超声介导下对正常犬行肝脏活组织检查

苏 喆 ， 叶晓敏 ， 谢富强

(1.中国农业大学动物医学院，北京海淀100193； 2.河南牧业经济学院，河南郑州450046)

超声介导下对正常犬行肝脏活组织检查

苏 喆1， 叶晓敏2， 谢富强1

(1.中国农业大学动物医学院，北京海淀100193； 2.河南牧业经济学院，河南郑州450046)

超声介导活组织检查分为细针抽吸活组织检查(FNA)及组织芯活组织检查(TCB)。国外兽医已经将其作为临床常规诊断方法。近年来，国内兽医应用超声介导FNA越发普及[1]，但TCB应用较少，且国内关于两种活组织检查方法安全性、术后恢复情况评估的研究依然不足。本文通过对正常犬肝脏组织及局部坏死灶模型进行超声介导活组织检查，分别评价此操作的安全性、准确性以及TCB术后恢复情况。

1 试验方法

1.1 试验动物分组 本试验选用12只小型成年杂种试验犬，随机选取6只试验犬作为造模组，用于准确性研究；6只试验犬作为非造模组，用于安全性研究。

1.2 肝脏局部坏死灶模型制作 全身麻醉后超声介导下向造模组试验犬左肝外叶腹侧、背侧及右肝外叶腹侧、背侧局部注射70%乙酸-氯化钠溶液(0.05 mL/次)，制作肝脏局部坏死灶模型。

1.3 FNA 超声介导下对造模组试验犬肝脏局部坏死灶模型及非造模组试验犬肝脏相同部位进行FNA。术后即刻进行超声检查；术后5 h进行超声、血液常规检查；术后24、48、72 h进行超声、血液常规、血液生化检验。将活检所得样本进行细胞学检查。

1.4 TCB 两组试验犬于FNA术后1周进行肝脏TCB。全身麻醉后超声介导下对造模组试验犬肝脏局部坏死灶模型及非造模组试验犬肝脏相同部位进行TCB。术后定期对试验犬进行影像学、血液学检验。将活检所得样本进行组织学检查。

1.5 剖检 于术后第2、4、6周随机选择两组试验犬各1只实施安乐死并进行剖检，于术后第8周将剩余两组试验犬各3只实施安乐死并进行剖检。取肝脏活检部位及正常肝脏组织样本进行组织学检查。

2 试验结果

2.1 肝脏局部坏死灶模型 于注射后即刻对相应部位进行超声检查，可见注射部位回声显著增强、局部伴不洁声影、与周围正常组织界限清晰可辨。24 h后再次进行超声检查，可见局部坏死灶呈椭圆形至不规则边界清晰的强回声区，大小较为固定(直径0.51±0.03 cm)。

2.2 FNA

2.2.1 FNA准确性 本研究中造模组试验犬共6只，肝脏局部坏死灶模型共24个。FNA活检共27次，其中穿刺失败3次(1次穿刺失准，2次样本不合格)。本研究中肝脏FNA准确率为24/27(88%)。

造模组细胞学涂片可见大量红染的渗出或细胞坏死崩解后产物。细胞成分包括正常的肝细胞及坏死细胞(见中插彩版图1)。非造模组细胞学涂片均为正常肝细胞。

2.2.2 FNA安全性 穿刺过程中及穿刺完毕出针后即刻对穿刺部位进行超声检查以监测积液、出血等活组织检查并发症。术后即刻、5、24、48、72 h进行超声检查，其中部分犬肝脏周围出现微量积液及穿刺路径少量气体残留，基本于穿刺后72 h之内逐渐减小直至消失。对比术前术后测量数据差异不显著，肝脏形态无明显改变。术后5 h检查试验犬红细胞压积(HCT)与术前检查所得数据进行对比，部分犬术后HCT较术前有所下降，但仍处于正常范围内；下降幅度均未达到术前检查数据的10%，结合超声检查结果得出未见严重出血的结论，无需进行手术或药物干预。

2.3 TCB

2.3.1 TCB准确性 本试验中造模组试验犬共6只，肝脏局部坏死灶模型共24个。TCB活检共31次，其中穿刺失败7次(3次穿刺失准，4次样本不合格)。本试验中肝脏TCB准确率为24/31(77%)。

造模组组织学切片可见出血及坏死肝组织(见中插彩版图2)。非造模组组织学切片为正常肝组织。

2.3.2 TCB安全性 穿刺过程中及出针后即刻对穿刺部位进行超声扫查以监测积液、出血等活组织检查并发症。与FNA结果相似，部分试验犬穿刺部位于术后出现无回声暗区，且无回声暗区基本于术后72 h之内逐渐减小直至消失。结合血液学检查及超声检查得出未见严重出血的结论，无需进行手术或药物干预。

