淡黄花百合愈伤组织增殖最佳培养基的筛选

陈胜玉

摘 要：采用正交试验法，在MS固体培养基上研究不同浓度蔗糖、NAA及6-BA对淡黄花百合愈伤组织增殖的影响，结果表明，愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+1mg/LNAA+0.5mg/L6-BA+4%-5%蔗糖。

关键词：淡黄花百合；愈伤组织生长；正交试验

百合属的植物除具有极高的观赏价值外，还具有药用和食用价值，是我国卫生部审批通过的首批药食两用植物，不仅临床上有着广泛的应用，而且作为加工保健产品的原料也极具开发前景。淡黄花百合是一种药食两用的野生种，为多年生宿根草本植物，主要产于贵州省务川县，是百合开发的重要资源。但由于近年的大量开发和利用，导致野生淡黄花百合数量锐减，远远不能满足市场的需求。务川当地曾采用人工栽培的方法来解决供求问题，但效果不甚理想。由于百合组织培养繁殖与传统繁殖方法相比具有节省用材，繁殖速度快，病害少等优点，目前对百合组培快繁研究较多。因此我们想通过用组培方式来扩繁淡黄花百合。李黛、谈锋、祝顺琴对淡黄花百合的组织培养技术已做了一定的研究并成功地筛选出芽增殖的最佳培养基。本文介绍淡黄花百合愈伤组织增殖最佳培养基的筛选。

一、实验材料与方法

1.实验材料的获得

淡黄花百合采自贵州务川县野生林下。将新鲜鳞茎用自来水冲洗干净、分瓣，取中间层鳞片在自来水下用流水冲洗30min左右，于超净工作台上用75%的酒精浸泡10s左右，然后用0.1%的升汞消毒15min，再用无菌水冲洗5～10次。用严格灭菌的解剖工具切去鳞片的上部和下部，留下长约1cm的中下部，并将其接种在pH值为5.8的MS+0.5mg/L6-BA+1mg/LNAA+3%蔗糖固体培养基中，每瓶接种1～2个切段，在25℃的温度、1200lx的光照强度、12h/d的照光时间的条件下培养36天后可获得无菌丛生芽和愈伤组织。将所得的愈伤组织接种到MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+3%蔗糖的培养基中扩繁，即可得供试验用的材料。

2.实验方法

采用正交试验筛选愈伤组织增殖的最佳培养基。所用基本培养基为MS培养基。实验采用L9（3）4正交表，NAA、6-BA、蔗糖浓度三因素三水平的试验设计见表1，D因素为空列。

按正交表将各药品依浓度要求配成培养基，每一个组合配10瓶，灭菌后在无菌条件下将愈伤组织接种到培养基中，每瓶接0.5cm见方的愈伤组织1块，每组10个重复，接种好后用电子天平称重并记录。同样在25℃的温度、1200lx的光照强度、12h/d的照光时间的条件下培养。培养40天后再次用电子天平称重。用第二次称的重量减去第一次称的重量得出每瓶愈伤组织的净增重（mg/天·gFW）。

二、实验结果

淡黄花百合愈伤组织增殖正交试验L9（3）4结果及直观分析见表2。对试验结果进行直观分析可知6-BA浓度对淡黄花百合愈伤组织增殖的影响以0.5mg/L为最好，NAA以1mg/L为最好，蔗糖以5%为最好。

比较表2中三个因素的R值大小：A因素的R=0.37，B因素的R=1.79，C因素的R=0.72，B因素的R值比A、C因素的R值都大。因此判定B因素是影響淡黄花百合愈伤组织增生的主要因素，而A为次要因素，具体关系是：

三、实验结果讨论

从本次试验看，愈伤组织增殖较快，不易褐变。但在接种时应严格取材为愈伤组织，尽可能不要取到带芽的愈伤组织块。研究证明：6-BA浓度的差异对淡黄花百合愈伤组织增殖的影响以0.5mg/L为最好，NAA以1mg/L为最好，蔗糖以5%为最好。三个因素对淡黄花百合愈伤组织增生影响的大小顺序为：NAA>蔗糖>6-BA。蔗糖浓度的最佳浓度为5%，但是4%与5%对百合愈伤组织增殖的影响差异不大。从节约用材的角度考虑，蔗糖的浓度取4%～5%。故淡黄花百合愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+1mg/LNAA+0.5mg/L6-BA+4%-5%蔗糖。

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（作者单位：贵州省毕节市民族中学）