HMGB1在急性肠套叠患儿血清中的表达及其临床意义*

段永福，熊顺军

（1.河南省南阳市中心医院小儿外科，河南南阳473000；2.武汉大学中南医院儿科，湖北武汉430071）

临床论著

HMGB1在急性肠套叠患儿血清中的表达及其临床意义*

段永福1，熊顺军2

（1.河南省南阳市中心医院小儿外科，河南南阳473000；2.武汉大学中南医院儿科，湖北武汉430071）

目的探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在小儿急性肠套叠外周血中的表达及其临床意义。方法选取2010年10月-2015年6月在该院接受治疗的急性肠套叠患儿89例，取同期体检的89例健康婴幼儿作为对照组，采用酶联免疫吸附法检测受检对象外周静脉血中HMGB1的表达，同时检测两组研究对象外周血中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素6（IL-6）的表达水平。结果与对照组比较，急性肠套叠患儿外周血中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素6（IL-6）及HMGB1水平升高（P＜0.05），进一步研究发现，HMGB1的表达量与TNF-α、IL-6的表达水平相关；受试者工作特征曲线表明，以12.35 ng/ml为临界值，HMGB1用于诊断急性肠套叠的敏感性为70.79％，特异性为79.78％。结论小儿急性肠套叠外周血中HMGB1的表达量升高，早期检测其表达可能对急性肠套叠的诊断具有一定意义。

急性肠套叠；小儿；高迁移率族蛋白1

急性肠套叠是婴幼儿期最常见的急腹症，易复发[1]。患儿出现果酱样血便、呕吐及阵发性哭闹现象，检查腹部时会发现腊肠样包块存在[2]，临床上仍有10％～15％的急性肠套叠患者[3]，就诊时缺乏急性肠套叠的典型表现而造成诊断和治疗困难，因此寻找特异性的血清学检测指标以改善小儿急性肠套叠的治疗效果。通过动物模型研究得知，在小儿肠套叠的产生和发展过程中，炎症反应起至关重要的作用，高迁移率族蛋白1（high mobility group box-1 protein，HMGB1）在多种炎症疾病的发生和发展中发挥重要作用；研究还发现检测患者血清中HMGB1的表达水平对多种疾病的诊断具有一定的指导意义[4-8]。本文通过检测HMGB1在急性肠套叠患儿血清中的表达和临床意义，为今后急性肠套叠治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2010年10月-2015年6月在本院接受治疗的急性肠套叠患儿89例为研究对象。其中男性45例，女性44例；年龄3～30个月，平均（9.8±2.3）个月。取同期体检的89例健康婴幼儿作为对照组。其中男性46例，女性43例；平均年龄（9.7±2.1）个月。入选标准：肠套叠患儿均为原发性急性肠套叠，具有肠套叠的典型临床表现，经超声检查确诊，灌肠治疗均获得成功。肠套叠复发的诊断标准[9-10]：距前1次肠套叠间隔≥12 h的再次发作的肠套叠，间隔＜12h的则考虑为前1次套叠复位不完全。排除标准：排除接受手术复位治疗及出现肠坏死、复位失败的患儿。两组受试对象的性别、年龄差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究方案经本院伦理委员会批准，患儿监护人知情和同意。

1.2 方法

1.2.1 提取标本对照组抽取外周静脉血4 ml于肝素抗凝管中，急性肠套叠组于复位前及复位后12 h抽取外周静脉血4 ml。3 000 r/min离心10 min，分离血浆，置于-80℃冰箱冷冻保存，留待后续检查。

1.2.2 外周血中HMGB1、TNF-α及IL-6蛋白的检测HMGB1、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白介素6（interleukin-6，IL-6）酶联免疫吸附法检测试剂盒由杭州联科公司提供，具体方法按试剂盒说明书操作。测试之前，在室温中保存试剂盒和样本，按照1︰1稀释待测样本，在反应孔中吸入50μl混合液，将50μl待测样本及50μl标准品加入其中，迅速加入50μl经过生物素标记的抗体。盖上膜板，轻微摇晃至均匀，保存在37℃的环境中，防止1 h，清除孔内液体，将洗涤液加入各孔内，振荡，甩净洗涤液，吸水纸将其吸干，上述洗涤过程重复3次。将50μl的底物A与50μl的底物B加入到各孔内，轻微摇晃至均匀，避光保存于37℃环境中10 min。取出酶标板，加入50μl终止液，置于450 nm波长处，测量光密度（optical density，OD）值，绘制曲线，计算血浆样本相应的浓度。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 18.0统计软件，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，用t检验，两变量值间做Pearson相关分析，计数资料的比较用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清中HMGB1、IL-6及TNF-α的表达

急性肠套叠组术前HMGB1、IL-6及TNF-α表达量与对照组比较，经t检验，差异有统计学意义（t= 2.582、40.439和42.808，P=0.011、0.000和0.000），急性肠套叠组高于对照组。复位12 h后患儿血清中HMGB1、IL-6和TNF-α的表达量降低（t=2.215、30.961和26.273，P=0.029、0.000和0.000），但仍高于对照组。见表1。

