抗血管紧张素II 1型受体自身抗体与原发性高血压患者合并急性冠状动脉综合征发病风险的分析

孙艳香，陶军，冯力，袁勇，黄炫生，张励庭

冠心病研究

抗血管紧张素II 1型受体自身抗体与原发性高血压患者合并急性冠状动脉综合征发病风险的分析

孙艳香，陶军，冯力，袁勇，黄炫生，张励庭

目的：探讨抗血管紧张素II 1型（AT1）受体自身抗体（AT1-AAs）与原发性高血压患者合并急性冠状动脉综合征（ACS）的发病风险。

急性冠状动脉综合征; 高血压; C反应蛋白质；自身抗体

(Chinese Circulation Journal, 2017,32:149.)

抗血管紧张素Ⅱ1型（AT1）受体自身抗体（AT1-AAs）具有拟血管紧张素Ⅱ （AngⅡ） 的效应，参与血管平滑肌细胞内激酶的激活，并引起细胞增殖、血管重构等一系列反应[1，2]。近来，李大强等[3]表明AT1-AAs阳性组狭窄病变例数显著高于阴性组，认为AT1-AAs阳性是冠心病的危险因素之一，从而提示AT1-AAs对冠心病有一定的预测价值。Perrone-Filardi等[4]研究则表明AT1受体和β受体阻断剂合用可以改善高危险性高血压患者的血管内膜功能。上述结果显示AT1-AAs在高血压以及冠状动脉疾病的发生发展中起着重要作用。而急性冠状动脉综合征（ACS）中，冠状动脉粥样硬化斑块不稳定与斑块内炎症因子的激活、所处血管管壁张力的变化以及环境因素等相关[5，6]。结合前述已有研究，我们分析在高血压合并ACS患者中，该自身抗体是否通过其拟AngⅡ效应如促进炎症因子的表达而进一步促进ACS患者斑块的不稳定及ACS的发生发展？本试验提出并旨在阐明AT1-AAs与高血压患者合并ACS的患病风险之间的关系。

1 资料与方法

研究对象选择：2009-06至2009-12期间收住本院心内科患者共83例，其中高血压合并ACS （高血压＋ACS组）28例、单纯ACS（ACS组）29例、单纯高血压（高血压组）26例；另选门诊体检中心健康者为正常对照组23例。

诊断标准：（1）ACS诊断标准：根据美国心脏病协会（AHA）标准[7]定义为出现静止性心绞痛、新发心绞痛或进行加重的心绞痛，心电图出现ST段压低或T波倒置，心肌坏死标志物如肌钙蛋白T或I（TnT或TnI）或肌酸激酶同工酶（CK-MB）升高，ST段抬高则可能发展至Q波性心肌梗死。（2）高血压诊断标准按2005年中国高血压防治指南定义为: 静坐休息5 min以上，重复测2次以上上臂血压，收缩压≥140 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）和（或）舒张压≥90 mmHg， 或在服降压药情况下血压正常；（3）糖尿病的定义为糖尿病的症状加随机血糖≥11.1 mmol/L，或空腹血糖≥7.0 mmol/ L，或口服葡萄糖耐量试验中2 h血糖≥11.1 mmol/L（至少测量2次以上） 。

资料采集：患者的一般资料包括性别、年龄、高血压、糖尿病病史、吸烟史、血糖、血脂及血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平等。所有患者经病史、体检、超声心动图及实验室检查，排除各种心肌病、心脏瓣膜病及继发性高血压病和伴有严重威胁生命疾病的病例。

