白鹤芋花序体细胞胚胎诱导与快繁途径研究

张桂芳��+刘静��+刘春+张黎

摘要：以白鹤芋花序为外植体，研究影响白鹤芋花序体细胞胚胎诱导、增殖、萌发和植株再生转化的主要因子。结果表明，体细胞胚胎直接诱导的最适培养基为MS+ 5.0 mg/L 6-BA +1.0 mg/L KT + 0.1 mg/L NAA，体细胞胚胎增殖最适培养基为MS+5.0 mg/L 6-BA +0.3 mg/L ZT+0.2 mg/L NAA，体细胞胚胎萌发最适培养基为MS+0.1 mg/L IBA +0.4 mg/L GA3+30 g/L蔗糖，植株再生转化最佳激素配方为0.5 mg/L 6-BA +0.1 mg/L IBA +0.5 mg/L GA3。

关键词：白鹤芋；花序；体细胞胚胎；直接诱导；增殖；萌发；植株再生转化；适宜培养基；激素配方；组培快繁

中图分类号： Q943.1文献标志码：

文章编号：1002-1302（2016）08-0072-02

白鹤芋（Spathiphyllm floribundum）为天南星科白鹤芋属多年生草本花卉，肉质花序，佛焰苞观赏性强，极耐阴性，是重要的室内观叶观花，成为国内观叶植物产业发展的先锋植物。白鹤芋广泛应用于盆栽观赏，是理想的花叶兼赏花卉，常采用种子和分株法繁殖，但繁殖系数低，严重影响了规模化和商品化生产[1]。采用组织培养技术进行种苗的扩繁，短期内可获得大量优质种苗，满足生产需求。但以白鹤芋叶片和叶柄为外植体，易发生褐变且诱导率低；以植株根茎为外植体，灭菌困难污染率高。选择以白鹤芋花序为外植体，取材方便，灭菌相对较易，且增殖率高。本试验以白鹤芋的花序体为外植体，建立花序体细胞胚胎组培快繁体系，为白鹤芋种苗大量繁殖提供理论依据。

1材料与方法

1.1试验材料

试验材料为白鹤芋“美酒”的肉质花序。

1.2试验方法

1.2.1白鹤芋花序体细胞胚诱导将灭菌后的白鹤芋花序切成0.5 cm×0.5 cm的小块，接种于MS+30 g/L蔗糖+6 g/L 琼脂+不同浓度的6-BA（1、3、5 mg/L）、KT（0.5、1.0、1.5 mg/L）、NAA（0.1、0.3、0.5 mg/L）的培养基，设9个处理，每瓶接5个外植体，每瓶记为1次重复，每处理重复10次（表1）。25 ℃下黑暗培养15 d后转到光暗比为12 h ∶[KG-*3]12 h的条件下培养，50 d后统计体胚诱导率。

1.2.2体细胞胚增殖培养基筛选将供试体细胞胚切成02～0.3 cm小块，接种于MS+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂+不同浓度6-BA、NAA、ZT的培养基中，设12个处理，每瓶接5个体胚块，每瓶记为1次重复，每个处理重复10次。40 d后统计体胚再生率和增殖倍数。

1.2.3白鹤芋体胚萌发MS+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂为基本培养基，对IBA（0.1、0.2、0.3 mg/L）、GA3（0.2、0.4、0.6 mg/L）及蔗糖（10、20、30 g/L）进行L9（34）正交试验，共9个处理，每瓶接5个发育成熟的体胚块，每瓶记1次重复，每处理10次重复。30 d后统计体胚的萌发率。

1.2.4白鹤芋植株的再生转化MS为基本培养基，对6-BA（0、0.5、1.0 mg/L）、IBA（0.1、0.2、0.3 mg/L）及GA3（03、0.5、0.7 mg/L）进行L9（34）的正交试验，共9个处理，每瓶接3个萌发的成熟体胚块，每瓶记为1次重复，每个处理10次重复。培养40 d后统计再生率。

