小蓟对败血症休克大鼠血浆炎症因子及代谢相关指标的影响

杨晓玲+梁军+田珏

摘要：目的 观察小蓟对败血症休克大鼠血浆炎症因子和代谢指标的作用。方法 复制败血症休克大鼠模型，BL420生物机能实验系统测定大鼠心率和平均动脉压，ELISA法检测血浆IL-1β、TNF-α和IL-6水平，全自动生化分析仪测定各组大鼠血浆葡萄糖水平。结果 败血症休克模型组大鼠心率增加，平均动脉压降低，IL-1β、TNF-α、IL-6和LDH水平升高，血糖降低；小蓟干预后，大鼠心率减慢，平均动脉压升高，IL-1β、TNF-α、IL-6和LDH水平降低，血糖增加。结论 小蓟能减轻败血症休克大鼠的过度炎症反应并改善机体的代谢水平。

关键词：小蓟；败血症休克；炎症因子；LDH；血糖

败血症休克（Septic shock）是由病原微生物感染所致[1]，病情进展迅速，发病机制复杂，且治疗困难，死亡率高。炎症反应过度被认为是影响败血症休克进程的重要機制[2]。近年研究发现，传统中药小蓟具有凉血止血，祛瘀消肿的作用[3]，在外伤感染、脓毒症、肠痈等疾病治疗中具有一定的疗效[4]。

1资料与方法

1.1主要试剂及仪器 BL-420F+生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）；REVCO超低温冰箱（日本）；M450酶标仪（美国BIO-TEK仪器公司）；全自动生化分析仪（北京普朗公司）；Finnpipette可调微量加样器（芬兰）。TNF-α、IL-1、IL-6和LDH ELISA检测试剂盒、抑肽酶均购自Sigma公司。其余为市售分析纯。小蓟购自安徽新型中药材饮片有限公司。

1.2动物分组 取2月龄体重190～210 g雄性健康SD大鼠45只（购自宁夏医科大学实验动物中心），随机分为假手术组、模型组和小蓟组。假手术组及模型组给予生理盐水灌胃2 ml/d；小蓟组予小蓟0.196 g/kg·d，生理盐水2 ml稀释灌胃，连续 2w。按文献方法制备败血症休克模型，大鼠经乙醚麻醉，行中下腹正中无菌2.5 cm切口，将盲肠移出腹腔，在回盲瓣下方结扎盲肠末端，用18#针头在结扎线远端盲肠两侧穿两孔，溢出少量肠内容物，再将盲肠还纳入腹腔，逐层缝合关闭腹腔，碘伏消毒并包扎伤口，术后1 min及8 h背部皮下注射生理盐水40 ml/kg以防脱水。

1.3心功能测定 术后18 h用20%乌拉坦6 ml/kg腹腔麻醉，左颈总动脉插管连接BL-420F+生物机能实验系统记录心率和平均动脉压。

1.4 ELISA法检测血浆TNF-α、IL-1、IL-6和乳酸脱氢酶（LDH）的含量 从颈总动脉取血5 ml，10%EDTA 20 μl和抑肽酶650 KIU抗凝，于4℃ 3000 r/min离心10 min，分离血浆。按照ELISA检测试剂盒说明书检测血浆TNF-α、IL-1β、IL-6和LDH含量，绘制标准曲线，并计算各组动物血浆中炎症因子的含量。

1.5血糖检测 用全自动生化分析仪检测各组大鼠血浆葡萄糖（Glu）水平。

1.6统计学方法 采用prism5.0统计软件进行分析，计量资料多组间比较采用单因素方差分析，组间的两两比较采用SNK检验。结果以均数±标准差（x±s）表示，以P<0.05为差异有显著性。

2结果

2.1小蓟对败血症大鼠心率的影响 与假手术组大鼠相比，模型组大鼠心率增加了72次/min；平均动脉压降低23.2mmHg；小蓟干预后，大鼠心率降低了25次/min，平均动脉压升高了17 mmHg（P均<0.05），差异均有统计学意义，见图1。

2.2小蓟对败血症大鼠血浆炎症因子和代谢指标的影响 与假手术组大鼠相比，模型组血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量分别升高了4.57倍、2.56倍及6.66倍，LDH的含量升高了1.73倍，Glu下降了49.1%（P均<0.05）；与模型组相比，小蓟组血清TNF-α、IL-1β和IL-6的含量分别降低了68.17%、51.98%及79.27%，血清LDH的含量降低了14.9%，Glu升高了24.5%（P均<0.05），见表1。

3讨论

败血症休克是由病原微生物及其毒素在体内引起的一种以微循环障碍和血流动力学异常为主的病理过程，严重时可以出现细胞损害甚至是多系统器官功能衰竭，发病机制复杂。当机体抵抗力下降，侵入机体的病原微生物大量繁殖并释放毒性产物，激活机体免疫系统，产生和释放各种生物活性物质和炎症介质，导致血流动力学异常。结扎盲肠并使之穿孔是目前较为常用的复制动物败血症休克模型的方法，本研究以SD大鼠复制败血症休克模型，结果显示，模型组大鼠的心率明显高于假手术组，平均动脉压也显著低于假手术组，出现了血流动力学的显著异常，表明败血症休克动物模型复制成功。

在败血症急性反应阶段，机体可以出现发热、炎症介质大量生成、凝血功能障碍、血管壁通透性增加、代谢反应异常等变化[2]，同时由于微循环长期缺血缺氧，酸性代谢产物堆积，出现代谢异常。已经证实：败血症休克时存在炎症-抗炎反应平衡失调[2]。IL-6、TNF-α和IL-1β等炎症介质能启动瀑布式炎症级联反应并损伤组织细胞[2]。本研究发现，败血症休克大鼠血浆IL-1β、TNF-α和IL-6水平显著增高，血糖降低，乳酸脱氢酶明显增多，表明败血症休克的机体存在炎症反应过度和代谢异常。

小蓟是多年生菊科植物，具有"清火、疏风、豁痰，解疔疮痈疽肿毒"的功效，对外伤感染、脓毒症、肠痈等疾病治疗中具有一定的疗效[4]。本研究结果显示：小蓟干预组大鼠血浆IL-1β、TNF-α和IL-6水平比模型组显著降低，血糖水平明显升高，而乳酸脱氢酶则明显下降，表明小蓟能够减轻败血症休克过程中的炎症反应的持续扩大，改善机体的代谢和局部的微循环，对败血症休克具有一定的预防或治疗作用。

参考文献：

[1]Akcay E K，Cagil N，Yulek F，et al.眼睑的坏死性筋膜炎继发于腮腺炎[J].欧洲眼科杂志，2008，10（1）：128-130.

[2]Yoo CH，Yeom JH Heo JJ，et al.干扰素β防止致命的内毒素的和脓毒性休克SIRT1 upregulation[J].科学报告，2014，4：4220-4220.

[3]中国药典[S].2005年版，第一部.

[4]杨泰然，徐广涛，徐晓雪，等.小蓟化学成分的分离与鉴定[J].沈阳药科大学学报，2015，32（6）：419-423.

编辑/丁一