HPLC法测定瘀痹平片中丹参酮ⅡA的含量

王迎举

（河南省食品药品审评查验中心，郑州450004）

HPLC法测定瘀痹平片中丹参酮ⅡA的含量

王迎举

（河南省食品药品审评查验中心，郑州450004）

目的建立HPLC法测定瘀痹平片中丹参酮ⅡA含量的方法。方法采用Ultimate-C18色谱柱，甲醇-水（80∶20）为流动相；流速0.8 ml·min-1；检测波长270 nm。结果丹参酮ⅡA的线性范围为32.06～320.6 μg，相关系数r=0.9998，平均回收率为97.80%，RSD=1.09%（n=6）。结论本方法高效、便捷、专属性强，定量准确，重复性好，可以为瘀痹平片的质量控制提供参考。

丹参酮ⅡA；高效液相色谱法；瘀痹平片；含量测定

瘀痹平片是医院制剂，由丹参、当归、北刘寄奴、鸡血藤、红花、乳香等药材加工而成，具有祛邪通，络活血化瘀之功效，用于瘀血型类风湿性关节炎等顽痹。丹参是常用中药，临床应用历史悠久，是该处方中的君药，中药材往往含有多种、多类化学成分，构成了一个非常复杂的系统，对于中药制剂来说，为保证药物的安全和有效，其所含化学成分的稳定性至关重要。丹参的主要化学成分包括丹参酮Ⅰ、ⅡA、ⅡB等，其中丹参酮ⅡA是丹参的主要脂溶性活性成分[1、2]，为保证制剂质量，本文采用高效液相色谱测定法，测定制剂中丹参酮ⅡA的含量，从复方制剂的君药成分着手，建立了控制药品质量的方法。

1 试验材料

1.1 仪器Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；AUW-220D电子分析天平（日本岛津公司）；5210DT超声处理器，隔膜真空泵（天津市津腾实验设备有限公司）。

1.2 试药丹参酮ⅡA对照品（批号:110766-200619，购自中国药品生物制品检定所）；瘀痹平片(由河南风湿病医院提供，批号20141112、20150206、20150810)；甲醇为色谱纯（德国Merck公司），水为自制超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 提取条件复方制作的成分复杂，直接测定供试品杂质对主成分的干扰较大，因此，供试品需要经过适当的处理后再测定。比较了回流、超声、索式提取等不同提取方法及不同的超声提取时间制剂中丹参酮ⅡA的含量，结果见表1～2：

表1 不同提取方法测定供试品中丹参酮ⅡA的含量（mg/g）

表2 不同的超声提取时间测定供试品中丹参酮ⅡA的含量（mg/g）

上述结果表明，采用超声处理30分钟，供试品中的丹参酮ⅡA已提取完全，故供试品处理方法采用超声处理30分钟。

2.1.2 测定波长的选择用紫外分光光度计对供试品溶液在200 nm～400 nm波长范围内扫描，结果丹参酮ⅡA在270 nm波长处有最大吸收，故选择270 nm为测定波长。

表3 不同波长丹参酮ⅡA的吸光度（nm）

考察不同的流动相进行试验，以甲醇-水、甲醇-0.5%醋酸溶液为流动相，并比较了甲醇-水（60∶40）、甲醇-水（70∶30）、甲醇-水（80∶20）为流动相的试验结果，色谱图见图1。

图1 不同流动相高效液相色谱图

图2 干扰试验高效液相色谱图

通过上述一系列试验，最终选定的色谱条件为：采用Ultimate-C18(250×4.6 mm，5 um)为色谱柱，以甲醇-水（80∶20）为流动相[4]，流速为0.8 ml·min-1，检测波长为270 nm，柱温：20℃，进样体积10 μl，实验室相对湿度：50%。

2.2 线性关系考察精密称取丹参酮ⅡA对照品约16mg，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇适量使溶解后，定容，摇匀。精密量取5 ml，转移至100 ml棕色量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按照“2.1”项色谱条件，分别进样2、4、6、8、10、15、18、20 μl，进行测定，以丹参酮ⅡA峰面积（Y）对对照品进样量（X）进行回归，计算，得标准曲线为Y=3.7869X+0.2211，r=0.9998。结果显示，丹参酮ⅡA在32.06～320.6 μg范围内线性关系良好。

2.3 对照品溶液的制备取丹参酮ⅡA对照品约16 mg，精密称定，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇适量使溶解后，定容，摇匀。精密量取5 ml，转移至100 ml棕色量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4 供试品溶液及阴性对照溶液的制备取瘀痹平片细粉约2.0 g，精密称定，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇35 ml，超声30 min，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，以0.45 um微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取按处方比例及生产工艺制备缺丹参阴性制剂，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

