(新乡县农牧局,河南 新乡 453003)
实验室样品采集的一般要求及注意事项
牛可可,杨繁
(新乡县农牧局,河南 新乡 453003)
检测样品是检测工作的源头,检测样品的质量决定着检测工作的成败。动物的体液、离体组织、排泄物等是疾病诊断的基本条件,检测样品采集不恰当会影响检验结果,导致误诊。正确采集样品对疾病的确诊、病情发展的预测及防预措施的制定有重要意义。
具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全防护水平相适应的设备。
具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员,采集样品应无菌操作,做好个人防护,穿戴个人无菌防护用品。
具有有效地防止病原微生物扩散和感染的措施,做好环境消毒和动物尸体处理工作,防止污染环境,防止疫病传播。
具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段。考虑动物福利做好动物保定,在减少动物应激的同时,避免动物对采样人员造成伤害。
根据检测目的的不同,采集相应的样品,据病原不同分别采集相应的组织脏器、内容物、分泌物、排泄物。当不能初步判断病因时,应进行全面采样以备检验。
2.1 剖检原则
首先排除炭疽,先观察是否有血液凝固不良现象,若有鼻孔流血等病死动物,应耳尖采血涂片,痘病、炭疽病死的动物严禁剖检。
2.2 采样
避免外源性的污染,顺序是从胸腔到腹腔,先采实质器官最后采集污染的组织。
2.3 采取的病料必须有代表性
采取组织病变明显部位,采取病料时应根据不同的疾病及检验目的,采其相应的病料,病因不明无法第一时间判断的疾病应系统采集。病料的采取应在使用治疗药物前,用药后会影响病料中微生物的检出。死亡动物的内脏病料采取,最迟不超过死后6 h(尤其在夏季),否则尸体腐败,难以采到合格的病料。血液样品在采前一般禁食8 h,采集血样时,应根据采样对象、检验目的及所需量,确定采血方法与采血部位。
送往实验室的样品必须认真填写采样单,一式两份,一份随样品送实验室,另一份留送备案。填写内容应包括养殖场(户)名称及详细地址,畜主姓名及联系电话,动物品种、种类及数量,被采样日龄。是否健康动物,若被感染动物,应填写被采集动物种类、数量、发病日期、造成损失、感染动物在畜群中的分布情况、发病动物及死亡数量、临床症状、病理变化、免疫及用药情况。病料名称、种类、保存方法,送检单位名称和送检人姓名、联系方式。
4.1 无菌操作
所用的器械及容器要进行严格的消毒。刀剪镊子等金属用具可煮沸消毒30 min,使用前用酒精擦拭,并在火焰上烧一烧;器皿(玻制、陶制及珐琅制等)在高压灭菌器或干烤箱内灭菌;软木塞和橡皮塞应高压灭菌。采集最适病料或理想的病料,应是无菌采取的含病原微生物量多的血液器官组织或分泌物和排泄物。如无法估计是何种疾病时,应根据临床症状和病理变化采集病料,或全面采取病料,取材时应注意病原微生物感染所致疫病的类型。
4.2 病料采集的时间
一般在疾病流行早期典型、急性期,此时病原微生物的检出率高;后期由于体内免疫力的产生,病原微生物减少,检测病原微生物比较困难,同时可能出现交叉感染,增加判断的难度。
4.3 细菌学检验
病料应采自未经抗菌药物治疗的患病动物并做涂片。供显微镜检查的脓汁、血液、分泌物等样品,应无菌操作,尽快进行涂片、固定。各种拭子处理时,将保存液中的拭子充分振荡、刷洗后,取上清液。
4.4 样品的保存和运输
所采集的样品要以最快最直接的途径送往实验室。如果样品能在采集后24 h内抵达实验室的应放在4℃容器中密封保存,派具备资格的专人运送。
4.5 其他
供做切片的样品采取后必须立即投入固定液,采取一种病料,使用一套器械,或器械用酒精擦拭、火焰灭菌后再采取另一种病料;一种病料放入一种容器,不可混放。所有样品容器应做好标注,以便复检查验和防止混淆。血液样品采集后应避免震荡,于室温下静置2 h待血清析出后分离血清,置4℃保存,如需长期保存应置于-20℃。避免反复冻融。
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2016-10-13)