2.4 活检术后恢复情况 造模组犬肝脏受坏死灶影响，难以评价TCB活检部位恢复情况。故于TCB术后2、4、6、8周对非造模组犬实施安乐死并进行尸体剖检。眼观活检部位未见结缔组织粘连，针孔处随时间变化逐渐平滑，颜色逐渐与周围肝组织一致。

取活检部位肝脏组织进行组织学检查(见中插彩版图3)。总体结果恢复时间越长，针道直径越小、修复情况越好。遗憾的是，于第8周剖检所得样本中结缔组织均未完全充满整个针道、红细胞溶解的情况依旧持续存在。根据结缔组织、新生血管、组织细胞及红细胞溶解的程度可得出损伤未完全修复的结论。

3 分析与讨论

3.1 超声介导肝脏活检准确性 比较本试验肝脏FNA、TCB穿刺准确率可知FNA穿刺准确率高于TCB。FNA穿刺针(18～22G)直径小，穿刺时无需用力即可轻易穿透皮肤、腹壁及靶器官包膜，且对固定靶器官要求较低[2]。TCB活检针(14～18G)直径大，即使预先做皮肤切口，在穿透腹壁、靶器官包膜时亦需要用力较大，否则靶器官容易移位。

3.2 超声介导肝脏活检安全性 Watson等人认为，发生血小板减少症(血小板计数小于120×109/L)或凝血障碍(活化部分凝血活酶时间APTT大于18 s，凝血酶原时间PT大于9.1 min)时为活检禁忌症，应谨慎进行风险评估[3]。本试验中试验犬均体况良好、术前检查未见明显异常，故试验中未出现严重并发症，无需手术干预或用药治疗。Christensen等人指出也可在术前12 h使用维生素K进行保护性用药[4]。

超声检查表明，在试验条件下，活组织检查并发症少且程度轻微。实时超声扫查中可见穿刺部位出现无回声暗区。根据靶器官的性质判断应为少量出血或积液。该超声征象仅出现在活组织检查完毕即刻及术后5 h，一般于术后24 h便无法探查。推断其原因有两点：一是出血或积液量很少，散布在腹膜腔中迅速吸收；二是出血后形成散在的血凝块，其超声征象不易与周围软组织区分。无论是FNA还是TCB，出针后应立即用无菌纱布或止血明胶[5]压迫穿刺部位，压迫时间应根据靶器官、进针位点皮肤组织情况适当调整。TCB术后压迫时间可较长，待未见出血后再进行超声检查。

术后血液学检查结果表明，FNA、TCB对靶器官功能影响差异不显著。

3.3 肝脏活检术后组织恢复情况 术后第2天活检部位超声征象便与术前检查无明显差异，但剖检与组织学切片显示损伤尚未修复。本试验试验犬靶器官损伤于术后8周仍未恢复，故8周内对同一部位进行连续活检无临床诊断意义。

[1] Cuccovillo A , Lamb C R. Cellular features of sonographic target lesions of the liver and spleen in 21 dogs and a cat[J]. Veterinary Radiology & Ultrasound, 2002. 43(3): 275-278.

[2] Kerwin S C. Hepatic aspiration and biopsy techniques[J]. Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice, 1995， 25(2): 275-291.

[3] Watson A T, Penninck D, Knoll J S,etal. Safety and correlation of test results of combined ultrasound-guided fine-needle aspiration and needle core biopsy of the canine spleen[J]. Veterinary Radiology & Ultrasound, 2011， 52(3): 317-322.

[4] Christensen N I, Canfield P J, Martin P A,etal. Cytopathological and histopathological diagnosis of canine splenic disorders[J]. Australian veterinary journal, 2009， 87(5): 175-181.

[5] Falstrom J K ,Moore M M,Caldwetl S H. Use of fibrin sealant to reduce bleeding after needle liver biopsy in an anticoagulated canine model: work in progress[J]. Journal of vascular and interventional radiology, 1999， 10(4): 457-462.

2016-03-24

国家重点研发计划(2016YFD0501010)

苏喆(1989-)，男，硕士，从事小动物临床影像诊断工作，E-mail：sz1412@126.com

谢富强，E-mail: xiefuqiang@cau.edu.cn

4.4

B

0529-6005(2017)03-0078-02