2结果与分析

2.1白鹤芋花序体细胞胚诱导

初级体胚诱导过程中，35 d后处理1、处理2、处理3大部分花序褐化、死亡，存活的花序生出微小黄绿色颗粒突起。随着6-BA浓度的升高，10 d后处理4到处理9白色花序均逐渐膨大，并变为绿色；45 d后，处理4、处理5与处理6产生少量的黄绿色体胚；处理8花序表面形成大量紧密的簇状体细胞胚。

由表2可知，9个处理均能诱导初级体胚的形成，但不同处理对初级体胚的诱导存在差异。激素组合为5.0 mg/L 6-BA +1.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA的处理8，为白鹤芋花序初级体细胞胚诱导的最佳培养基，诱导率达56.67%。各激素对白鹤芋花序初级体胚诱导的能力2.3白鹤芋体胚萌发

将白鹤芋花序成熟体胚转接到萌发培养基10 d后，胚根不断延伸，主根出现。出根15 d后子叶逐渐膨大，由黄绿色变成绿色，但不生芽。

由表4可以看出，各因素对白鹤芋花序体胚萌发影响程度依次为IBA> GA3>蔗糖。由正交设计试验结果可得，白鹤芋花序体胚萌发最佳的激素和蔗糖的组合为 0.1 mg/L IBA +0.4 mg/L GA3 +30g/L蔗糖，验证性试验体胚的萌发率为77.58%。

3结论与讨论

3.1结论

白鹤芋花序体胚诱导最佳激素配方为5.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA，诱导率达56.67%，6-BA 的影响作用最大；白鹤芋花序体胚增殖最佳激素组合为5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L ZT+0.2 mg/L NAA， 增殖倍数达到10；白鹤芋花序体胚萌发最佳激素和蔗糖组合为0.1 mg/L IBA+0.4 mg/L GA3+30 g/L蔗糖， 体胚萌发率为

3.2讨论

携带方便、价格便宜的小盆栽花卉颇受消费者的喜爱，市场的销售仍异常火爆[2]。小盆栽花卉生产在不断扩大，而白鹤芋正是众多小盆栽花卉中最具发展前景的花卉之一。为提高白鹤芋的繁殖速度，直接诱导体细胞胚胎，短期内高速繁殖白鹤芋种苗，是种苗繁育的有效途径。外植体选择对体细胞胚的诱导至关重要[3]，外植体的生长状态和细胞分裂程度决定了体细胞胚诱导的难易程度[4]，白鹤芋以花丝[5]和花序为外植体，其体胚的诱导较容易而且诱导率非常高，而以白鹤芋其他部位为外植体来诱导体胚的研究还未见报道。目前白鹤芋体细胞胚胎的研究中，花序细胞诱导发生部分还不是很清楚[6]，这有待进一歩地深入研究。

参考文献：

[1]于丽萍. 花叶俱美的室内植物——白掌[J]. 绿化与生活，2002（2）：28.

[2]郭金凤. 小盆栽产销两旺持续向好[N]. 中国花卉报，2007-10-18（3）.

[3]李一星，石晓峰，王建云，等.紫云英体细胞胚再生体系的建立[J]. 现代农业科技，2014（2）：244-245.

[4]Maheswaran G，Williams E G. Clonal propagation of Trifolium pratense，T. resupinatum and T. subterraneum by direct somatic embryo-genesis on cultured immature embryos[J]. Plant Cell Report，1986，5（3）：165-168.

[5]秦靜远. 白鹤芋花丝体细胞胚的诱导及快繁技术[J]. 中国农学通报，2005，21（9）：67-69.

[6]曹静，周丽侬，邝哲师，等. 白鹤芋花序体细胞胚胎发生及植株再生的研究[J]. 农业生物技术学报，1995，3（3）：81-83.