TPX2基因在宫颈癌诊断与治疗的临床价值

闫琴琴

摘要：目的 研究TPX2基因在宫颈癌诊断与治疗的临床价值。方法 采用RT-PCR技术和免疫组织化学法检测正常宫颈组织、宫颈鳞癌组织、宫颈鳞癌 Siha 细胞系、宫颈腺癌组织、宫颈腺癌 HeLa 细胞系和上皮内瘤变组织中TPX2基因的mRNA 和蛋白质。结果 正常的宫颈组织TPX2mRNA表达量明显低于其他非正常组（P<0.05），TPX2 蛋白很少出现在正常宫颈组织中，在宫颈鳞癌组织和上皮内瘤变组织中表达强度增加，TPX2 蛋白表达强度与年龄关系不大，与病理级数和淋巴结转移有关。结论 TPX2基因可以作为宫颈癌诊断与治疗的一个指标，具有重要的临床价值。

關键词：TPX2基因；TPX2 蛋白；宫颈癌

The Clinical Value of TPX2 Gene in the Diagnosis and Treatment of Cervical Cancer

YAN Qin-qin

（Qionglai Medical Center Hospital，Qionglai 611530，Sichuan，China）

Abstract：Objective Study on TPX2 gene in the clinical value of the diagnosis and treatment of cervical cancer. Methods Using RT-PCR technique and immunohistochemical detection of normal cervix， cervical squamous cell carcinomas， squamous cell cervical carcinoma Siha cell lines， cervical adenocarcinoma and cervical carcinoma HeLa cells and intraepithelial neoplasia TPX2 Gene's Messenger RNA and protein. Results Normal cervical tissue TPX2mRNA expression was significantly lower than that of other non-normal group （P<0.05）， theTPX2 proteins are rarely found in normal cervical tissue， in cervical squamous cell carcinoma and intraepithelial neoplasia intensity expressed in increases TPX2 protein expression and age have little to with series of pathology and lymph node metastasis. Conclusion TPX2 genes can be used as an indicator of cervical cancer diagnosis and treatment， is of great clinical value.

Key words：TPX2 gene； TPX2 protein； Cervical cancer

宫颈癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，病因至今尚未完全明了，患者平均发病率，平均年龄都有差异。TPX是受细胞周期严格调控的微观相关蛋白，作用发生在有丝分裂纺锤体形成过程中。资料显示，TPX基因表达与一些癌症发生有关，如乳腺癌等。本文研究TPX2基因表达与宫颈癌的关系，为宫颈癌的治疗提供新思路，结果如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 2012年5月～2014年10月在我院确诊的宫颈癌患者共有65例，年龄31～70岁，平均年龄48.9岁。这些患者手术切除宫颈癌，将这些完整的新鲜的宫颈癌组织放入液氮，放入-80 ℃冰箱保存。65例标本中，宫颈鳞癌55例，将其分为三级：一级25例、二级13例、三级17例；宫颈腺癌10例，也将其分为三级：一级5例、二级4例、三级1例。在这65例标本中，发生淋巴结转移14例，淋巴结无转移51例。病历存档的宫颈上皮内瘤变组有35例，患者平均年龄为44.6岁，患者分为CINⅠ10 例，CINⅡ14例，CINⅢ11例。对照组为正常宫颈组织，来自于子宫肌瘤患者，共20例，年龄35～67岁，平均年龄51.5岁。

1.2方法

1.2.1收集标本 在患者放疗和化疗之前采集，同时取对照组的标本。

1.2.2培养标本 将患者的HeLa、Siha细胞分开培养，培养基为 10% FBS 的 RPMI1640 培养基，保存于37℃，待细胞生长合适时，进行传代培养。

1.2.3提取基因 使用试剂盒提取标本的总RNA，加入试剂防止RNA降解，同时冰冻保存（-80℃）。

1.2.4分析基因 利用用 1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测基因的完整性，分光光度计测定 260/280nm波长处测定吸光度值，确定基因浓度和纯度。