研究方法：（1）多肽抗原的制备及AT1-AAs 的检测：采用固相多肽合成法，用PSSM28 型多肽自动合成仪（日本SHIMADZU 公司） ，合成具有抗原决定簇AT1受体胞外第二环肽肽段[2]，AT1 受体肽段氨基酸序列为: His-Trp-Ile-His-Arg-Asn-Val-Phe-Phe-Ile-Glu-Asn-Ile-Thr-Val-Cys-Ala-Phe-His-Tyr-Glu-Ser-Gln-Asn-Ser-Thr-Leu（AT1受 体165-191位氨基酸残基） ，高压液相色谱分析合成肽的纯度> 95 %。酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清中AT1-AAs，受体抗原的包被浓度为100 mg/ml，血清稀释液度为1∶40，辣根过氧化物酶标抗体（海泰生物制药公司） 稀释浓度为1∶2000 ，抗体定性判断以P/ N ≥2.1为阳性[ P/N=（标本吸光度值-空白对照吸光度值） / （阴性对照吸光度值- 空白对照吸光度值） ]。（2）其它血生化指标的检测：包括空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、hs-CRP等。

2 结果

各组一般临床资料比较（表1）：四组比较吸烟史、AT1-AA、hs-CRP、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖差异均有统计学意义（P均<0.05）。

不同组间一般临床资料两两比较（表1）：（1）AT1-AAs：高血压+ACS组及高血压组其血清AT1-AAs水平则显著高于正常对照组，同时高血压+ACS组也明显高于高血压组；（2）血清hs-CRP：正常对照组明显低于高血压+ACS组及ACS组；（3）TC: 正常对照组及高血压组明显低于高血压+ACS组及ACS组；（4）LDL-C:正常对照组及高血压组明显低于高血压+ACS组及ACS组；（5）HDL-C: 正常对照组高于高血压+ACS组及ACS组；（6）空腹血糖: 正常对照组明显低于高血压+ACS组及ACS组，差异均有统计学意义（P均<0.05）。

表1 各组一般临床资料比较（）

表1 各组一般临床资料比较（）

注：ACS：急性冠状动脉综合征；AT1-AA：抗血管紧张素ⅡI型受体自身抗体；hs-CRP：超敏C反应蛋白；TC：胆固醇；LDL-C：低密度脂蛋白胆固醇；HDL-C：高密度脂蛋白胆固醇；TG：甘油三酯。*：光密度值。与正常对照组比较aP≤ 0.05;bP< 0.01;与高血压组比较cP< 0.05

项目 正常对照组(n=23)高血压+ACS组(n=28) ACS组(n=29)高血压组(n=26) P值男性[例 (%)] 15 (65.22) 21 (75.00) 25 (86.21) 16 (62.50) 0.211年龄[岁] 48.22±9.18 62.36±10.73 58.09±10.42 61.13±11.96 0.082糖尿病[例 (%)] 1 (4.35) 5 (17.86) 4 (13.79) 3 (11.54) 0.156吸烟史[例 (%)] 5 (21.74) 20 (71.43)b 20 (68.97)b 7 (26.92) 0.000 AT1-AAs* 0.21±0.06 0.40±0.05bc 0.26±0.09 0.33±0.10a 0.001血清hs-CRP (mg/L) 1.18±1.08 4.89±1.93b 4.72±1.37a 3.03±1.76 0.018 TC (mmol/L) 4.60±0.68 5.57±0.98ac 5.61±1.01ac 4.87±1.04 0.035 LDL-C (mmol/L) 2.43±0.53 3.70±0.84ac 3.97±0.70ac 2.59±0.83 0.024 HDL-C (mmol/L) 1.59±0.33 1.21±0.30a 1.22±0.32a 1.49±0.28 0.046 TG (mmol/L) 1.22±0.48 1.88±1.52 1.52±1.18 1.52±0.57 0.249空腹血糖 (mmol/L) 5.13±0.96 7.05±2.83b 7.15±1.82b 5.98±1.16 0.002

多元线性回归分析（表2）：AT1-AA与血清hs-CRP、血糖、血脂的多元线性回归分析表明仅血清hs-CRP与AT1-AAs呈正相关（r=0.406， P<0.01）。

不同组间AT1-AA与血清hs-CRP的线性相关性分析（表3）：进一步对各组间AT1-AAs水平与血清hs-CRP表达进行分析，提示在高血压＋ACS组、ACS组及高血压组中，其AT1-AA水平与血清hs-CRP表达呈明显正相关（r分别为0. 589、0.503、0.273，P均<0.01）。