表1 各组HMGB1、IL-6和TNF-α表达量比较（n=89，x±s）

2.2 HMGB1与IL-6、TNF-α的相关性分析

急性肠套叠患儿血清中HMGB1的表达量与TNF-α、IL-6水平呈正相关（r2=0.610和0.670，P= 0.000）。见图1。

2.3 HMGB1用于急性肠套叠的诊断价值分析

受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic cure，ROC）曲线分析表明，HMGB1用于诊断急性肠套叠的线下面积为0.845，以HMGB1的表达量12.35 ng/ml为临界值，其诊断急性肠套叠的敏感性为70.79％，特异性为79.78％。见图2。

2.4 HMGB1血清表达量与患儿肠套叠复发的关系

本组研究对象共有14例复发，复发率为15.7％；与未复发组比较，复发组患儿术前血清中HMGB1的表达量升高，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

图2 ROC曲线分析

表2 复发组与未复发组患儿血清中HMGB1的表达比较

3 讨论

HMGB1是一种晚期炎症介质[11]，其在大部分炎症性疾病患者血清中出现高表达，并且与疾病的严重程度相关，早期检测HMGB1的表达水平对疾病的诊断及病情判断具有一定意义[12-14]。HMGB1与细胞表面的特异性配体TLR4和RAGE结合后，通过激活核转录因子-κB进一步诱导下游TNF-α和IL-6等炎症因子的表达。国内吴义平[15]研究发现，TNF-α和IL-6在小儿急性肠套叠患儿的血清中表达升高，并与肠套叠患儿的复发率相关。本研究发现，急性肠套叠患儿血清中HMGB1的表达量升高，此外，TNF-α和IL-6在患儿血清中的表达升高，与以往的研究一致。由于HMGB1可以诱导TNF-α和IL-6的产生，本研究进一步探讨HMGB1的表达量与两者的相关性。研究发现，HMGB1的表达量与患儿血清中TNF-α、IL-6的表达存在相关性，提示HMGB1可能在急性肠套叠患儿的发病机制中发挥重要作用。

在证实HMGB1在急性肠套叠患儿血清中存在高表达后，本研究进一步探讨HMGB1的表达量用于诊断急性肠套叠患儿的意义，ROC曲线分析表明，以HMGB1的表达量为阈值，其用于诊断急性肠套叠患儿的敏感性为70.79％，特异性为79.78％，提示血清HMGB1有应用于急性肠套叠的诊断价值。本实验进一步探讨复发肠套叠患儿与非复发肠套叠患儿血清中HMGB1表达的差异性，结果表明，复发肠套叠患儿术前血清中HMGB1的表达量高于非复发患儿，提示HMGB1可能是影响肠套叠复发的重要因素。由于本研究只是一个临床观察性的研究，对于HMGB1在肠套叠中的作用，需要在动物模型中进一步探讨。

综上所述，HMGB1在急性肠套叠患儿血清中的表达升高，其可能在小儿急性肠套叠的发病机制中具有一定作用，早期检测血清中HMGB1的表达水平对疾病的诊断及预后判断可能具有一定意义。未来还需要大样本、多中心的临床研究，以期为HMGB1应用于临床上小儿肠套叠的诊断和治疗打下坚实的理论基础。

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（童颖丹 编辑）

Expression of HMGB1 in infants with intussusception and clinical significance*

Yong-fu Duan1,Shun-jun Xiong2
(1.Department of Pediatric Surgery,Nanyang Central Hospital,Nanyang,Henan 473000, China;2.Department of Pediatrics,Zhongnan Hospital of Wuhan University, Wuhan,Hubei 430071,China)

ObjectiveTo evaluate the expression and clinical significance of serum high mobility group box-1 protein(HMGB1)in infants with intussusception.MethodsEighty-nine infants with intussusception admitted to our department between October 2010 and June 2015 were enrolled in this prospective study,and 89 health children having physical examination during the same period were selected into control group. Interleukin-6(IL-6),tumor necrosis factor α(TNF-α)and HMGB1 were estimated at the time of admission.ResultsChildren with intussusception had higher levels of HMGB1,IL-6 and TNF-α when compared with the control group(P＜0.05).HMGB1 was in positive correlations with IL-6 and TNF-α(P＜0.05)in children with intussusception.Using the ROC curve,the boundary value of HMGB1 was 12.35 ng/ml.The sensitivity and specificity of HMGB1 for the diagnosis of intussusception were 70.79％and 79.78％,respectively.ConclusionsSerum level of HMGB1 increases in the infants with intussusception.Early detection of serum HMGB1 may have certain significance for the diagnosis of intussusception in infants.

intussusception;infant;high mobility group box-1 protein

R91

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.01.009

1005-8982（2017）01-0046-04

2016-06-02

湖北省卫生厅课题（No：JX3B24）