高效液相色谱法测定奥拉西坦注射液中奥拉西坦的含量

唐燕

【摘 要】 目的：建立用高效液相色谱法测定奥拉西坦注射液中奥拉西坦的含量方法。 方法：色谱柱为Inertsil ODS-SP（4.6×250mm，5μm），流动相为0.05mol/L的磷酸二氢钾（用磷酸调节pH至3.0），检测波长为220nm，流速为0.6ml/min。结果：在选定的色谱条件下，空白辅料不干扰主成分的检测，奥拉西坦的浓度在54.25μg/ml～434.00μg/ml范围内与峰面积的线性关系良好（r=0.9998，n=5）；方法精密度及稳定性良好；方法平均回收率为99.53%。结论：本方法准确、简便，专属性强，灵敏度高，可用于奥拉西坦注射液的含量测定。

【关键词】 高效液相色谱法 奥拉西坦注射液 含量测定

奥拉西坦是由意大利ISF公司于1974 年首先合成的吡咯烷酮类γ-氨基丁酸的环形衍生物，化学名4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺，于1987年在意大利首次上市，商品名为Neupan，有口服剂型和注射剂型[1]。为新一代脑代谢改善药吡拉西坦的类似物，能透过血脑脊液屏障，作用强于吡拉西坦[2]-[3]。我国于1991年开始研制，1997年由国家药品监督管理局批准其原料和胶囊上市，2005年批准注射液上市。自上市以来，国内外大量的研究表明，该药可用于治疗理化因素引起的脑损伤，各种脑缺氧和慢性脑功能不全等。对痴呆、老年性精神衰退综合症（如记忆衰退、适应性降低、老年虚弱和精神活动障碍等）、低能儿童的大脑发育以及正常人的记忆力、工作效率的提高均有一定疗效。本文参考文献“湛建峰，黄海伟，刘朝霞，张启明，HPLC法测定奥拉西坦氯化钠注射液中奥拉西坦含量及其有关物质” [4]采用HPLC法测定奥拉西坦注射液的含量，并对方法进行了验证，为控制该产品的质量提供了依据。

1 仪器与试药

美国SSI1500型高效液相色谱仪；奥拉西坦对照品（来源：中国食品药品检定研究院，批号：101032-201402，含量：99.6%），奥拉西坦注射液（四川唯拓生物医药有限公司自制，批号：160401、160601、160602、160603）；磷酸二氢钾为分析纯。

2 色谱条件

以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0）；检测波长为220nm；流速为0.6 ml/min。

3 方法学考察

3.1 专属性试验

空白辅料溶液的制备：按处方量精密称取空白辅料适量，按供试品溶液的制备法制备，即得。

供试品溶液的制备：取本品（批号：160401）1.0ml，置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液母液。再精密量取供试品溶液母液1.0ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：精密称取奥拉西坦对照品10mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度， 摇匀，即得对照品溶液。

取空白流动相、空白辅料溶液、供试品溶液及对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，结果空白流动相及空白辅料（依地酸钙钠）与供试品溶液主峰分离较好，符合要求。结果见图1。

3.2 线性关系与范围

精密称取奥拉西坦对照品10mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得母液。精密量取母液，用流动相稀释制成一系列浓度梯度的对照品溶液，精密量取各浓度的对照品溶液20μl，进样，记录色谱图，并以样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作线性回归图，结果得到线性方程y=6975.9x-2763.4（r=0.9998，n=5），奥拉西坦浓度与峰面积在54.25μg/ml～434.00μg/ml浓度范围线性关系良好。

3.3 精密度试验

3.3.1 进样精密度

取奥拉西坦对照品溶液连续进样5针，计算峰面积的RSD（%），结果为0.74%。

3.3.2 重复性试验

取本品（批号：160401），制备6份供试品溶液，分别进样测定，按外标法测定标示百分含量并计算RSD（%）。结果平均含量为99.63%，RSD（%）为0.48%。

3.3.3 回收率试验

按处方量的80%、100%、120%各三份进行回收率试验。于空白辅料中，按本品处方量（1ml注射液中含有200mg奥拉西坦）加入奥拉西坦对照品适量，用流动相稀释制成低、中、高三种浓度溶液，作为供试品溶液；取奥拉西坦对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml中奥拉西坦200μg的溶液，作为对照品溶液。分别进样20μl，按外标法分别测定含量并计算回收率，结果平均回收率为99.53%，RSD（%）为0.34%。

3.4 稳定性考察

3.4.1 对照品溶液稳定性考察

精密称取奥拉西坦对照品适量，用流动相制成每1ml中约含奥拉西坦200μg的溶液，置冰箱4℃保存，对照品溶液在放置过程中澄清、透明，在不同时间（0H、2H、4H、6H、8H、24H）分别进样测定，记录色谱峰面积，结果峰面积RSD（%）为0.58%，表明对照品溶液在冰箱4℃放置24小时内基本稳定。

3.4.2 供试品溶液稳定性

取本品（批号：160401），制备供试品溶液1份，于室温下放置，在不同时间（0H、2H、4H、6H、8H）分别进样测定，记录色谱峰面积，结果峰面积RSD（%）为0.75%，表明供试品溶液在室温下放置8小时内稳定。

3.5 样品中含量测定结果

用所验证的奥拉西坦注射液含量测定方法，检测三批中试样品（批号：160601、160602、160603）结果分别为99.66%、99.12%和99.72%。

4 结论

本文所述的方法准确、简便，专属性强，灵敏度高，可用于奥拉西坦注射液的含量测定。

参考文献

[1] 孙洁.奥拉西坦基础及临床应用研究.中外医疗，2009，27（12）。

[2] 张玉明.奥拉西坦与吡拉西坦治疗脑卒中后认知功能障碍的疗效对比.中国实用神经疾病杂志，2015（14）：28-30。

[3] 闫俊杰.奥拉西坦与吡拉西坦治疗脑卒中后认知功能障碍的疗效对比.医药与保健 2015（7）：91-92。

[4] 湛建峰，黄海伟，刘朝霞，张启明.HPLC法测定奥拉西坦氯化钠注射液中奥拉西坦含量及其有关物质.药物分析杂志，2009，29（12）：2077-2080。