表2 抗血管紧张素ⅡI型受体自身抗体与血清超敏C反应蛋白、血糖、血脂的多元线性回归分析

表3 不同组间抗血管紧张素ⅡI型受体自身抗体与血清超敏C反应蛋白的线性相关性分析

3 讨论

AT1-AAs在原发性高血压患者血清中检出率明显高于正常血压者，且该自身抗体具有明显的激动样生物学效应，如促进细胞内信号分子和原癌基因的表达致细胞增殖、致胞内钙增加及血管壁的重构、炎症因子表达等[1，2，8-12]。另外，长时间AT1-AAs免疫大鼠后可观察到其致主动脉内膜功能失调，血管内皮细胞分泌内皮素（ET）-1及细胞间黏附分子（ICAM）-1水平显著增高[13]。关于该自身抗体其产生机制，最近有研究表明妊娠高血压患者AT1-AAs的产生可能与胎盘灌注不足、缺血缺氧所致血管内皮功能受损、局部炎症有关，且产生的AT1-AAs激活AT1受体而介导妊娠高血压的发生发展，该研究还表明AT1-AAs水平与疾病严重程度呈正相关[14]。同时既往资料显示，高血压病程及家族史与AT1-AAs阳性率呈明显正相关[15]，提示长时间血压升高可能导致血管内膜受损，自身抗原暴露，导致自身T细胞免疫功能的失调导致抑制性T细胞减少而自身反应性T细胞激活等最终至自身抗体产生[16]。本研究结果也表明，高血压组及高血压+ACS组AT1-AAs水平明显高于正常对照组，差异有统计学意义； ACS组其AT1-AAs表达也高于正常对照组，但差异未达统计学意义。因此，本研究结果表明AT1-AAs与单纯ACS的发生可能无明显相关性，同时也不排除收集样本少所致统计学差异不显著；但在合并高血压情况下，AT1-AAs与ACS发病呈明显正相关，考虑可能与长期血压升高所致的血管内膜受损基础上，同时伴有AT1-AAs明显升高的状态下，该自身抗体促进受损血管内膜炎症因子释放、局部血小板聚集及血管收缩等，从而局部斑块形成、破裂而致ACS。结果表明AT1-AAs可能是高血压患者ACS发生的独立危险因素。

研究表明，多种炎症因子及免疫机制参与冠状动脉粥样硬化及其斑块形成[6，17，18]， 胞内核转录因子（NF）-κB及活化蛋白-1（AP-1）核转录因子活化并介导促炎因子肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等分泌，IL-6继而通过炎症因子的级联放大效应促进多种炎症因子，其中包括C反应蛋白（CRP）水平的显著增加。同时已有资料显示CRP是冠心病及ACS的发病风险的独立危险因素[19，20]。而既往研究也阐明AT1-AAs通过活化细胞内NF-κB及AP-1两个重要的核转录因子而介导血管炎症反应[4]。因此，本研究进一步阐明了AT1-AAs与高血压合并ACS患者血清hs-CRP之间的关联性。结果表明，高水平的AT1-AAs与血清hs-CRP表达呈明显正相关，在正常血压人群中两者无明显关联性。而AT1-AAs是否也通过该信号通路即活化细胞内NF-κB及AP-1，继而介导IL-6分泌，最终促进肝脏合成和分泌CRP，而致CRP升高则有待于进一步研究证实。

因此，本研究阐明了AT1-AAs与高血压合并ACS患者的发生呈明显正相关，即该自身抗体是高血压患者ACS发生的独立危险因素之一，且AT1-AAs水平与炎症因子血清hs-CRP表达也明显正性关联。本文的不足在于样本量较少，但结果已表明各组存在明显差异。所以，通过联合AT1-AAs和血清hs-CRP的检测可对临床上高血压合并ACS患者斑块稳定性的预测及疾病的发展起到一定的指导作用。

[1] Dechend R, Homuth V, Wallukat G, et al. Agonistic Antibodies Directed at the Angiotensin II, AT1 Receptor in Preeclampsia. J Soc GynecolInvestig, 2006, 13: 79-86.

