长时间在冰箱冷藏，随时备用；麝香草酚蛋清液主要是作为样本的细胞骨架媒介，使样本内的细胞充分混合、凝聚，冷冻后结块。其次，用粗的饮料吸管剪成可弯曲的喇叭形小铲，便于顺着离心管的圆底将冻块状的样本推移并完整剔出来，包裹后装入脱水盒进行脱水处理。这些步骤均可最大限度减少在标本转移过程中有效细胞的流失量控制。将细胞块HE切片与液基细胞巴氏涂片以双盲法分别加以评估，相互对照，对于后续有诊断性刮宫或子宫切除的病例，与病理组织活检结果作对照，可以提高诊断子宫内膜病变的准确性。

3.3 拟解决的关键问题 妇科取材医师应熟悉标本取材的环节，保证取得满足诊断的标本。但是，由于子宫内膜采集器取得的脱落细胞成分有限，与诊断性刮宫等内膜活检比较，其诊断信息相对具有局限性，故需总结经验，制定更利于判断子宫内膜细胞块切片的诊断评估模式。

总之，子宫内膜细胞块技术对受检者而言属于微创或者无创，从技术流程而言有利于提高从标本制作到诊断的质控水平，提高诊断的准确度，是今后子宫内膜良性病变乃至癌变筛查的方向。

[1] 林 静. 脱落细胞学的细胞块制作及应用的研究进展[J]. 医学综述, 2014,20(15):2739-2740.

[2] Queiroz C, Barral-Netto M, Bacchi C E. Characterizing subpopulations of neoplastic cells in serous effusions. The role of immunocytochemistry[J]. Acta Cytol, 2001,45(1):18-22.

[3] 王永生, 李玉林, 任玉波. 介绍一种新的细胞块制作方法[J]. 临床与实验病理学杂志, 2006,22(1):99-100.

[4] 柳玮华, 余小蒙, 周小鸽. 凝血酶细胞块简捷制备法[J]. 临床与实验病理学杂志, 2007,23(6):721.

[5] 文 佳, 廖秦平. 子宫内膜细胞块在子宫内膜癌筛查和早期诊断中的作用[J]. 实用妇产科杂志, 2015,31(7):490-492.

[6] 赵 健. 子宫内膜细胞学诊断系统[J]. 中国生育健康杂志, 2006,17(1):6-8.

[7] Maksem J A, Meiers I, Robboy S J. A primer of endometrial cytology with histological correlation[J]. Diagn Cytopathol, 2007,35(12):817-844.

[8] 陈 锐, 任玉波, 文 佳. 子宫内膜细胞学评价系统探讨[J]. 实用妇产科杂志, 2015,31(7):484-485.

肇庆市科技创新计划项目(2014E286)

广东省肇庆市第二人民医院病理科，肇庆 526060

邵少慰，女，主任医师。E-mail: shaoweishao@163.com

时间：2017-6-20 11:19 网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170620.1117.027.html

R 737.3

B

1001-7399(2017)06-0696-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.06.027

接受日期：2017-01-16