2.5 干扰试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl，注入液相色谱仪，色谱见图2。由图1可知，在与对照品色谱峰相应的位置上，供试品具有相同保留时间的色谱峰，阴性样品无干扰。

2.6 精密度试验精密吸取同一对照品溶液10 μl，重复进样5次，测定峰面积，记录色谱图，RSD=0.80%(n= 5)，结果表明仪器的精密度较好。

2.7 稳定性试验取同一对照品溶液，分别在0、2、4、6、8、10 h进样10 μl，测定峰面积，记录色谱图。结果RSD=0.96%，表明供试品溶液在10 h内稳定性良好。

2.8 加样回收率试验精密称取已知含量为0.1266 mg/g的瘀痹平片6份（每份约1.5 g），置50 ml棕色量瓶中，分别精密加入丹参酮ⅡA对照品溶液2 ml，按照“2.4”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，见表4。

表4 回收率试验结果

2.9 样品含量测定取瘀痹平片3批，分别按“2.4”项下方法制备供试液，精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算丹参酮ⅡA的含量，见表5。

表5 3批瘀痹平片中丹参酮ⅡA的含量

3 讨论

参考有关文献[3-5]，考察了样品提取条件，比较了不同提取条件回流、超声、索式提取等，结果表明超声处理提取完全。比较超声处理10分钟，20分钟，30分钟，40分钟，60分钟，结果超声处理30分钟已提取完全，所以选用超声处理30分钟为提取条件。

测定波长的选择用紫外分光光度计对供试品溶液在200 nm～400 nm波长范围内扫描，结果丹参酮ⅡA在270 nm波长处有最大吸收，故选择270 nm为测定波长。文献[6-9]中有采用甲醇-水（75∶25）、甲醇-水（70∶30）、甲醇-0.5%醋酸水等为流动相，本文经过实验比较甲醇-水（60∶40）、甲醇-水（70∶30）、甲醇-水（80∶20）为流动相，结果以甲醇-水（80∶20）为流动相，峰形较好，分离度高，故采用甲醇-水（80∶20）为流动相。

丹参酮ⅡA的稳定性主要受温度和光照的影响，为了保证其含量应尽量避免其降解，应考虑在制剂制备和检验过程中适当降低提取、浓缩、干燥等过程中的温度，并在制剂储存过程中避光，以防丹参酮ⅡA降解。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版）一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：70-71.

[2]程立方，崔秀君.山东不同产地丹参饮片中丹参酮ⅡA含量分析[J].中国医院药学杂志，2010，30（3）：264-265.

[3]王湛.HPLC测定调经活血片中丹参的含量[J].中外医学研究，2010，8（22）：68-69.

[4]严红，高杨，郭伟，等.不同产地丹参药材中丹参酮ⅡA及丹参素的含量比较[J].天津药学，2003，15（3）：10-12.

[5]郭志鹏，郭迎霞.HPLC法测定通神复脑丸中丹参酮ⅡA的含量[J].中国药师，2009，12（11）：1666-1667.

[6]于百青，杨敏，孙鹏云.高效液相色谱法测定心舒丸中丹参酮Ⅱ_A含量[J].中国药业，2012，21（13）：36-37.

[7]刘梅，夏鑫华.丹参酮ⅡA的化学稳定性研究[J].中药材，2010，33（4）：606-608.

[8]张亚中，金斌，黄丽丹，等.HPLC测定128批丹参舒心胶囊中丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅱ_A的含量及结果分析[J].中成药，2011，31（1）：65-67.

[9]罗丹冬，丘振文.HPLC法测定丹七合提物中丹参素和丹参酮ⅡA的含量[J].中国保健营养，2014，7（中）：4588.

Content Determination of TanshinoneⅡA in Yubiping Tablets by HPLC

WANG Yingju
(Henan Province Drug Approval Certification Center,Zhengzhou 450004,China)

Objective To establish a HPLC method to determination of TanshinoneⅡA in Yubiping tablets.Methods Ultimate-C18 chromatographic column was used methanol-waters(80:20)as mobile phase,at a flow rate of 1.0ml·min-1.The detection wavelength was at 270 nm.Results The TanshinoneⅡA showed a good linear relationship over the range of 32.06～320.6μg,r=0.9998. The average recovery was 97.80%,RSD=1.09%(n=6).Conolusion The method is efficient,convenient,specific,accurate quantitative and repeatability.It can provide the reference for quality control of Yubiping tablets.

TanshinoneⅡA;HPLC;Yubiping tablets;content determination

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.02.063

1672-2779（2017）-02-0139-03

：李海燕本文校对：高勇

2016-09-05）