[2] Sun YX, Zhang HY, Wei YM, et al. The mechanism of signal transduction during vascular smooth muscle cell proliferation induced by autoantibodies against angiotensin AT1 receptor from hypertension. Chin Med J, 2008, 121: 43-48.

[3] 李大强, 张惠琴, 林爱玲, 等. 抗血管紧张素Ⅱ1型受体抗体与冠状动脉粥样硬化性心脏病关系研究. 河北医学 , 2007, 13 : 883-885.

[4] Perrone-Filaroli P, Corrado L, Brevetti G, et al. Effects of AT1 receptor antagonism with candesartan on endothelial function in patients with hypertension and coronary artery disease. J Clini Hypertens, 2009, 11: 260-265.

[5] Libby P. Inflammation in atherosclerosis. Nature, 2002, 420: 868-874.

[6] Hansson GK. Inflammation, atherosclerosis, and coronary artery disease. N Engl J Med, 2005, 352: 1685-1695.

[7] Anderson JL, Adams CD, Antman EM, et a1．ACC/AHA2007 guidelines for the management of patients with unstable angina/ Non-ST-Elevation myocardial infarction: a mpon of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines(Writing Committee to Revise the 2002 Guidelines for the Management of Patients Witll Unstable Angina/Non-STElevation Myocardial Infarction) developed in collaboration with the Americ∞ College of Emergency Physicians, the Society for Cardiovascular Angiography and Interventions, and the Society of Thoracic Surgeons endorsed by the American Asseciafion of Cardiovascular and Pulmonary Rehabilitation and the Society for Academic Emergency Medicine．J Am Coll Cardio1, 2007, 50: e1-e157．

[8] Wang B, Liao YH, Zhou ZH, et al. Arterial structure changes in rats immunized by AT1-receptor peptide. Heart Vessels, 2005, 20: 153-158.

[9] Fu ML, Herlitz H, Schulze W, et al. Autoantibodies against the angiotensin receptor (AT1) in patients with hypertension. J Hypertens, 2000, 18: 945-953.

[10] Dechend R, Homuth V, Wallukat G, et al. AT1 receptor agonistic antibodies from preeclamptic patients cause vascular cells to express tissue factor. Circulation, 2000, 101: 2382-2393.

[11] Theingi MT, Sergiy GS, Mary-Clare D, et al. Antibodies from preeclamptic patients stimulate increased intracellular Ca2+mobilization through angiotensin receptor activation. Circulation, 2004, 110: 1612-1619.

[12] Zhu F, Sun YX, Liao YH, et al. Agonistic AT1 receptor autoantibody increases in serum of patients with refractory hypertension and Improves Ca2+mobilization in cultured rat vascular smooth muscle cells. Cell Mol Immunol, 2008, 5: 209-217.

[13] Zhang SL, Du YH, Wang J, et al. Endothelial dysfunction induced by antibodies against angiotensin AT1 receptor in immunized rats. Acta Pharmacol Sin, 2010, 31: 1381-1388.

[14] Zhou CC, Zhang YJ, Irani RA, et al. Angiotensin receptor agonistic autoantibodies inducepre-eclampsia in pregnant mice. Nat Med, 2008, 14: 855-862.

[15] 孙艳香, 朱峰, 王敏, 等. 原发性高血压患者血清抗a1受体和血管紧张素ATl受体自身抗体的临床观察. 中华心血管病杂志, 2008, 36: 16-19.

[16] 武恒. 大鼠肾性高血压与心脏受体自身抗体产生的关系. 山西医科大学学报, 2001, 32（增刊）: 100-102.

[17] Hansson GK, A Hermansson. The immune system in atherosclerosis. Nat Immunol, 2011, 12: 204-212.

[18] 毛节明, 王广. 动脉粥样硬化与炎症. 中国循环杂志, 2006, 21: 405-406.