1.2.5 RT-PCR 按照试剂盒，添加引物（上海化工所），按照操作，扩增TPX2基因。

1.2.6跑电泳 将第四步获得的产物进行琼脂糖凝胶电泳，检测。

1.2.7免疫组化检测 免疫组化 SP 法检测，实验操作按照SP试剂盒说明，切片脱蜡，高温修复，去除氧化酶，分别添加TPX2一抗、TPX2二抗、TPX2三抗，然后进行显色，复染、封片。

1.2.8检测结果判断 检测染色阳性细胞的数量和强度。

1.3结果评价 将本次染色为4个等级：0分：原色（没有着色），1分：浅黄色（弱染色），2分：棕黄色（中染色）和3分：黄褐色（强染色）。将本次细胞阳性率为4个等级：0分：阳性率小于5%，1分：5%-25%，2分：25%-50%，和3分：大于50%。将以上两项相加，也分为4个等级：0分：（-），1～2分：（+），3～4分：（+ +），和5～6分：（+ + +）。

1.4统计学分析 本实验的数据使用软件SPSS 15.0统计分析，其中采用t 检验进行计量资料对比，采用χ2检验进行计数资料对比。P<0.05说明两种治疗方式之间存在差异，差异具有统计学意义 。

2 结果

根据RT-PCR 检测结果显示，正常的宮颈组织的TPX2 的 mRNA表达量为（0.079±0.028），宫颈鳞癌组织与宫颈腺癌组织的表达量分别是（0.452±0.009）和（0.507±0.029），HeLa细胞和Siha细胞的表达量分别为（1.892±0.037）和）1.701±0.038）。正常的宫颈组织TPX2mRNA表达量明显低于其他非正常组（P<0.05）。

结果显示，TPX2 蛋白表达强度与年龄关系不大（P>0.05），随着病理级数的增大，表达强度增大（P<0.05），淋巴转移强于淋巴未转移的（P<0.05）。

3 结论

宫颈癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，并且是恶性肿瘤中最多见的癌瘤[1]。它的发病率差异较大，该疾病是由人类乳头瘤病毒引发的，可以通过皮肤传播，潜伏期较长，前期无症状，后期表现为阴道出血、阴道分泌物增多等，一般检查方式为宫颈细胞刮片检查、阴道检查等[2-3]。

TPX是受细胞周期严格调控的微观相关蛋白，作用发生在有丝分裂纺锤体形成过程中，资料显示，TPX基因表达与一些癌症发生有关，如乳腺癌、肺癌等。参与纺锤体形成装等，主要表达在细胞有丝分裂的S期[4]。本文研究TPX2基因表达与宫颈癌的关系，为宫颈癌的治疗提供新思路，正常的宫颈组织TPX2mRNA表达量明显低于其他非正常组（P<0.05），正常的宫颈组织的TPX2的mRNA表达量仅为（0.079±0.028）。其次，TPX2蛋白在正常宫颈组织、宫颈鳞癌组织、宫颈鳞癌 Siha 细胞系、宫颈腺癌组织、宫颈腺癌 HeLa 细胞系和上皮内瘤变组织也不相同，TPX2 蛋白在正常宫颈组织中没有表现，在宫颈鳞癌组织和上皮内瘤变组织中表达强度增加，可以推测TPX2 蛋白对癌症的发生有促进作用。

综上所述，TPX2 可以作为一个研究点，作为宫颈癌诊断与治疗的一个指标，具有重要的临床价值。

参考文献：

[1]付丽丽.宫颈癌的预防与治疗[J].药物与临床，2014（S2）：200-201.

[2]Y.Liu，Z.Ye，H.Sun，等. 利用ADC差值及其与微血管密度及血管内皮生长因子的相关性进行宫颈癌分级的研究[J]. 国际医学放射学杂志，2013，36（3）：288-289.

[3]王铮，李徐奇，徐军，等. 沉默 CXCR4 基因表达抑制胰腺癌增殖和侵袭的体外研究[J].第三军医大学学报，2012，34（4）：279-283.

[4]刘梅，唐玉云，唐惠英. 宫颈癌腹腔镜根治术与开腹手术的临床疗效分析[J].海南医学，2013，24（14）：2077-2079.

编辑/蔡睿琳