[19] Danes HJ, Wheeler JG, Hirschfield GM, et al. C-reactive protein and other circulating markers of inflammation in the prediction of coronary heart disease. N Engl J Med, 2004, 350: 1387-1397.

[20] 刘梅林, 梁文奕. 高敏 C-反应蛋白在冠心病患者诊治中的临床意义.中国循环杂志, 2012, 27: 165-167.

Correlation Study Between Angiotensin II Type1 Receptor Autoantibodies and the Onset Risk in Patients With Essential Hypertension Combining Acute Coronary Syndrome

SUN Yan-xiang, TAO Jun, FENG Li, YUAN Yong, HUANG Xuan-sheng, ZHANG Li-ting.
Department of Cardiology, Zhongshan City People’s Hospital, Zhongshan (528400), Guangdong, China

SUN Yan-xiang, Email: syx1298509@163.com

Objective: To study the correlation between angiotensin II type1 receptor autoantibodies (AT1-AAs) and the onset risk in patients with essential hypertension (EH) combiningacute coronary syndrome (ACS).Methods: Our research included in 4 groups: EH+ACS group, n=28, ACS group, n=29, EH group, n=26 and Control group, n=23 normal subjects. Serum levels of AT1-AAs were examined by ELISA; high sensitivity C-reactive protein (hs-CRP), blood levels of lipids and glucose were also measured and compared among different groups. The correlations between AT1-AAs and blood lipids, glucose, hs-CRP were studied by multiple linear regression analysis.Results: Compared with Control group, ACS group had similar level of AT1-AAs (0.26±0.09) vs (0.21±0.06), P=0.105; while EH+ACS group and HE group had increased AT1-AAs level as (0.40±0.005) and (0.33±0.10), P=0.001 and P=0.02 respectively; AT1-AAs level was higher in EH+ACS group than HE group, P=0.044. In addition, serum AT1-AAs level was positively related to hs-CRP in EH+ACS group, ACS group and EH group (r=0.589, r=0.503 and r=0.273, all P<0.01).Conclusion: Serum AT1-AAs level was positively related to the onset risk in patients with EH combining ACS; AT1-AAs was also related to hs-CRP at certain degree.

Acute coronary syndrome; Hypertension; C-reactive protein; Autoantibody

2016-02-26）

（编辑：梅平）

中国博士后科学基金(20100470982)；广东省医学科学基金(B2010342)

528400 广东省，中山市人民医院 心血管内科（孙艳香、冯力、袁勇、黄炫生、张励庭）；中山大学附属第一医院高血压血管病科（陶军）

孙艳香 副主任医师 博士 主要从事心血管免疫相关研究 Email: syx1298509@163.com 通讯作者：孙艳香

R541.4

A

1000-3614（2017）02-0149-04

10.3969/j.issn.1000-3614.2017.02.009

方法：收集高血压合并ACS患者（高血压+ACS组）28例、单纯ACS患者（ACS组）29例、单纯高血压患者（高血压组）26例及正常对照组23例，采用酶联免疫吸附法对标本血清进行抗AT1受体抗体检测，分析并比较各组间AT1-AAs及血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）、血脂、血糖等水平，进一步通过多元线性回归分析各组间AT1-AAs与血脂、血糖及炎症因子血清hs-CRP表达的相关性。

结果：ACS组患者血清AT1-AAs水平较正常对照组升高（分别为0.26±0.09，0.21±0.06，P=0.105），但差异未达统计学意义；而高血压+ACS组(0.40±0.05)及高血压组(0.33±0.10)其血清AT1-AAs水平则显著高于正常对照组（ P=0.01和0.02）同时高血压+ACS组也明显高于高血压组（P=0.044）。另外，在除正常对照组外高血压＋ACS组、ACS组及高血压组中AT1-AAs水平与血清hs-CRP的表达呈正相关（r分别为0. 589、0.503、0.273，P均<0.01）。

结论：AT1-AAs与高血压合并ACS患者的发病风险呈正相关，尤其与炎症因子血清hs-CRP水平呈一定相关性。